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端锚聚合酶1反义寡核苷酸对人肺癌细胞增殖的影响
目的探讨端锚聚合酶1(tankyrase 1,TANK1)反义寡核苷酸对人肺癌细胞的影响,为肺癌治疗的靶向研究探索新途径.方法合成TANK1正义寡核苷酸(TANK1-SODN)、反义寡核苷酸(TANK1-ASODN),待人肺癌细胞株CALU在裸鼠蹊部皮下接种成瘤后,将成瘤裸鼠随机分成3组:对照组4只(每天上午于瘤体内多位点注射生理盐水200 μl/只),正义组(每天同法注射含TANK-SODN 100 μg的生理盐水200 μl/只)和反义组(每天同法注射含TANK-ASODN 100 μg的生理盐水200 μl/只)各5只,观察肿瘤的生长情况及组织学改变.用链霉亲和素-生物素-酶复合物(SABC)法检测肿瘤细胞Ki67及端粒酶反转录酶(hTERT)的阳性表达率.结果在裸鼠成瘤部位连续注射相应液体16 d后,反义组移植瘤体积为(1.46±0.70)cm3,明显小于对照组的(3.29±0.47)cm3及正义组的(3.14±0.70)cm3,差异有显著性(P均<0.01);肿瘤细胞Ki67标记指数及hTERT细胞阳性率均明显低于对照组及正义组(P均<0.01).结论人肺癌细胞株端粒酶呈高度表达,TANK1-ASODN可降低瘤细胞端粒酶活性,抑制肺癌细胞增殖.
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趋化因子CXC受体3在博莱霉素诱导的肺纤维化中的作用
目的采用趋化因子受体即CXCR3基因敲除小鼠,探讨CXCR3在博莱霉素诱导的肺损伤及纤维化中的作用.方法采用基因打靶技术得到无CXCR3基因小鼠62只,同时选择性别、年龄和体重配对的野生型小鼠48只,随机分入不同的实验组及对照组.大鼠气管内注入博莱霉素0.025U.实验动物按要求处死后,取无血的肺组织切片,经10% 甲醛固定后,用苏木精-伊红(HE)和Masson trichrome染色,分别观察实验动物肺炎症和纤维化的程度;用浓盐酸消化肺组织提取羟脯氨酸并定量来表示肺胶原的含量;用磷酸盐缓冲液(PBS)灌洗肺组织,酶联免疫吸附(ELISA)法测定灌洗液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素5(IL-5)及转化生长因子β(TGF-β)的浓度;用流式细胞仪检测T细胞亚群.结果气管内注入博莱霉素后14 d,CXCR3基因敲除小鼠肺组织炎症程度及纤维化程度较野生型小鼠明显减轻.肺组织炎症程度评分和羟脯氨酸含量(左肺)在CXCR3基因敲除小鼠分别为3.92±0.37和(67.0±24.2) μg,在野生型小鼠则分别为5.33±0.34和(211.5±24.2)μg,两组比较差异有统计学意义(P分别<0.05,<0.01);TGF-β水平在CXCR3基因敲除小鼠为(2 211±289)μg/L,在野生型小鼠为(5 388±1 071)μg/L,两者差异有统计学意义(P<0.05).注入博莱霉素第7天,肺组织中性粒细胞、淋巴细胞和CD+4 T淋巴细胞数目在CXCR3基因敲除小鼠分别为(3.25 ± 0.61)×105、(8.15±1.96 )×105和(9.00±1.00)×104个,在野生型小鼠分别为(6.13±0.86)×105、(13.48±1.47)×105和(15.60±2.00)×104个,两组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);肺组织中IL-5,TNF-α水平在CXCR3基因敲除小鼠分别为(1 023±113)、(403±50)μg/L,在野生型小鼠分别为(1 530±178)、(755±95)μg/L,两组比较差异有统计学意义(P均<0.05).结论 CXCR3可能通过CD+4 T淋巴细胞浸润气道,进而激活一系列致纤维化因子,从而在博莱霉素诱导的肺损伤及纤维化中起作用.阻断CXCR3可能为肺纤维化的治疗提供新的途径.
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海藻硫酸多糖对肺癌增殖的抑制作用及其机制
目的探讨海藻硫酸多糖(SPA)对肺癌增殖的抑制作用及其可能的机制.方法(1)建立Lewis肺癌小鼠模型,以抽签法随机分为对照组,SPA 20、40、80 mg/kg组及替加氟(FT-207)组,每组10只,从接种肿瘤次日开始分别灌服生理盐水,SPA 20、40、80 mg/kg及FT-207 150 mg/kg,连续10 d.末次给药后24 h处死小鼠,剥取肿瘤,称瘤重,计算抑瘤率.同时应用体外细胞培养模型,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测SPA在体外对肺癌细胞增殖的影响.(2)取雄性新西兰兔6只,按抽签法随机分为对照组、SPA组及环磷酰胺(CTX)组,分别口服生理盐水、SPA 500 mg/kg、CTX 100 mg/kg,连续10 d.后1次灌药后2 h,采集含药血清,通过流式细胞仪观察SPA及其含药血清对A549肺癌细胞增殖、凋亡、细胞周期以及凋亡相关基因p53、bcl-2的影响.结果 (1)20、40、80 mg/kg SPA连续灌服给药10 d,对小鼠Lewis肺癌的生长具有明显抑制作用,抑制率分别为35.27%、48.29%和65.41%.体外SPA在25～100 μg/ml范围内对A549肺癌细胞生长无明显抑制作用(P>0.05).(2)含SPA兔血清在体外可明显抑制肺癌细胞增殖、诱导癌细胞凋亡,出现明显的细胞周期阻滞.A549细胞株经含SPA兔血清作用后,p53阳性蛋白标记率显著增加,bcl-2阳性蛋白标记率明显低于对照组,且呈浓度依赖性.结论 SPA对肺癌增殖具有明显的抑制作用,其机制可能是通过对凋亡相关基因的调节作用,影响细胞周期并介导肺癌细胞凋亡.
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重组中国人γ干扰素对小鼠肺损伤的防治作用
目的观察重组中国人γ干扰素(INF-γ)对博莱霉素(BLM)所致小鼠肺损伤(PI)的防治作用.方法 75只C57小鼠随机分为对照组、BLM组、BLM+INF-γ小剂量组(0.25 μg/d)、BLM+INF-γ中剂量组(0.5 μg/d)、BLM+INF-γ大剂量组(1.0 μg/d),每组15只. 实验组小鼠以BLM诱导PI,分别用不同剂量的INF-γ进行防治.对照组小鼠不进行任何处理.实验结束后处死小鼠分别进行肺羟脯氨酸(hydroxyproline, Hyp)测定,用图像分析法计算Ⅰ、Ⅲ型胶原面积与切片面积,肺泡面积与肺视野面积比.结果对照组小鼠肺组织Hyp为(0.65± 0.06) μg/mg、BLM组为(0.78±0.08) μg/mg,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01);对照组Ⅰ、Ⅲ型胶原为(0.004±0.001)、BLM组为(0.048± 0.006),两者比较差异有统计学意义(P＜0.01);BLM+INF-γ大剂量组大鼠肺组织Hyp为(0.67±0.08)、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量为(0.008±0.001)与对照组相比差异均有统计学意义(P均＜0.01);各组肺泡与肺组织面积比随着INF-γ的剂量增加而增高,分别为1.78、0.12、0.67、0.73、1.65.结论 INF-γ能有效抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,减少肺内胶原合成,对PI有一定防治作用.
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基因转移CTLA4-Ig和抗CD154抗体在异种胰岛移植排斥反应中的作用
目的 探讨基因转移细胞毒性T细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)和抗T细胞分化群154(CD154)抗体在异种胰岛移植排斥反应中的作用及机理.方法 建立人-大鼠异种胰岛移植模型,用携带CTLA4-Ig基因的重组腺病毒感染移植胰岛细胞,并用抗CD154抗体进行治疗,观察糖尿病大鼠胰岛移植后血糖变化、生存情况及移植物病理形态学改变,检测移植物CTLA4-Ig、胰岛素的表达和移植大鼠白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平变化.结果 (1)糖尿病大鼠移植后2 d血糖降至正常,对照组血糖平均在移植后8 d升高,抗体治疗组、转染组和联合治疗组血糖分别在18、25和36 d升高.(2)对照组、抗体治疗组、转染组和联合治疗组的移植物存活时间分别为(10.0±2.1)d、(22.0±8.2)d、(28.0±6.5)d和(37.0±9.3)d,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);移植大鼠生存时间分别为(21.0±5.7)d、(35.0±6.5)d、(48.0±8.5)d和(65.0 ±12.5)d,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).(3)对照组在移植后1周内,IL-2、TNF-α的水平均急剧上升,较移植前显著升高(P＜0.01).(4)各治疗组移植物见成片的胰岛细胞团,未见淋巴细胞浸润,转染组和联合治疗组移植物可见CTLA4-Ig和胰岛素的表达.结论 基因转移CTLA4-Ig和抗CD154抗体均可抑制异种胰岛移植排斥反应,二者联合效果优于单独使用.
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免疫基因介入疗法治疗大鼠转移性肝癌的实验研究
目的:观察经动脉插管导入肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素2(IL-2)重组腺病毒对转移性大鼠肝癌模型的治疗作用.材料和方法:用293细胞扩增人TNF-α和IL-2重组腺病毒,并测定病毒滴度;9组大鼠于胃十二指肠动脉分别注人Ad.lacZ(2×109pfu/m1),采用X-Gal染色方法检测lacZ基因在各个脏器的表达;Walker256乳癌细胞感染人TNF重组腺病毒后,观察其体外增殖能力、皮下致瘤性的变化及进行肿瘤局部病理学检查;瘤体局部注射TNF重组腺病毒,观察荷瘤大鼠的肿瘤生长情况及生存期;取大鼠乳腺癌细胞株(Walker256)转染至肝脏的荷瘤大鼠动物模型,分为hTNF组,人IL-2(hlL-2)组,hTNF+hlL-2组,病毒对照组(lacZ组)和培养液对照组进行治疗,观察大鼠生存期.结果:所制备的人TNF-α和IL-2重组腺病毒滴度为2×l09Dfu/ml和2.1×l09pfu/ml;实验组于12h取材,经染色lacZ基因在肝脏中即有表达,而此时脾、肺、肾等内脏器官尚未见表达,21d该基因在肝脏仍有表达,而在其他脏器如脾、肺及肾表达仅维持14d;转染基因瘤株体外增殖能力和皮下致瘤性显著下降,瘤体周围有大量淋巴细胞及单核细胞浸润;肿瘤局部注射Ad.hTNF能显著抑制Walker256的生长,并延长荷瘤大鼠的生存期;单独注射TNF-α或IL-2重组腺病毒能有效延长转移性肝癌大鼠的存活期;这两种重组腺病毒单独使用时,治疗效果之间无显著性差异;联合应用这两种重组腺病毒比单一使用TNF-α或IL-2重组腺病毒能更有效地延长荷瘤大鼠的存活期.结论:经肝动脉插管注射目的基因重组腺病毒,是基因治疗肿瘤的一种较为有效的途径,为细胞因子基因的临床应用打下了基础.
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外消旋聚乳酸/神经生长因子复合导管中神经生长因子的合适含量
目的探讨外消旋聚乳酸/神经生长因子(PDLLA/NGF)复合导管中促进大白鼠神经再生的神经生长因子的合适含量.方法 Wistar雌性大白鼠40只,随机分为5组,每组8只.各组采用PDLLA/NGF复合导管中的NGF含量分别为100u、250u、400u、500u和800u.将每组动物的右侧坐骨神经造成10mm缺损的间隙,分别以不同NGF含量的PDLLA/NGF复合导管桥接缺损.术后6个月检测比较各组坐骨神经的再生情况.结果 NGF含量为400u和500u的PDLLA/NGF复合导管桥接组的神经再生情况显著优于其它3组(P＜0.01或P＜0.05),而该2组间的差异无统计学意义(P＞0.05).其余3组中,NGF含量为800u组的神经再生情况差.结论 PDLLA/NGF复合导管中NGF的含量为400～500 u左右,对促进大白鼠神经再生为合适.NGF含量过高反而不利于神经再生.
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光动力疗法对实验性视网膜母细胞瘤移植瘤超微结构的影响
目的:评价血卟啉衍生物(HPD)介导的光动力疗法(PDT)对裸鼠眼内视网膜母细胞瘤(RB)移植瘤超微结构的影响。方法:将15只裸小鼠视网膜母细胞瘤眼内动物模型眼分成A、B、C、D及E五组，其中A和B组为观察组，即既给光敏剂HPD又照光，但光照剂量不同，A组为150mw/cm2，B组为300mw/cm2；C组不给光敏剂，只照光；D组只给光敏剂HPD，不照光；E组为未作任何处理的对照组。血卟啉衍生物剂量为5mg/kg，经尾静脉注射给药。照光时机为光敏剂注射后72小时。照光仪的绿激光波长为532nm。照光后24小时摘除眼球作透射电镜检查。结果:①实验组A：肿瘤细胞结构不完整，胞质呈浓缩状。核膜不完整，核染色质浓缩成块或裂解成碎片。②实验组B：肿瘤细胞破坏程度更明显，看不到完整的细胞轮廓，也见不到膜性结构及细胞器，仅见一些呈浓缩状态的片状物质，见不到完整的细胞核。③对照组E组：未见组织或细胞损害。瘤细胞轮廓清晰，胞膜完整。胞质内有丰富的线粒体、粗面内质网、核糖体。核膜完整，核间隙未见明显增宽。C组和D组瘤细胞超微结构的改变状况同E组。结论：本研究结果提示：血卟啉衍生物介导的光动力作用对裸鼠眼内RB移植瘤具有显著的杀伤作用，高照光剂量下肿瘤细胞坏死程度更明显。
关键词： 光化学疗法 视网膜母细胞瘤/超微结构 动物实验替代实验 -
创伤弧菌感染致多器官损伤的超微结构观察及致病机制
目的:通过电镜观察创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)所致多器官损伤的超微结构改变情况,探讨其发病机制.方法:临床组6例,取自临床Vv感染的皮肤、肌肉的活检组织;实验组12只昆明小鼠,在腹腔、肌肉、皮下(各4只)接种Vv菌液0.2 ml/只(约4.34×106CFU);对照组4只昆明小鼠,腹腔注射无菌生理盐水0.2 ml/只.分别取血液、皮肤、肌肉、心肌、肺、肝、肾等组织进行电镜观察.结果:电镜下见皮肤、肌肉、心肌、肺、肝、肾等组织的部分实质细胞内和间质中可见Vv生长;血液内见大量Vv菌体;部分血管内皮细胞损伤及基膜断裂溶解,线粒体、内质网等细胞器损伤明显.结论:Vv引发的原发性败血症以及多器官实质细胞及间质超微结构损伤,致使多器官功能障碍甚或衰竭,是导致机体快速死亡的重要原因.
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碱性成纤维细胞生长因子对慢性鼓膜穿孔愈合的影响
目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在慢性鼓膜穿孔愈合中的作用.方法:在豚鼠慢性创伤性鼓膜穿孔的动物模型上,观察应用bFGF-磷酸缓冲液(250mg/L)治疗的鼓膜愈合率,用组织学检查鼓膜中层厚度,并与仅用磷酸缓冲液(PBS)处理的作对照.结果:bFGF治疗组鼓膜愈合率明显高于PBS组(89.3%vs 37.5%,P＜0.01);鼓膜中层厚度bFGF组显著高于PBS组[(305±37)μmvs(102±21)μm,P＜0.01].结论:局部应用bFGF有明显促进慢性鼓膜穿孔鼓膜中层厚度及上皮细胞增生,促进鼓膜愈合的作用.
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金氏痔疮膏的毒理学研究
目的:观察金氏痔疮膏的急性毒性反应.方法:①小鼠40只,随机均分为2组,观察金氏痔疮膏小鼠灌胃后产生的急性毒性反应.②家兔6只,观察金氏痔疮膏对家兔完整及破损皮肤的刺激反应.③小鼠40只,随机均分为2组,观察金氏痔疮膏对小鼠肛门粘膜的刺激反应.④豚鼠30只,随机均分为3组,观察金氏痔疮膏的皮肤过敏反应.⑤大鼠20只,随机分为2组,观察大鼠对金氏痔疮膏直肠给药的毒性反应.结果:小鼠、大鼠对金氏痔疮膏均未出现任何急性毒性反应;该药对家兔完整及破损皮肤无任何刺激性反应;小鼠肛门粘膜无红肿,未发现明显病理改变;豚鼠皮肤未见过敏反应.结论:金氏痔疮膏是一种安全无毒的药物.
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管花马兜铃导致大鼠急性肾损伤的实验研究
目的:观察管花马兜铃对大鼠急性肾损伤的作用. 方法:用管花马兜铃水煎剂(15g*kg-1*d-1)对大鼠灌胃,建立大鼠急性肾损伤模型,检测有关肾功能指标,进行组织形态学观察.结果:大鼠肾脏的主要功能改变为:多尿、氮质血症、蛋白尿及血尿.组织形态学改变主要表现为:急性肾小管变性、坏死.结论:实验剂量的管花马兜铃可导致大鼠急性肾功能衰竭.
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兔眼玻璃体切割术后玻璃体内抗坏血酸的动态观察
抗坏血酸被认为是细胞外液中非常重要的一种抗氧化剂,在眼内可以保护房水、晶状体及视网膜等组织免受光损伤[1].临床上玻璃体切割手术中常用的玻璃体填充物内均无抗坏血酸成分,但玻璃体切割手术后内源性抗坏血酸是否可以在短时期内恢复到正常生理水平,国内外尚无报导.我们结合微透析技术与高效液相-电化学检测法 (HPLC-ECD),通过长期测定玻璃体内抗坏血酸的含量,探讨正常家兔玻璃体部分切除术后玻璃体内内源性抗氧化物质--抗坏血酸产生的规律.
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碱性成纤维细胞生长因子对视网膜缺血再灌注损伤中蛋白激酶C表达、Ca2+含量变化的影响
蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)是调控细胞凋亡过程中的一个信号传导分子,Ca2+则在视网膜缺血再灌注细胞凋亡的诱导和信号传导中起到重要作用.有研究发现,碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF )在视网膜缺血再灌注损伤中起到治疗作用[1].
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实时荧光聚合酶链反应定量检测大鼠视网膜中转化生长因子β1和β2的表达
转化生长因子β(TGF-β)是一种具有控制增生和分化等生物过程的自分泌或旁分泌生长因子[1].TGF-β及其受体、细胞内下游信号转导分子的突变在糖尿病视网膜病变的发生、发展中扮演了非常重要的角色[2,3].研究TGF-β的不同成员在视网膜中的表达,有助于深入了解它们的来源和作用机制.我们以实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测TGF-β1和TGF-β2在大鼠视网膜中的表达,为研究TGF-β在视网膜病变中的作用机制提供依据.
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应用线形CO2激光吻合小血管的实验研究
目的应用线形CO2激光器和血管支撑物进行小血管吻合,观察术后血管吻合口的远期通畅率、动脉瘤发生率及物理性质. 方法家兔104只,随机分为8组,每只家兔的左颈动脉离断后用激光进行吻合,右颈动脉则用缝线进行吻合. 在术后1 h,24 h,3 d,1,2,4,8和12 wk时分别再次麻醉动物,解剖颈动脉,观察血管通畅情况,并测试吻合口的耐压强度和抗拉强度. 结果术后血管吻合口的即刻通畅率均为100%;远期通畅率,激光吻合组为98%,缝线吻合组为94%;动脉瘤发生率,激光组为3%,缝线组为0. 耐压强度测定,术后1 wk内激光组显著高于缝线组,2 wk后两组之间无差异. 抗拉强度测定,2 wk内,激光组显著低于缝线组,4 wk后两组间无差异. 结论应用线形CO2激光器和血管支撑物进行小血管的吻合是一项可行的技术, 它在远期通畅率、动脉瘤发生率及血管物理性质几方面都取得了令人满意的结果.
