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信号传导与转录激活因子3基因多态性与肝细胞癌的关系
目的 探讨信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activators of transcription 3,STAT3)基因启动子区-1096G/C多态性与乙肝表面抗原(HBsAg)阳性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)易感性之间的关系.方法 采用病例-对照研究方法,应用荧光探针实时定量PCR法对2009至2012年在上海某医院就诊的632例HCC患者和723名非HCC乙肝病毒(HBV)感染者的STAT3基因启动子区-1096G/C基因多态性进行检测,使用单因素分析方法确定该基因多态性OR(95％ CI)值.结果 对照组、病例组携带STAT3-1096C(GC+ CC)基因型者分别占61.8％ (447/723)、60.6％(383/632),不同基因型之间HCC发病风险差异无统计学意义(OR =0.95,95％ CI:0.76～1.18).以性别进行分层分析,在男性人群中,对照组、病例组携带STAT3-1096 C(GC+ CC)基因型者分别占62.2％(314/505)、61.8％(331/536),在女性人群中,分别为61.0％(133/218)、54.17％ (52/96),在男性和女性人群中,不同基因型HCC发病风险差异均没有统计学意义(OR=0.98,95％ CI:0.77～1.26;OR =0.76,95％CI:0.47 ～ 1.26).以HBV基因型进行分层分析,在HBV B型感染者中,对照组、病例组携带STAT3-1096C(GC+ CC)基因型者分别占61.5％(110/179)、53.1％(34/64),在HBV C型感染者中,对照组、病例组携带STAT3-1096C(GC+CC)基因型者分别占62.9％(276/439)、60.3％(226/375),在HBV B或C型感染者中,不同基因型患者HCC发病风险差异没有统计学意义(OR =0.71,95％ CI:0.40～1.26;OR =0.90,95％ CI:0.68～ 1.19).结论 STAT3-1096G/C基因多态性与HBV阳性HCC的易感性没有相关性.
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慢性乙型肝炎患者血清IL-17表达水平及其调控IL-6/STAT3信号通路的研究
目的 探究白介素-17(IL-17)在慢性乙型肝炎(CHB)患者中的表达水平及其与 IL-6/STAT3 信号通路的关系.方法 收集 50 例 CHB 患者和 50 例健康体检者的血清并回顾性收集相关临床特征以及病毒学特征信息,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者血清中 IL-17 水平;采用 Spearman 相关分析方法分析 IL-17 与 CHB 患者HBV-DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及门冬氨酸氨基转移酶(AST)之间的相关性;进一步用人源重组 IL-17 (rhIL-17)处理 HBV 复制细胞系 HepG2.2.15 后,采用实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)方法检测细胞中 IL-6 mRNA水平,通过 ELISA 方法检测细胞上清 IL-6 含量,同时采用蛋白免疫印迹法检测 STAT3 以及磷酸化 STAT3 (pSTAT3)的表达水平.结果 与健康对照组相比,IL-17 在 CHB 患者中明显升高,同时 IL-17 含量与 HBV-DNA、ALT 及 AST 之间呈显著正相关性;当 rhIL-17 作用于 HepG2.2.15 细胞时,可以检测到 IL-6 表达水平以及细胞中 pSTAT3 明显升高.结论 IL-17 在 CHB 患者中明显升高,与 HBV-DNA 病毒载量之间呈正相关性,并参与、激活 IL-6/STAT3 信号通路,与 HBV 复制及 CHB 疾病的进展密切相关.
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小干扰RNA阻断信号转导子和转录激活子3信号对人食管鳞癌细胞株增殖的抑制作用
目的 探讨信号转导子和转录激活子3(STAT3)小干扰RNA(siRNA)对食管鳞状细胞癌细胞株(EC9706和Eca109)中持续性激活STAT3信号的阻断情况及阻断STAT3信号对细胞增殖的影响.方法 将化学合成的100 nmol/L的STAT3 siRNA转染EC9706和Eca109细胞,逆转录聚合酶链反应检测转染前后STAT3 mRNA的表达,Western blot检测转染前后STAT3及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的表达,凝胶电泳迁移率检测转染前后活化STAT3蛋白的核结合情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测转染前后细胞增殖能力的改变,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的改变.结果 STAT3 siRNA以时间依赖方式特异性地抑制STAT3 mRNA及STAT3、p-STAT3蛋白的表达,并且STAT3蛋白的核结合活性下降,使细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞增殖受到明显的抑制.与对照组相比EC9706细胞转染后72 h G0/G1期的细胞增加了16.1%,同时S期细胞减少11.1%;Eca109细胞转染后72 h G0/G1期的细胞增加了11.8%,同时S期细胞也较对照组明显减少.结论 STAT3siRNA能够特异地阻断食管鳞癌细胞中STAT3信号的持续性激活并抑制肿瘤细胞的增殖.
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STAT3和CyclinD1在口腔高分化鳞状细胞癌化疗前后的表达及临床意义
目的：探讨STAT3和CyclinD1在口腔高分化鳞状细胞癌化疗前后的表达及其与预后的关系。方法选择2003年1月至2013年6月在我院接受手术治疗的高分化口腔鳞状细胞癌72例，其中术前未化疗组34例，术前静脉化疗组38例，免疫组化法检测STAT3和CyclinD1的表达，并分析STAT3和CyclinD1的表达与肿瘤大小、性别、年龄、淋巴结转移及临床分期之间的关系。结果与未化疗组相比，术前化疗可以明显降低高分化口腔鳞癌中STAT3和CyclinD1的阳性率；STAT3和CyclinD1表达情况与高分化口腔鳞状细胞癌的淋巴结转移、部位及临床分期（T1、T2）相关（P＜0.05），而与患者的年龄、性别、瘤体大小及T3期无关（P＞0.05）。结论术前化疗可以降低高分化口腔鳞癌中STAT3和CyclinD1的表达，进而减少淋巴结的转移和改善预后。
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STAT3与VEGF在脂溢性角化病和基底细胞癌中的表达及关系
目的 探讨STAT3和VEGF在上皮源性皮肤肿瘤发生发展中的作用与关系.方法 采用免疫组化的方法,对50例脂溢性角化病和40例基底细胞癌的石蜡包埋标本进行STAT3与VEGF水平的检测,并进行相关性分析.结果 STAT3、VEGF在基底细胞癌中的阳性率分别为70.O%、67.5%,高于在脂溢性角化病中的阳性率46.O%、42.O%,差异具有统计学意义(p<0.05).结论 STAT3、VEGF与基底细胞癌的发病机制中密切相关.
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JSI-124特异性阻断STAT3通路抑制非小细胞肺癌细胞H1975增殖的研究
目的 探讨JSI-124(Cucurbitacin-I,葫芦素)特异性阻断信号转录传导子与激活子3(STAT3)信号通路,抑制非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖的效应机制.方法 以0、0.08、0.16、0.32、0.64、1.25、2.5、5、10 μmol/L和0、0.5、1、3、10 μmol/L的JSI-124处理人H1975细胞后,CCK-8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡的相关情况、Western blot法检测被处理细胞中STAT3及其相关蛋白的活化情况、RT-PCR法检测STAT3及相关基因mRNA水平的表达.结果 JSI-124可抑制H1975细胞的增殖,并具有时间及剂量依赖性;JSI-124处理细胞后,STAT3的活化水平显著降低(P<0.05);同时H1975细胞随JSI-124浓度的增加,细胞凋亡水平也逐渐上升.结论 STAT3特异性抑制剂JSI-124可显著抑制NSCLC细胞H1975的增殖并诱导其凋亡.
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JAK2/STAT3信号转导通路参与调节IL-6介导的肺腺癌细胞株中MMP-10的表达
目的 研究Janus激酶2(JAK2)及信号转导和转录激活子3(STAT3)途径对IL-6介导的肺腺癌细胞(A549)中基质金属蛋白酶10(MMP-10)表达调节的作用,探讨MMP-10的调节机制.方法 待生长状况良好的A549细胞融合生长至50%～70%时,分别用0,12.5,25,50 ng/ml IL-6及AG490(JAK2特异性抑制剂)+25 ng/ml IL-6处理A549细胞24 h后,采用实时RT-PCR技术检测JAK2、STAT3和MMP-10 mRNA的表达水平;应用Western blot检测MMP-10蛋白的表达水平.结果 25 ng/ml IL-6组STAT3 mRNA表达水平较0 ng/ml组高43.87%(P<0.05),AG490+25 ng/ml IL-6组较25 ng/ml IL-6组低36.73%(P<0.01);AG490+25 ng/ml IL-6组MMP-10 mRNA表达水平较 25 ng/ml IL-6组高43.21%(P<0.01);12.5,25,50 ng/ml IL-6组的MMP-10蛋白水平显著高于0 ng/ml 组(P<0.05),且峰值出现在25 ng/ml组;与25 ng/ml IL-6组相比,MMP-10蛋白水平在AG490+25 ng/ml IL-6组明显降低(P<0.05).结论 JAK2/STAT3信号转导途径可能参与调节IL-6介导的肺癌细胞株A549中MMP-10的表达.
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STAT3反义寡核苷酸对肺腺癌裸鼠移植瘤辐射增敏的研究
目的：探讨STAT3反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide，ASODN）对肺腺癌裸鼠移植瘤辐射增敏的影响，为提高恶性肿瘤的辐射敏感性提供新的思路和方法。方法建立裸鼠体内肺腺癌移植瘤动物模型，待瘤体直径＞0.5 cm后，瘤内多点注射STAT3 ASODN，给药剂量：15 mg/kg，1次/d，连续2周，给药后2 h联合γ射线局部照射总剂量20 Gy，每次2 Gy，每周5次，连续2周，照射剂量率0.75 Gy/min，定期测量肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线；测量肿瘤质量，计算抑瘤率；记录存活情况，估算生存率，绘制生存曲线，计算总生存期；免疫组化检测肿瘤组织细胞内STAT3蛋白表达变化情况；Western Blot 检测肿瘤组织内 P-STAT3、Bcl-xL、CyclinD1蛋白表达情况。结果反义（antisense，AS）＋照射（irradiation，IR）组肿瘤体积治疗第8天开始明显小于其余各组肿瘤体积（P＜0.05）；AS＋IR组的抑瘤率为68.4%，高于IR组与AS组的之和；AS＋IR组的平均总生存期为（28.38±0.96）d，明显高于IR组及无义（nonsense，NS）＋IR组（P＜0.005）；STAT3蛋白及其下游Bcl-xL、CyclinD1蛋白表达变化明显下降， STAT3蛋白磷酸化水平也降低。结论 STAT3反义寡核酸能够增强肺腺癌裸鼠移植瘤的辐射敏感性，具有良好的放疗增敏剂临床应用开发前景。
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外源性一氧化碳释放分子对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白 B1表达的影响
目的研究外源性一氧化碳释放分子（ CORM-2）对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达的影响。方法盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症动物模型，150只雄性 Wistar 大鼠，随机分为对照组（ C 组）、脓毒症模型组（ CLP组）和CORM-2组（ n＝50），分别于术后6、12、24、48、72 h处死，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织匀浆中HMGB1表达水平，实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）法检测肺组织匀浆中 HMGB1 mRNA 的表达水平；凝胶阻滞电泳分析技术（ EMSA ）检测肺组织 STAT3的DNA结合活性；同时检测肺组织丙二醛（ MDA ）含量和湿/干重比（ W/D ）；流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果与C 组比较，CLP、CORM-2组大鼠肺组织HMGB1 mRNA 及蛋白表达水平升高，STAT3的 DNA 结合活性表达升高，肺组织匀浆中MDA 含量显著升高，细胞凋亡率和 W/D 升高；与 CLP 组比较，CORM-2组大鼠肺组织HMGB1 mRNA及蛋白表达水平下降，STAT3的DNA结合活性表达降低，肺组织匀浆中MDA含量显著下降，细胞凋亡率和W/D 降低。结论 CORM-2能够下调肺组织HMGB1表达，减轻脓毒症性肺损伤。
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STAT3调控胰腺癌侵袭转移相关基因的筛选
目的 应用基因芯片筛选信号转导与转录激活因子3(STAT3)调控胰腺癌侵袭转移的相关基因.方法 以慢病毒感染获得稳定STAT3沉默人胰腺癌细胞株SW1990,以空质粒病毒组、未感染组为对照.应用基因芯片筛选3组细胞与肿瘤侵袭转移相关的差异表达基因.用实时PCR及蛋白质印迹法检测STAT3 mRNA及蛋白表达,并验证所选取的3个差异表达基因(MMP-7、IL-1β、IgTα7).结果 靶向STAT3的病毒感染SW1990细胞后,STAT3 mRNA表达水平为0.391±0.037,显著低于空质粒病毒组的1.002±0.015和未感染组的1.206 ±0.042(P ＜0.05)；STAT3蛋白表达水平为182.38±65.32,亦明显低于空质粒病毒组的223.40±58.40和未感染组的212.33±53.69(P＜0.05).STAT3沉默的SW1990细胞有8个肿瘤侵袭转移相关基因表达上调,3个表达下调,经验证,沉默组细胞MMP-7、IL-1β mRNA表达水平明显低于空质粒病毒组(0.287±0.115比1.010±0.124,t =19.45,P=0.000；0.490±0.010比1.002±0.002,t=13.83,P=0.000),而IgTα7 mRNA表达水平无明显变化(1.173±0.280比0.998±0.003,t=4.236,P=0.094).同时沉默组细胞MMP-7蛋白表达亦显著降低.结论 STAT3沉默可导致人胰腺癌SW1990细胞多个与肿瘤侵袭转移相关基因表达的改变,其中MMP-7可能是受STAT3调控的主要靶基因.
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姜黄素对大鼠脑缺血后Janus蛋白酪氨酸激酶2信号转导和转录激活子3信号通路的影响
目的 探讨姜黄素对大鼠脑缺血损伤后Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)信号通路的影响.方法 将68只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、姜黄素组(尾静脉注射姜黄素40 mg/kg)和对照组(注射等量生理盐水),每组17只,后3组建立大鼠局灶性脑缺血模型,观察各组大鼠神经行为学变化,ELISA检测大鼠脑组织TNF α、白细胞介素(IL)-1β、IL6表达,Western blot检测大鼠脑组织JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达.结果 与脑缺血组比较,姜黄素组大鼠神经行为学评分减低[(1.53±0.62)分vs (2.94±0.87)分,P＜0.05];与脑缺血组比较,对照组TNF-α、IL-1β和IL-6无明显变化(P＞0.05),姜黄素组大鼠TNF-α[(57.63±10.27)ng/L vs (99.35±8.97) ng/L]、IL-1β[(33.67±9.10)ng/L vs (58.43±7.22)ng/L]和IL-6[(31.97±6.91)ng/L vs(49.23±6.28)ng/L]表达降低(P＜0.01),p-JAK2/JAK2、p STAT3/STAT3相对含量及HMGB1表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 姜黄素可保护大鼠缺血后脑损伤,其机制可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路,减少HMGB1表达,减轻炎性反应.
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乳腺癌中STAT3调节基质金属蛋白酶表达与上皮间质转化的关系
目的 探讨乳腺癌中STAT3和基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及其组织抑制剂TIMP-1的表达与上皮间质转化(EMT)的关系及其临床意义. 方法 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测30例新鲜乳腺浸润性导管癌与对应癌旁正常乳腺组织STAT3基因mRNA的表达,并以免疫组织化学Envision二步法方法检测84例乳腺浸润性导管癌组织及对照组35例癌旁正常乳腺组织pSTAT3和MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表达. 结果 乳腺癌组织中STAT3mRNA相对定量显著高于癌旁正常乳腺组织(t=4.513,P=0.000);pSTAT3、MMP-2、MMP 9及TIMP-1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于对照组,二者比较差异有统计学意义(均P＜0.05),乳腺癌组织中pSTAT3表达与MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表达呈正相关(均P＜0.05);pSTAT3、MMP-2在乳腺浸润性导管癌不同组织学分级、有或无淋巴结转移组间的阳性表达率均差异有统计学意义(P＜0.05);MMP-9阳性表达率在有、无乳腺癌淋巴结转移组间差异有统计学意义(P＜0.05),但在不同组织学分级组间表达差异无统计学意义(P＞0.05);TIMP-1的阳性表达率在不同乳腺癌组织学分级及有、无淋巴结转移组间均无统计学意义差异(P＞0.05).在不同年龄、肿瘤大小组间比较,上述蛋白的阳性表达率均无差异(P＞0.05). 结论 STAT3在乳腺癌中高表达与MMP-2、MMP-9及其抑制剂TIMP-1表达上调关系密切;活化的STAT3可能通过调节MMP-2、MMP-9的表达介导EMT过程,从而促进乳腺浸润性导管癌的侵袭转移.
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IL-6／S T AT3信号通路在溃疡性结肠炎治疗中的新进展
溃疡性结肠炎的发病机制尚未完全明确，但白细胞介素6（IL-6）与溃疡性结肠炎的发生、发展有关，其中IL-6／STAT-3信号通路占有重要地位，靶向阻断IL-6／STAT-3信号传导通路，为治疗溃疡性结肠炎提供了新的思路。本文以该信号通路为靶向治疗的新进展作一综述。
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血管紧张素转换酶2基因转染抑制大鼠平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体表达及下游转录激活子3信号通路
目的 利用构建的血管紧张素转化酶(ACE)2慢病毒表达载体转染平滑肌细胞,探讨ACE2对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)表达的影响.方法 培养平滑肌细胞,并进行分组及干预:(1)空白对照组:仅加入无血清培养基.(2)慢病毒重组绿色荧光蛋白表达空载体( Lentiviral-GFP,GFP)组:加入感染复数(MOI)为10的Lentiviral-GFP空载体.(3)血管紧张素(Ang)Ⅱ组:加入终浓度为10-7 mol/L的AngⅡ.(4) AngⅡ+慢病毒重组ACE2表达载体(Lentiviral-ACE2,ACE2)组:同时加入浓度为10-7 mol/L的AngⅡ和MOI为10的Lentiviral-ACE2.(5) AngⅡ+厄贝沙坦组:同时加入终浓度为10-7 mol/L的AngⅡ和厄贝沙坦.(6) AngⅡ+ACE2+厄贝沙坦组:同时加入终浓度为10-7 mol/L的AngⅡ和厄贝沙坦以及MOI为10的Lentiviral-ACE2.(7)ACE2组:仅加入MOI为10的Lentiviral-ACE2.将上述干预细胞提取RNA后运用实时PCR检测细胞ATIR mRNA的表达,Western blot技术分别检测细胞ATIR蛋白表达,以及下游信号通路信号转导子和转录激活子3(STAT3)蛋白磷酸化水平.运用CCK-8试剂盒检测上述干预组的细胞增殖水平.结果 (1)AngⅡ+ACE2组和AngⅡ+ACE2+厄贝沙坦组的ATIR mRNA表达均低于AngⅡ组(分别为0.39±0.02和0.24±0.01比1.80±0.08,P分别＜0.05和0.01).(2) AngⅡ+ACE2组和AngⅡ+ACE2+厄贝沙坦组的ATIR蛋白表达均低于AngⅡ组(分别为0.83±0.07和0.52±0.07比1.10±0.13,P分别＜0.05和0.01).(3)AngⅡ+ACE2组和AngⅡ+ACE2+厄贝沙坦组的STAT3蛋白磷酸化水平均低于AngⅡ组(分别为0.09±0.01和0.02 ±0.01比0.50±0.10,P分别＜0.05和0.01).(4) AngⅡ+ACE2组和AngⅡ+ ACE2+厄贝沙坦组的细胞增殖水平均低于AngⅡ组(分别为0.84±0.08和0.77±0.10比1.16±0.11,P分别＜0.05和0.01).结论 ACE2通过抑制AT1R和下游的STAT3信号通路抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖,并提示ACE2对AT1R有直接的抑制作用.
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STAT3与E-cadherin在食管鳞癌上皮间质转化中的作用及机制研究
目的 探究STAT3与E-cadherin在食管鳞癌中的表达及临床病理相关性,以及在食管鳞癌上皮间质转化中过程中产生的影响.方法 采用RT-qPCR方法检测50例食管鳞癌患者癌组织标本及对应癌旁组织标本中STAT3与E-cadherin的表达;以癌/癌旁正常组织相对表达量表示STAT3与E-cadherin在mRNA水平表达的差异,分析其与患者临床病理特征间的关系;采用简单随机法抽取其中4例食管鳞癌患者组织标本进行Western blotting检测STAT3与E-cadherin的表达情况.采用RT-qPCR及Western blotting方法分别检测3株食管鳞癌细胞株中STAT3与E-cadherin表达,筛选其中高表达的1株进行转染,利用STAT3小干扰RNA作为实验组,以双链无义RNA转染作为对照组,检测STAT3、E-cadherin表达水平变化,并通过细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测实验组细胞迁移与侵袭情况.计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,组间比较应用t检验.结果 50例食管鳞癌组织中STAT3相对表达量为1.87 ±0.71,E-cadherin相对表达量为0.63 ±0.28,癌旁组织STAT3为0.56 ±0.45,E-cadhenn为2.01 ±0.68;临床病理特征分析显示,食管鳞癌中STAT3相对高表达、E-cadherin相对低表达程度均与癌组织浸润深度、淋巴结转移与否相关(P＜0.05).其中抽取的4例患者,癌组织中STAT3表达比对应癌旁正常组织高,分别为0.28±0.06、0.05±0.02,P＜0.05,而E-cadherin在癌组织中的表达明显低于在对应癌旁正常组织,分别为0.27±0.07、0.59 ±0.09,P＜0.05.选取高表达的EC109作为实验用食管鳞癌细胞株,RT-qPCR结果显示,STAT3小干扰RNA转染组较其对照组中STAT3表达明显减少,分别为0.85±0.24、3.01 ±0.20,P＜0.05,同时E-cadherin蛋白表达上调,分别为2.69 ±0.29、0.36±0.16,P＜0.05;Western blotting检测显示,相对于对照组,转染STAT3小于扰RNA片段成功抑制STAT3蛋白表达后(分别为0.09±0.04、0.32 ±0.18,P＜0.05),EC109细胞中E-cadherin表达明显上调(分别为0.75 ±0.11、0.15 ±0.05,P＜0.05).下调STAT3表达后,细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验结果显示,食管鳞癌细胞株EC109中STAT3小干扰RNA转染组迁移率、侵袭细胞数与对照转染双链无义RNA组对比均下降,故下调STAT3表达后迁移、侵袭能力均减弱(P＜0.05).结论 在食管鳞癌中,STAT3转录因子可以通过介导E-cadherin表达,影响上皮间质转化表型,从而影响肿瘤迁移与侵袭.
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沉默STAT3基因对人胰腺癌细胞体内生长能力的影响
目的 探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默信号转导与转录激活因子-3(signal transduction and activators 0f transcription,STAT3)对人胰腺癌细胞株SW1990体内生长能力的影响及其机制.方法 构建STAT3短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,稳定转染SW1990细胞,Western blot观察STAT3和磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3,p-STAT3)蛋白表达的改变.裸鼠皮下移植瘤模型检测胰腺癌细胞体内生长能力的变化.Western blot检测Bcl-xL和cyclin D1蛋白表达的改变.结果 RNAi后SW1990细胞中STAT3和p-STAT3的蛋白表达分别下降90%和92%(P＜0.05);裸鼠皮下移植瘤模型显示RNAi沉默STAT3后,SW1990细胞体内生长能力明显下降(P＜0.05);RT-PCR显示RNAi抑制STAT3后,SW1990细胞中Bcl-xL和cyclin D1的蛋白表达分别降低56%和50%(P＜0.05).结论 STAT3 shRNA表达载体能有效抑制STAT3基因,并通过下调Bcl-xL和cyclin D1表达,抑制胰腺癌细胞体内生长能力.
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γ-氨基丁酸抑制胆管癌细胞株QBC939生长的分子机制实验研究
目的 探讨γ-氨基丁酸(GABA)抑制胆管癌细胞株QBC939增殖及凋亡的分子机制.方法 分别以GABA、GABA+荷包牡丹碱(A受体拮抗剂)、GABA+ phaclofen(B受体拮抗剂)孵育胆管癌细胞株QBC939 48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blot法检测信号转导和转录活化因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的表达.构建人胆管癌裸鼠皮下种植瘤模型,随机分为对照组和GABA治疗组,用药5周后观察裸鼠体重和肿瘤体积,采用免疫组化及Western blot法检测种植瘤p-STAT3蛋白的表达.结果 MTT法及流式细胞术检测结果显示phaclofen能有效拮抗GABA所导致的增殖抑制(15.30％±0.80％比2.66％±0.74％,t =23.15,P=0.00)和凋亡效应(23.15％ ±0.21％比4.30％±0.69％,t=52.40,P=0.00),而荷包牡丹碱无此效应.Western blot法检测结果显示,STAT3、p-STAT3蛋白在QBC939中均表达,GABA可明显下调p-STAT3蛋白的表达(0.77 ±0.00比0.45 ±0.01,t=63.14,P=0.00)且此效应可被phaclofen部分拮抗(0.45 ±0.01比0.76 ±0.01,t=56.25,P=0.00)；与对照组比较,治疗组的种植瘤体积明显缩小[(0.62±0.03) cm3比(0.34±0.03) cm3,t=13.45,P=0.00],p-STAT3蛋白的表达亦下降.结论 GABA抑制胆管癌细胞株QBC939的生长是通过GABAB受体介导的,下调p-STAT3蛋白的表达可能是其抗肿瘤的作用机制之一.
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缺血后处理对肝再生中肿瘤坏死因子α/白细胞介素6/信号转导及转录激活因子3信号通路的影响
目的 探讨缺血后处理对肝大部切除后合并缺血再灌注损伤余肝再生肿瘤坏死因子(TNF) α/IL-6/信号转导及转录激活因子(STAT)3信号通路的影响.方法 健康清洁级雄性SD大鼠90只,体质量230～280 g.随机分为三组,将各组大鼠肝左、中叶切除,余肝作不同处理:单纯肝切除组不阻断其血流；缺血组阻断血流30 min后恢复灌注；后处理组阻断血流30 min,并于恢复灌注前进行30 s-30 s循环3次后处理.术后1、6、12、24、48 h取各组大鼠余肝组织,测定TNF-α、IL-6水平,STAT-3、细胞周期蛋白(cyclin) D1、Cdk4 mRNA表达及cyclinD1、Cdk4蛋白表达水平.结果 与单纯肝切除组比较,缺血组各时点IL-6表达降低(t=5.076 ～8.334,P=0.000),TNF-α于1～12h明显升高(t=2.972 ～ 7.215,P =0.000 ～ 0.014),24 h、48 h的cyclinD1、Cdk4、STAT-3 mRNA及cyclinD1、Cdk4蛋白表达水平降低(=2.857 ～6.684,P=0.000 ～0.017).与缺血组比较,后处理组各时点IL-6表达水平升高(t=2.458～ 3.543,P=0.005 ～ 0.034),TNF-α于1～12h降低(t=2.995 ～ 4.112,P =0.002 ～0.017)；24 h、48 h的STAT-3、cyclinD1、Cdk4 mRNA表达及cyclinD1、Cdk4蛋白表达水平(t=2.383 ～6.803,P=0.000～0.038)均升高.结论 缺血后处理对肝大部切除合并缺血再灌注损伤余肝的再生具有促进作用,其机制与TNF-α/IL-6 /STAT-3信号通路激活,促使肝细胞cyc1inDl -Cdk4复合物产生,促进肝细胞增殖有关.
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构建并利用绒毛外滋养细胞组织芯片检测磷酸化信号转导和转录活化因子3在子痫前期患者的表达
目的 构建子痫前期患者绒毛外滋养细胞(extravillous trophoblast,EVCT)组织芯片,并利用该组织芯片检测磷酸化信号转导和转录活化因子3 (phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,pStat3)在子痫前期EVCT中的表达水平,探讨Stat3信号途径在子痫前期病理过程中的作用. 方法 收集2007年12月12日至2010年12月31日郑州大学第三附属医院80例子痫前期和58例正常妊娠孕妇的胎盘组织用来构建组织芯片,利用波形蛋白、细胞角蛋白和人类白细胞抗原-G抗体进行免疫组织化学染色验证EVCT组织芯片,采用免疫组织化学半定量方法检测pStat3在子痫前期和正常妊娠孕妇胎盘EVCT组织的表达情况.采用非参数秩和检验、Kruskai-Wallis H检验、t检验和卡方检验进行统计分析. 结果 57例子痫前期(109个组织点)和31例正常妊娠孕妇的胎盘块(65个组织点)适于EVCT组织芯片的构建.组织芯片中EVCT细胞角蛋白染色阳性,波形蛋白染色阴性,人类白细胞抗原-G染色阳性,符合EVCT的特点,86.4％ (76/88)的样本保留了EVCT,组织芯片构建成功.子痫前期患者胎盘EVCT中pStat3阳性率为51.1％(24/47),重度子痫前期组阳性率为52.3％(23/44),早发型子痫前期组阳性率为50.0％(19/38),均显著低于正常妊娠组的72.4％ (21/29),差异均有统计学意义(U分别为492.00、473.00和401.00,P均＜0.05). 结论 EVCT组织芯片构建成功,利用该芯片可高通量检测pStat3的表达情况.pStat3信号转导途径可能参与了早发型和重度子痫前期的发生发展.
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STAT3基因功能获得性突变致免疫失调性疾病临床及免疫学特征研究
目的探讨由STAT3基因功能获得性突变导致免疫失调性疾病的临床、免疫学及基因学特征。方法对2016年5月就诊于重庆医科大学附属儿童医院风湿免疫科的1例临床表现为淋巴结肿大、全血细胞减少患儿的临床症状、体征、化验检查、免疫学功能评估、基因诊断结果及治疗过程进行分析，并进行相关文献复习。结果患儿女，4岁2月龄，2岁时以淋巴结肿大起病，逐渐出现肝脾肿大，自身免疫性全血细胞减少及反复呼吸道感染；多次外周血常规：白细胞（2．2～4．9）×109／L，红细胞（2．09～5．75）×109／L，血红蛋白64～165 g／L，血小板（52～138）×109／L；外周血淋巴细胞分类比例：CD3＋T细胞占0．7160（其中CD4＋T细胞0．3260，CD8＋T细胞0．3230，CD4－CD8－TCRαβ＋细胞0．0290），CD19＋B细胞0．2350（其中过渡B细胞0．0043），NK细胞0．0320；产生白细胞介素（ IL）－4、干扰素（ IFN）－γ、IL－17及IL－21的CD4＋T细胞占总CD4＋T细胞比例分别为0．0149、0．213、0．0240及0．0210；T细胞及B细胞增殖功能及TCR多样性检测正常；血清免疫球蛋白水平：IgG 16．4 g／L，IgA 1．53 g／L，IgM 3．99 g／L，IgE3．20 kU／L；基因测序显示STAT3基因第21外显子第1974号核苷酸杂合突变（ c．1974G＞C，p．K658N），为错义突变，诊断为STAT3基因功能获得性突变。患儿接受激素治疗后，肝脾淋巴结肿大明显好转，全血细胞减少有所改善。在近10年国内外数据库中检索生殖系STAT3基因功能获得性突变致自身免疫性疾病或原发性免疫缺陷病，国外报道19例，国内尚无相关报道。16例有详细临床资料的患者中，11例在5岁前起病，14例出现自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性血小板减少症等血液系统改变，12例有淋巴结病变，11例有各部位感染病史，5例出现内分泌腺异常。结论 STAT3基因功能获得性突变导致原发性免疫缺陷病患儿，多以早发性自身免疫性疾病、淋巴结病及反复感染为主要表现。常规的免疫学检查可正常或仅轻度异常，需进行更全面的免疫学功能评估，确诊需进行基因检测。
