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重型再生障碍性贫血患者树突细胞刺激异体淋巴细胞增殖的功能
目的 了解重型再生障碍性贫血(SAA)患者树突细胞(DC)刺激异体淋巴细胞增殖的功能,探讨SAA的免疫病理机制.方法 以25例SAA患者和12例正常对照者为研究对象,以重组人白介素-4(rhIL-4)、重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)体外诱导骨髓单核细胞分化为成熟髓细胞样DC(mDC),与正常淋巴细胞按1:100、1:50作混合淋巴细胞培养(MLR),噻唑兰(MTT)比色法计算淋巴细胞增殖率.ELISA法检测MLR培养上清IL-12、干扰素γ(IFNγ)浓度.分析MLR上清液IL-4、IFNγ水平与淋巴细胞增殖率相关性.结果 SAA初治组、恢复组和对照组mDC与淋巴细胞1:100混合培养时,淋巴细胞增殖率分别为(219.8 ±94.0)%、(159.1 ±66.0)%、(160.1 ±91.9)%,培养上清IL-12水平分别为(8.2±3.6)ng/L、(6.5±2.8)ng/L、(6.1±2.6)ng/L,IFNγ,水平分别为(21.8 ±8.7)ng/L、(25.5±9.1)ng/L和(22.6±7.8)ng/L3组差异均无统计学意义(P值均>0.05).初治组、恢复组和对照组mDC与淋巴细胞1:50混合培养时,淋巴细胞增殖率分别为(322.1±171.1)%、(180.9±79.1)%、(192.3 ±91.9)%,培养上清IL-12水平分别为(12.6 ±4.4)ng/L、(9.4 ±3.3)ng/L、(8.5 ±3.7)ng/L,IFNγ,水平分别为(32.3 ±9.2)ng/L、(27.4 ±6.5)ng/L、(24.4 ±7.4)ng/L,3项指标初治组均高于对照组(P<0.05),恢复组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).MLR上清液IL-12水平与淋巴细胞增殖率呈正相关(r=0.529,P<0.01);MLR上清液IFNγ水平与淋巴细胞增殖率旱正相关(r=0.381,P<0.05).结论 SAA患者mDC刺激淋巴细胞增殖功能增强,在SAA发病中起重要作用.
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西咪替丁提高胃肠癌区域淋巴细胞反应的临床研究
目的:研究胃肠癌患者围手术期运用西咪替丁(CIM)对肿瘤局部免疫反应的影响.方法:49例胃肠癌患者随机分成治疗组25例和对照组24例,前者围手术期服用CIM,后者不用此药.两组患者均行根治术.常规HE染色,取肿瘤边缘组织,每高倍视野下≥100个淋巴细胞称为反应明显,＜100个淋巴细胞称为反应不明显.结果:镜下观察发现25例治疗组中17例(68%)出现明显淋巴细胞浸润反应,24例对照组中有6例(25%)出现明显淋巴细胞浸润反应(P＜0.01).治疗组的淋巴细胞反应阳性率与TNM分期呈正相关,对照组中淋巴细胞反应阳性率与TNM分期呈负相关,两组患者淋巴细胞反应阳性率在Ⅲ、Ⅳ期有显著性差异.结论:CIM拮抗肿瘤局部组织胺的免疫抑制作用,提高淋巴细胞反应,可能是CIM提高肿瘤患者生存期的机理之一.
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曲古菌素A诱导急性髓性白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86的研究
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)诱导急性髓性白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86.方法:流式细胞仪检测TSA诱导HL-60细胞、急性髓性白血病患者单个核细胞表达共刺激分子CD80和CD86及细胞活力;RT-PCR法分析CD80和CD86 mRNA的表达情况;75Gy(gray,Gy)照射TSA诱导的HL-60细胞后,采用CCK-8法检测共刺激分子表达增高后,HL-60细胞对健康人单核细胞的增殖作用.结果:TSA使HL-60细胞CD86的表达上调,也可急性髓性白血病患者单核细胞CD86的表达上调,TSA诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,可促进健康人单核细胞的增殖.结论:TSA诱导HL-60细胞、急性髓性白血病患者单核细胞共刺激分子CD86表达增高,促进健康人单核细胞的增殖.
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腹膜透析患者血中树突状细胞数量及活性研究
目的:了解腹膜透析患者血中树突状细胞(DC)的数量及活性.方法:取正常人23例和尿毒症患者21例外周血,患者分为未透析和腹膜透析组,分离外周血单个核细胞,细胞因子[粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]体外诱导培养,流式细胞仪检测细胞表面标志表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定DC分泌白介素12(IL-12)的量;混合淋巴细胞反应评价细胞的抗原递呈能力.结果:与正常组比较,尿毒症患者血中DC表达CD1a、CD11c、CD123、CD40、CD80、CD83较低, 腹膜透析组DC表达CD1a、CD11c、CD123接近正常,但表达CD40、CD80、CD83仍较低(P<0.05);尿毒症患者DC分泌IL-12减少及刺激淋巴细胞增殖的能力均减低 (P<0.01).结论:尿毒症患者血中DC数量减少且不成熟,抗原递呈功能缺陷,腹膜透析患者DC数量正常,但DC抗原递呈活性仍低.
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中国人类免疫缺陷病毒-1B亚型Gag蛋白特异性T淋巴细胞的免疫应答
大量研究证明，细胞免疫特别是HIV特异性CTL在控制HIV感染中发挥关键作用[1]。HIV-1特异性CTL应答不仅由HIV-1特异性抗原蛋白结构决定，同时也受到特异性人类白细胞抗原(HLA)I类抗原的限制。不同人群HLA-I类基因型分布频率不同，决定了不同人群HIV-1特异性CTL应答模式的不同[2]。目前HIV-1特异性CTL应答研究主要集中在白种人和黑种人，有关中国人HIV-1特异性CTL应答的研究不多，结论也不一致[3-4]。因此，本实验选用既往研究证明应答频率较高的结构蛋白Gag为靶蛋白，进一步明确中国人HIV-1特异性T淋巴细胞应答特点及HIV-1特异性T淋巴细胞反应与临床疾病进展的相关性。
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转染IκB激酶2的显性负性突变体的受者未成熟树突状细胞诱导产生的CD4+ CD25- T细胞致耐受特性
目的 探讨体外转染抑制性蛋白IκB激酶2的显性负性突变体(IKK2dn)基因的受者大鼠未成熟树突状细胞(imDC)诱导产生的CD4+ CD25-T细胞致耐受作用的特性及机制.方法 将含IKK2dn基因的腺病毒载体按1:200的感染复数(200 MOI)体外转染受者Lewis大鼠骨髓源性imDC,2d后负载供者BN大鼠抗原,48 h后与受者大鼠T细胞初次混合淋巴细胞反应(MLR),72 h后免疫磁珠法分离筛选混合淋巴细胞反应(MLR)中诱导产生的CD4+ CD25-T细胞,将获得的CD4+ CD25-T细胞与受者大鼠T细胞再次MLR 72h,检测其对T细胞增殖反应的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定MLR上清中白细胞介素(IL)-2、IL-10、转化生长因子(TGF)-β和干扰素(IFN)-γ的水平.结果 Western blot结果显示,转染IKK2dn基因的imDC稳定、高效表达IKK2dn.转染IKK2dn受者imDC诱导产生的CD4+T细胞低表达CD25(18.50±1.40)％,与未转染组(72.20±3.30)％及转染空载体组(63.70±1.80)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05).转染IKK2dn诱导产生的CD4+CD25-T细胞能抑制异种抗原刺激引起的受者T细胞的增殖反应(0.044±0.006),与转染空载体所诱导产生的CD4+T细胞比较(0.419±0.014),差异有统计学意义(P＜0.05).MLR中高比例的CD4+CD25-T细胞能够明显抑制受者T细胞的增殖反应(0.044±0.006),与低比例组比较(0.106±0.006),差异有统计学意义(P＜0.05),且CD4+ CD25-T细胞介导的MLR上清液中IL-10、TGF-β水平明显升高(P＜0.05),IL-2、IFN-γ水平明显降低(P＜0.05).结论 转染IKK2dn基因并负载供者抗原的受者imDC可以诱导受者T细胞产生CD4+ CD25-T细胞,此种CD4+ CD25-T细胞能够引起受者T细胞针对供者抗原的特异性低反应,具有诱导免疫耐受的作用.
