首页 > 文献资料
-
血管内皮生长因子基因治疗促进球囊损伤后内皮细胞再生
血管内皮细胞再生是血管内膜损伤或剥脱后的主要修复方式.本研究在自行成功构建人血管内皮生长因子(hVEGF165)真核表达载体pcDNA3/hVEGF165基础上,将hVEGF165裸质粒DNA直接转染球囊损伤后的血管壁,观察其对内皮细胞再生以及内膜增生的影响,为血管损伤性疾病的防治提供实验依据.
-
裸质粒与脂质体介导转染方法对大鼠平滑肌细胞CYP2J3基因表达的影响
目的 比较脂质体介导法和裸质粒直接转染法导入CYP2J3基因表达的效率.方法 将CYP2J3真核表达质粒导入原代培养大鼠平滑肌细胞,用半定量RT-PCR方法检测CYP2J3 mRNA表达,Western blotting方法测定CYP2J3蛋白表达,高效液相色谱法测定培养液11,12-EET含量.实验分为裸质粒转染组(2J3)、脂质体介导转染组(L2J3)和对照组,转染后24 h和48 h收集细胞.结果 转染后24 h,2个转染组CYP2J3 mRNA表达均较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);L2J3组蛋白含量较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01),2J3组蛋白含量较L2J3组高,差异有统计学意义(P<0.05).培养液11,12-EET含量在3组间差异无统计学意义.转染后48 h 2个转染组CYP2J3 mRNA表达较24 h时弱,但仍较对照组高,脂质体转染组较裸质粒转染组CYP2J3 mRNA表达增强;2J3组及L2J3组蛋白含量均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01);2个转染组培养液中11,12-EET浓度较对照组高,脂质体转染组表达高于裸质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 裸质粒直接转染能成功导入CYP2J3基因并表达产物.
关键词: 细胞色素P450单氧化酶 CYP2J3 裸质粒 基因转染 环-二十碳三烯酸 -
慢性心肌缺血的经导管基因治疗可行且有效
美国波士顿塔夫茨大学医学院Vale等的一项初步临床研究表明,对慢性心肌缺血病人,用经导管基因转移治疗是可行、安全而且可能有效的.该研究论文刊载于2001年5月1日出版的Circulation (103:2138)上.经导管的基因转移以往尚未在人类试验过,虽然在动物实验中进行过多次实验并取得了成功.曾经试验过的对人类慢性心肌缺血的基因疗法,是在心前区手术开胸后在直视下向心肌内注射血管内皮生长因子基因.Vale等报告的这项研究的目的,是在慢性心肌缺血病人中探讨经导管转移编码人类血管内皮生长因子-2的裸质粒DNA(phVEGF-2)至心肌的可行性和安全性.
-
肌肉注射大鼠胰岛素原基因治疗糖尿病大鼠的研究
目的:研究肌肉注射大鼠胰岛素原基因重组表达质粒转基因治疗对糖尿病大鼠血糖和胰岛素分泌的影响.方法:链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠糖尿病模型,经肌肉注射将大鼠胰岛素原基因重组表达质粒pCMV/proinsulin DNA裸质粒直接导入糖尿病大鼠体内,与转染同等剂量pCMV空载质粒的对照组比较,观察糖尿病大鼠血糖的影响以及体内胰岛素表达的变化.结果:①接受肌肉注射重组质粒的治疗组(A组)糖尿病大鼠血糖下降约4 mmol/L,且能维持1~2周,血浆胰岛素水平明显升高,并持续表达2周;②肌肉注射胰岛素原基因治疗后,治疗组血糖明显低于接受pCMV空载质粒对照组(B组)和糖尿病对照组(DM组)(P<0.05),治疗组胰岛素浓度也明显高于这两个对照组(P<0.05);③肌肉注射治疗组大鼠的骨骼肌能检测到大鼠胰岛素原基因mRNA的表达,而对照组则为阴性;治疗组大鼠胰腺胰岛素原基因mRNA的表达量也明显高于对照组;④免疫组化结果显示,肌肉注射治疗组大鼠骨骼肌组织可见胰岛素表达,而对照组则无表达;治疗组胰腺组织胰岛素含量较对照组明显增高.结论:糖尿病大鼠裸质粒肌肉注射转基因治疗可获得胰岛素的有效表达,并有效降低糖尿病大鼠的血糖水平.
-
超声微泡造影剂与靶向治疗
基因治疗是近年来生命科学研究的热点,但迄今为止缺乏安全、高效的基因载体及基因转移方法,目前常用的病毒载体存在免疫原性和致突变性,而裸质粒等非病毒载体又存在转染率低、靶向性差等缺陷.因此,发展安全、高效、可控、简便实用的基因载体及基因转移方法己成为基因治疗研究的重点.超声医学在长期发展中,从诊断超声、治疗超声走向两个新的应用领域:药物输送和基因治疗.微泡(microbubble)的使用已被证明可以大大提高超声效应即基因或药物转染效率[1].
-
脉冲高强度聚集超声增强裸质粒在鳞癌模型中转染与表达的初步研究
目的:探讨脉冲高强度聚焦超声局部辐照荷瘤裸鼠后,对经尾静脉输入的报告基因在瘤体中转染和表达的影响.材料与方法:于雌性C3H裸鼠(n=3)两侧腋窝皮下接种鳞癌组织块,待肿瘤长到体积约0.4cm3时进行实验.
-
含LacZ报告基因的PcDNA3.0裸质粒转染青光眼滤过术后家兔模型的表达
目的:观察含LacZ报告基因的裸pcDNA 3.0重组质粒在体转染小梁切除术后家兔眼的表达情况,建立动物模型,评价其应用价值,为利用裸质粒对抗青光眼术后瘢痕行基因治疗打下基础.方法:制作家兔双眼小梁切除术后模型,采用自身对照,术后1d在右眼术区局部注射含LacZ报告基因的pcD-NA30裸质粒0.1mL(100μg),左眼术区注射等剂量空质粒,通过X-gal染液原位染色检测注射后1,3,6,15d组织标本中报告基因LacZ的表达情况,绘制感染效率曲线.结果:重组pcDNA 3.0裸质粒100μg可以转染术后滤过区结膜下成纤维细胞并表达携带的基因,表达高峰期3~6 d,15d时仍可检测到少量表达细胞,对照侧各个时相点均未检测到表达.结论:重组pcDNA 3.0裸质粒可以携带外源性基因转染家兔小梁切除术后术区成纤维细胞,适用于对青光眼滤过术后动物模型行基因治疗.
-
利用pcDNA 3.0裸质粒探讨创伤愈合动物模型中转入基因的分布规律
目的通过在Wistar大鼠皮肤伤口局部应用含半乳糖苷酶(LacZ)报告基因的裸pcDNA 3.0重组质粒,建立创伤愈合转基因治疗动物模型并评价其应用价值.方法通过建立大鼠全层皮肤切割伤模型,采用自身对照,在治疗侧伤口周围局部注射重组转染裸pcDNA 3.0-LacZ质粒,通过β-gal原位染色检测注射3、30、100μg剂量后1、3、6、15天及愈合时的伤口组织标本中报告基因LacZ的表达,确定目标基因表达效率.结果报告基因LacZ主要表达于皮下成纤维细胞中,100μg剂量有较高表达,表达效率为10.3%,表达时间主要在注射后3~6天,15天时仍可检测到少量表达细胞,愈合时及对照侧各个时相点均未检测到表达.结论重组的裸pcDNA 3.0-LacZ质粒能成功转染伤口的成纤维细胞等修复细胞,表达效率及时间适用于动物创伤愈合的转基因治疗.