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白藜芦醇对心肌肥大细胞内质网应激时GRP78和GRP94表达的影响
目的：探讨白藜芦醇对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用及对心肌肥大时内质网应激相关因子GRP78和GRP94表达的影响。方法：利用异丙肾上腺素诱导乳鼠心肌细胞建立心肌肥大细胞模型，将心肌细胞分为正常对照组、模型组（加入异丙肾上腺素0．3 mg／L作用48 h），白藜芦醇＋异丙肾上腺素组（加入异丙肾上腺素0．3 mg／L和白藜芦醇11．4 mg／L作用48 h）和白藜芦醇对照组（加入白藜芦醇11．4 mg／L）。检测心肌细胞表面积和心肌肥大标志物ANP表达评价心肌细胞肥大程度，检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（ LDH）活性和丙二醛（ MDA）含量； Western blot 分析GRP78和GRP94的蛋白表达。结果：模型组与正常组比较，异丙肾上腺素作用心肌细胞48 h诱导心肌细胞肥大，内质网应激相关因子GRP78和GRP94蛋白表达均增高；白藜芦醇＋异丙肾上腺素组与模型组比较，白藜芦醇（11．4 mg／L）干预可以有效抑制异丙肾上腺素诱导的细胞肥大，同时降低GRP78和GRP94的蛋白表达，减少细胞培养液中乳酸脱氢酶LDH和MDA的释放。结论：白藜芦醇通过抑制内质网应激相关因子GRP78和GRP94表达，减轻自由基生成发挥对心肌肥大的保护作用。
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外源性H2 S调控Nampt－Sirt3－CPT／LCAD乙酰化水平改善糖尿病心肌线粒体脂肪酸氧化
目的：Sirtuin 3（Sirt3）是线粒体中NAD＋依赖去乙酰化酶，通过赖氨酸乙酰化调节线粒体能量代谢。气体分子H2S具有抗氧化应激、蛋白质硫化和乙酰化等功能。本实验探讨外源性H2 S调控2型糖尿病心肌线粒体脂肪酸氧化及其关键酶的机制。方法及结果：采用db／db小鼠作为2型糖尿病动物模型，给予外源性H2 S作为治疗组（腹腔注射NaHS 30μg／kg 12周）。 Western blot及免疫荧光检测显示db／db小鼠心肌组织CSE的表达及H2 S含量均明显低于NaHS组。提取心肌组织线粒体，给予外源性H2 S组脂肪酸氧化水平、CPT及LCAD的活性及蛋白表达水平明显低于 db／db小鼠。 Co－IP及LC－MS／MS分析，结果显示在db／db小鼠中CPT及LCAD的乙酰化水平明显高于NaHS组，线粒体氧耗呼吸率及线粒体ATP含量明显低于NaHS组。 Western blot结果证实db／db小鼠心肌线粒体中Sirt3、Nampt的表达及NAD＋／NADH的比值明显低于给予外源性H2 S组。高糖高脂处理乳鼠心肌细胞，给予Nampt抑制剂FK866及NaHS，Sirt3的表达下降，但CPT及LCAD表达、活性及乙酰化水平明显增高。结论：本实验证实气体分子H2 S通过调控Nampt－Sirt3－CPT／LCAD乙酰化水平改善高糖高脂时心肌线粒体的脂肪酸氧化。
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聚合酶链反应芯片筛选5-氟尿嘧啶对乳鼠心肌细胞心脏毒性差异表达基因的作用
目的 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)芯片技术观察5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对乳鼠心肌细胞心脏毒性相关基因表达的调控作用.方法 利用差速贴壁法分离培养乳鼠心肌细胞,分为对照组和5-FU刺激组.提取并纯化细胞RNA,紫外分光光度计检测RNA提取物浓度、变性琼脂糖凝胶电泳检测其纯度及完整性.选择包含84个已知心脏毒性相关基因的PCR芯片,采用比较阈值(△△Ct)法分析两组基因的表达差异.以表达差异(即上调或下调)大于2倍的基因为有意义的差异基因.结果 共有48条基因出现差异表达,其中5条基因表达上调,43条基因表达下调.结论 利用PCR芯片技术筛选相关基因,为深入阐明5-FU心脏毒性的作用机制提供了新思路.
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高糖对乳鼠心肌细胞葡萄糖转运载体-4的影响
目的 探讨应用不同葡萄糖浓度干预心肌细胞对大鼠心肌细胞摄糖能力的影响以及葡萄糖转运载体-4 (Glucose transporters-4, Glt-4)在其中的可能作用.方法 (1)不同葡萄糖浓度(5.5 、11.0 、16.5 、22.0、27.5 、33.0 mmol/L)干预心肌细胞48 h;(2)放射同位素法检测3H-DG的摄取,免疫细胞化学、Rt-PCR和Western blotting方法检测Glt-4表达.结果 (1)与5.5 mmol/L 葡萄糖比较,除11.0 mmol/L 葡萄糖(P=0.075)外,其余不同葡萄糖浓度均可显著降低心肌细胞摄糖能力(P<0.01);(2)高糖干预时心肌细胞Glt-4 mRNA和蛋白的改变均没有统计学意义(P>0.05);(3)与5.5 mmol/L 葡萄糖比较,除11.0 mmol/L 葡萄糖(P=0.051)外,其余不同葡萄糖浓度干预均可显著降低心肌细胞膜Glt-4蛋白表达 (P＜0.05);(4)心肌细胞摄糖能力和细胞膜 Glt-4 蛋白呈显著正相关(r=0.419, P=0.049).结论 高糖可能通过抑制Glt-4膜转位减弱心肌细胞摄糖能力.
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乳鼠心肌细胞缺氧时survivin基因和凋亡的相关性
目的 应用氯化钴(CoCl2)诱导乳鼠心肌细胞缺氧凋亡,探讨缺氧条件下大鼠心肌细胞survivinmRNA和蛋白的改变以及与心肌细胞凋亡的相关性.方法 (1)不同浓度(0,10,100,200,500,1 000 μmol/L)CoCl2干预心肌细胞;(2)流式细胞仪(Annexin V FITC/PI)分析细胞凋亡率(AR)和死亡率(DR);(3)免疫细胞化学、Rt-PCR和Western blot方法 明确survivin的表达.结果 (1)与常氧(CoCl2 0 μmol/L)比较,除10μmol/LCoCl2(P=0.069)外,其余不同浓度CoCl2干预均可显著增加心肌细胞AR(P<0.01)和DR(P<0.01);(2)与常氧比较,不同浓度CoCl2干预均可显著增加心肌细胞survivin mRNA(0.127±0.004、0.186±0.011、0.154±0.008、0.146±0.003、0.141±0.005和0.137±0.004,P<0.01)和蛋白(0.353±0.012、1.588±0.021、1.016±0.019、0.899±0.042、0.823±0.018和0.549±0.011,P<0.01)的表达,均以10 μmoL/L CoCl2时表达高,且随CoCl2干预浓度增加而呈下降趋势(P<0.05);(3)心肌细胞AR和survivin mRNA(r=-0.617,P=0.014)及蛋白(r=-0.549,P=0.009)显著负相关.结论 缺氧可致心肌细胞发生凋亡并表达survivin mRNA和蛋白,在其凋亡进程中,survivin基因可能减轻心肌细胞的凋亡.
关键词： 乳鼠心肌细胞 缺氧 凋亡 Survivin基因 -
薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用
目的:研究薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制.方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以不同剂量的薯蓣皂苷进行干预.实验分为5组:空白对照组、缺氧/复氧组、薯蓣皂苷低、中、高剂量(10,20,40μmol/ml)干预组.MTT法检测心肌细胞存活率;TUNEL法检测心肌细胞凋亡百分率;Fluo-3负载激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化;硝酸还原酶法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度.结果:与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,心肌细胞[Ca2+]i荧光强度明显减弱,心肌细胞培养液中NO浓度降低.结论:薯蓣皂苷能有效抑制缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞的凋亡,其可能与减轻细胞内钙超载,抑制受损心肌细胞NO升高,减轻过量NO的细胞毒性作用有关.
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乌头碱对乳鼠心肌细胞的毒性作用
目的 研究乌头碱对乳鼠心肌细胞的毒性作用.方法 分离培养SD乳鼠心肌细胞,给予100.0、10.0、1.0、0.1 μg·ml-1的乌头碱染毒后,观察乳鼠心肌细胞的形态及细胞搏动的情况,测定丙二醛(MDA)的含量,并采用MTT法检测细胞存活率.结果 随着乌头碱浓度的增加,心肌细胞存活率下降.与对照组相比,乌头碱浓度＞1.0 μg·ml-1时,心肌细胞的存活率显著降低(P＜0.01),MDA的含量随剂量的增加而明显升高(P＜0.01).结论 乌头碱浓度＞1.0 μg·ml-1时,对乳鼠心肌细胞有明显的氧化损伤作用,同时表现出较强的细胞毒性.
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异紫堇啡碱对培养乳鼠心肌内游离钙的影响
目的观察异紫堇啡碱(ISOC)对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致培养乳鼠心肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)增高的影响,初步分析该药心脏效应的作用原理.方法利用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载的培养乳鼠心肌细胞,动态地观察在ISOC存在下,由NA和高钾所增加的[Ca2+]i改变.结果 ISOC对培养乳鼠心肌细胞的静息[Ca2+]i无影响,其在10-5和3×10-5mol/L时也不显著抑制高钾所致心肌细胞[Ca2+]i的增高,但能降低由NA所升高的心肌细胞[Ca2+]i.结论 ISOC抑制由受体中介的心肌细胞[Ca2+]i的增高.
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缺氧诱导乳鼠离体心肌细胞凋亡的实验研究
目的:旨在建立一种新的SD乳鼠心肌细胞的缺氧模型,探讨心肌细胞缺氧损伤后的细胞凋亡及其时序分布特点,并探讨缺氧损伤后的心肌细胞凋亡的可能机制.方法:SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为5组:对照组,缺氧12小时组(I12h)、缺氧24小时组(I24h),缺氧48小时组(I48h)以及缺氧72小时组(I72h).应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳、光镜等多种手段检测心肌细胞凋亡的改变.结果:在本实验的心肌细胞缺氧模型中,流式细胞仪检测发现,心肌细胞缺氧后的细胞凋亡百分率迅速增高.琼脂糖凝胶电泳分析,心肌细胞在缺氧48h、72h时均出现了凋亡特异性的"梯状"电泳带.结论:本实验培养乳鼠心肌细胞缺氧模型可导致心肌细胞凋亡,凋亡程度和心肌细胞缺氧时间有关,并可导致和在体心肌缺血相似的心肌损伤.细胞凋亡在心肌缺氧心肌细胞死亡中起重要作用.
关键词： 缺氧 乳鼠心肌细胞 流式细胞术 DNA琼脂糖凝胶电泳 心肌细胞凋亡
