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转录活化子1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和胶原表达的影响
目的 观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸雾化吸入对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1),转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和羟脯氨酸表达的影响.方法 将45只Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、博来霉素组和寡核苷酸组,每组15只,分别在气管内灌注并雾化吸入生理盐水、博来霉素、STAT1反义寡核苷酸.分别于雾化后第7天、第14天和第28天每组各处死5只大鼠.肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变,免疫组织化学SP法测定肺组织中TGF-β_1、PAI-1表达,逆转录PCR测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,肺组织匀浆测定羟脯氨酸含量.样本均数间比较采用单因素方差分析和q检验.结果 寡核苷酸组大鼠各时间点的肺泡炎和肺纤维化程度均较博来霉素组减轻.博来霉素组和寡核苷酸组大鼠肺组织中TGF-β、PAI-1表达水平均明显高于生理盐水组,博来霉素组和寡核苷酸组大鼠雾化后第7天TGF-β、PAI-1的积分吸光度值分别为182±12和169±12、128±11和113±13,明显高于生理盐水组的21±6和27±9,第28天时(68±7和87±7、54±8和57±8)仍高于生理盐水组(22±7和26±7);雾化后第7天、第14天和第28天,寡核苷酸组大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为1.36±0.10、1.19±0.28、1.22±0.24和1.20±0.09、0.62±0.09、0.76±0.12,明显低于博来霉素组(3.29±0.28、2.04±0.25、1.91±0.30和1.63±0.15、1.58±0.13、1.12±0.09),寡核苷酸组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量(mg/g)分别为3.02±0.13、3.24±0.31和3.60±0.16,明显低于博来霉素组的3.76±0.10、3.92±0.30和4.62±0.28.结论 STAT1反义寡核苷酸雾化吸入能减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化,其机制可能与抑制TGF-β_1、PAI-1的表达,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减少,羟脯氨酸含量降低有关.
关键词： 肺纤维化 STAT1转录因子 胶原Ⅰ型 胶原Ⅲ型 纤溶酶原激活物抑制物1 -
罗格列酮对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织STAT1的影响
目的 探讨罗格列酮对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织信号转导与转录激活因子1(STAT1)的影响.方法 将54只Wistar大鼠随机分为假手术组(S0组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、罗格列酮预处理组(ROSI组),每组18只.逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠制备SAP模型.ROSI组造模前30 min经股静脉注射罗格列酮(6 mg/kg),然后制备SAP模型.术后3、6、12 h心脏取血处死大鼠,每个时间点6只,测定血清淀粉酶水平,胰腺组织病理切片HE染色后评分;免疫组织化学方法检测胰腺组织磷酸化STAT1蛋白的表达情况;RT-PCR测定胰腺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达水平.结果 SAP组各时间点磷酸化STAT1蛋白、TNF-α mRNA的表达水平、血清淀粉酶及胰腺组织光镜下病理评分较SO组显著升高(P<0.01);ROSI组各时间点上述指标较SAP组降低(P<0.05),但较SO组增高(P<0.05).结论 SAP时胰腺组织STAT1活化;罗格列酮对SAP大鼠具有保护作用,其机制可能是通过抑制Janus激酶-信号转导与转录激活因子通路来抑制其下游炎性介质的产生.
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西妥昔单抗对非小细胞肺癌A549细胞的抗肿瘤效应及其机制探讨
目的 探讨西妥昔单抗对K-ras突变的非小细胞肺癌A549细胞的体外生长抑制及凋亡诱导作用.方法 采用CCK-8法及流式细胞仪分别检测西妥昔单抗对A549细胞的生长抑制作用及凋亡诱导情况；通过基因芯片检测技术比较西妥昔单抗作用组与对照组K-ras突变的A549细胞肿瘤相关基因表达的差异.结果 西妥昔单抗对K-ras突变的A549细胞具有生长抑制及凋亡诱导作用.西妥昔单抗作用后,有10个基因表达显著上调,9个基因表达显著下调.Real-timePCR检测验证西妥昔单抗作用后STAT1基因及IGFBP3基因表达显著上调.结论 西妥昔单抗对K-ras基因突变的肺腺癌A549细胞具有生长抑制及凋亡诱导作用,STAT1和IGFBP3基因表达上调可能与西妥昔单抗对非小细胞肺癌的作用机制相关.
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STAT1在结缔组织生长因子刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化中的作用
目的 基于既往研究,验证信号转导和转录活化因子1(STAT1)是否参与结缔组织生长因子(CTGF)刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化过程.方法 取6例增生性瘢痕患者的手术切除组织,培养成纤维细胞.应用凝胶阻滞电泳(EMSA)方法 测定不同浓度(0、5、7.5、10、15ng/ml)CTGF刺激45 min和10 ng/ml CTGF刺激不同时间(0、10、20、30、45、60、90、120 min)对瘢痕成纤维细胞STAT1与DNA结合能力的影响.将瘢痕成纤维细胞分为CTGF刺激组、STAT1反义寡脱氧核苷酸(ASODN)转染组、STAT1 ASODN+CTGF组和空白对照组,用噻唑盐(MTT)法测定各组细胞培养1、2、3 d的增殖活性,RT-PCR测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达以反映瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性.结果 瘢痕成纤维细胞中STAT1与DNA的结合活性随CTGF浓度而增强,当CTGF浓度为10 ng/ml时达峰值;10 ng/ml的CTGF刺激45-60 min达峰值.MTT法检测显示CTGF刺激组培养1～3 d增殖活性明显均高于空白对照组(均P<0.05),而STAT1 ASODN转染组和STATI ASODN+CTGF组均明显低于空白对照组和CTGF刺激组(均P<0.05).RT-PCR检测结果 显示,CTGF刺激组、STAT1 ASODN转染组、STAT1 ASODN+CTGF组和空白对照组瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性分别为0.78±0.08、0.38±0.09、0.76±0.10和0.40±0.12,STAT1 ASODN转染组和空白组均明显低于CTGF刺激组和STAT1 ASODN+CTGF组(均P<0.05).结论 STAT1ASODN可明显抑制瘢痕成纤维细胞的增殖活性,并阻断CTGF对细胞增殖的刺激作用,提示STAT1参与CTGF调控人增生性瘢痕成纤维细胞增殖过程.
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STAT1与STAT3在肝细胞癌及肝衰竭发病机制中的作用
肝细胞癌(HCC)及肝衰竭为我国常见的肝脏疾病,其发病率及病死率极高,相关研究虽多但具体发病机制仍不详.通过介绍STAT1及STAT3磷酸化蛋白在HCC及肝衰竭发病机制中的多种作用,如:抗病毒防御、急性期反应、肝损伤、修复、炎症、转化等,了解其在HCC及肝衰竭发病机制中的具体作用,并以其为分子靶标研制相关药物,应用于临床,对于降低患者病死率具有重要意义.
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信号转导和转录活化因子-1在上皮性卵巢癌中的表达及其与预后的关系
目的:探讨信号转导和转录活化因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)-1在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与预后的关系.方法:应用显微切割法从石蜡切片标本中提取mRNA,实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和免疫组织化学方法检测105例原发性卵巢上皮癌和29例正常卵巢组织中STAT-1 mRNA及蛋白的表达,并分析其蛋白表达与预后的相关性.结果:上皮性卵巢癌组织中STAT-1 mRNA的表达高于正常卵巢组织[(0.96±1.05) vs (0.46±0.57),P=0.032],但mRNA表达水平与卵巢癌的手术分期、病理分级以及生存时间无关(P>0.05);上皮性卵巢癌组织中STAT-1和P-STAT-1蛋白的阳性表达率分别为72.4%和71.9%,显著高于正常卵巢组织(P<0.05),但蛋白表达水平与病理分级和手术分期无明显相关性(P>0.05).在行辅助泰素化疗的病例组中STAT-1和P-STAT-1蛋白高表达患者的预后较好,总的生存时间长于低表达患者(P<0.05);STAT-1蛋白高表达的卵巢癌患者无瘤生存时间明显长于低表达患者(P<0.01).结论:STAT-1在上皮性卵巢癌中存在异常表达,与紫杉醇类药物化疗后的预后密切相关.STAT-1可能是抑制肿瘤细胞生长的关键因子之一.
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丹参素对STAT1、PPARγ和HGF在糖尿病小鼠肝脏中表达的影响
目的 观察丹参素对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠肝脏组织中信号转导和转录活化因子1(STATl)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)以及肝细胞生长因子(HGF)表达的影响,探讨其对糖尿病小鼠肝脏保护作用的机制.方法 60只健康雄性C57BL/6小鼠中随机选取10只作为正常对照组,剩余50只小鼠按200 mg/kg一次性腹腔注射STZ500mg,72 h后尾尖取血测空腹血糖,血糖值大于20 mmol/L为糖尿病小鼠.40只糖尿病小鼠随机分为糖尿病模型组,丹参素低剂量组(15 mg/kg)、中剂量组(30mg/kg)、高剂量组(60mg/kg).丹参素组小鼠1次/d灌胃给药,连续给药12周,末次给药12 h后检测空腹血糖、胰岛素、糖基化血红蛋白(GHb)的水平,及天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平.用蛋白质印迹分析法检测小鼠肝脏组织中STAT1、PPARγ和HGF蛋白的表达.结果 (1)与正常对照组相比,糖尿病模型组及丹参素组的血糖及GHb水平均增高(P＜0.01),胰岛素水平降低(P＜0.01),丹参素各剂量组间血糖、胰岛素及GHb水平差异无统计学意义.(2)糖尿病模型组血清AST、ALT水平较正常对照组升高(P＜0.05)；丹参素组血清AST、ALT水平较糖尿病模型组下降(P＜0.05)；丹参素各剂量组间AST、ALT水平差异无统计学意义.(3)糖尿病模型组小鼠肝组织中STAT1表达高于正常对照组(P＜0.01),而PPARγ和HGF的表达则降低(P＜0.01);与糖尿病模型组比较,丹参素组的小鼠肝脏组织中PPARγ和HGF的表达上调(P＜0.01),STAT1表达减少(P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论 丹参素对糖尿病肝损害的保护作用可能与上调糖尿病小鼠肝脏组织中PPARγ和HGF的表达,抑制STAT1介导的炎症反应有关.
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他克莫司对γ干扰素刺激HaCaT细胞分泌趋化因子CXCL9和CXCL10的影响及机制研究
目的 分析他克莫司对γ干扰素(IFN-γ)刺激下HaCaT细胞分泌CXCL9、CXCL10、p-JAK1、p-STAT1的影响,探讨他克莫司治疗白癜风的作用机制.方法 1、10、20、40、60、80、100、120 mg/L他克莫司预处理HaCaT细胞4h后,噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖.HaCaT细胞分为空白对照组,IFN-γ组(500 U/ml),他克莫司组(20 mg/L)及他克莫司+IFN-γ组.他克莫司预处理HaCaT细胞4h,IFN-γ刺激细胞12 h或48 h,实时荧光定量PCR检测细胞CXCL9、CXCL10 mRNA表达.Western印迹法检测细胞CXCL9、CXCL10、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达.ELISA法检测细胞培养上清液CXCL9、CXCL10蛋白含量.结果 他克莫司对HaCaT细胞增殖无影响的大浓度为20 mg/L(P＞ 0.05).20 mg/L他克莫司预处理HaCaT细胞后,使IFN-γ刺激下HaCaT细胞表达CXCL9、CXCL10mRNA分别由10 369.08±7.99、290.02±2.16降低至5 914.33±4.59、114.96±0.73(均P＜ 0.01).CXCL9、CXCL10、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达分别由8.47±0.29、7.87±0.17、4.20±0.18、4.29±0.11降低至7.36±0.13、7.36±0.09、2.60±0.16、3.62±0.19(均P＜0.01).细胞培养上清液中CXCL9、CXCL10蛋白含量分别由1 213.36±0.95、1 722.41±2.57降低至426.45±0.31、554.12±0.56(均P＜0.01).结论 他克莫司对IFN-γ刺激下HaCaT细胞分泌CXCL9、CXCL10、p-JAK1、p-STAT1具有抑制作用.
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STAT1信号通路在成骨细胞凋亡蛋白表达中的作用
目的 研究转录活化蛋白1(STATl)信号通路在成骨细胞凋亡蛋白表达中的作用.方法 用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测不同浓度氟达拉滨对成骨细胞的毒性作用,Western blot 和ELISA方法检测在不同时间及地塞米松浓度下,Bcl-2相关X蛋白(BAX)、裂解的caspase-3蛋白(cleaved caspase-3)、STAT1及STAT1的磷酸化蛋白(p-STAT1)的蛋白水平.大鼠成骨细胞设对照组、单纯氟达拉滨组、地塞米松组、地塞米松+氟达拉滨组,ELISA方法检测BAX、STAT1和p-STAT1的蛋白量及分光光度法测cleaved caspase-3的蛋白水平.结果 在地塞米松刺激作用下,成骨细胞凋亡相关蛋白及p-STAT1的蛋白水平增高,且具有时间及浓度依赖性.应用氟达拉滨下调p-STAT1水平后,地塞米松+氟达拉滨组凋亡相关蛋白表达较地塞米松组下降(P＜0.05).结论 氟达拉滨可以通过抑制p-STAT1的活性下调cleaved caspase-3等凋亡蛋白水平.
