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核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响
目的 探讨核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对db/db小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响及其作用机制.方法 根据随机数字表将12只体质量44.5～48.2 g的9周龄雄性db/db小鼠随机分至对照组(n=6)和实验组(n=6).实验组db/db小鼠尾静脉注射制备的核糖体蛋白S6激酶1短发夹RNA重组基因腺病毒,对照组db/db小鼠尾静脉注射含U6启动子空载体腺病毒.在注射病毒后第6天处死小鼠获取肝脏,提取肝脏蛋白,利用Western blot法观察其中胰岛素受体底物1、胰岛素受体底物2、蛋白激酶B及其丝氨酸473蛋白的表达;提取肝脏总RNA用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测比较2组参与肝脏脂肪酸合成基因mRNA的表达.处死2组小鼠前1 d禁食16 h后经尾静脉取血,采用比色法检测游离脂肪酸、甘油三酯、总胆固醇水平.组间数据比较采用t检验.结果 db/db小鼠注射病毒后6 d,苏木素-伊红染色显示实验组肝细胞胞质含脂肪滴较对照组减少,脂肪肝得到改善.Western blot检测显示实验组核糖体蛋白S6激酶1蛋白表达被抑制,与对照组相比差异有统计学意义(分别为0.12±0.01和0.87±0.06,t=5.36,P＜0.05);实验组胰岛素受体底物1、胰岛素受体底物2、蛋白激酶B丝氨酸473的蛋白表达均较对照组增强(均P＜0.05).和对照组相比,实验组参与脂肪酸合成的基因固醇调节元件结合蛋白1c(分别为2.33±0.29和1.34±0.39,t=3.46,P＜0.01)、脂肪酸合成酶(分别为7.8±1.2和3.4±0.4,t=4.67,P＜0.01)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(764±116和535±54,t=6.12,P＜0.01)mRNA表达均明显下降.血清生化测定结果显示和对照组相比实验组脂肪酸下降(t=2.64,P＜0.05),胆固醇水平降低(t=4.25,P＜0.01),甘油三酯组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论在营养过剩的条件下,肝脏核糖体蛋白S6激酶1过度激活,可能通过负反馈引起肝脏胰岛素信号传导下降、上调脂代谢关键调控基因固醇调节元件结合蛋白1c表达而参与了肝脏胰岛素抵抗和脂肪肝的发生.
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七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注时心肌细胞p70S6K表达的影响
目的 评价七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注时心肌细胞核糖体40S小亚基蛋白S6激酶(p70S6K)表达的影响.方法 取Langendorff心脏模型制备成功的大鼠心脏90个,采用随机数字表法分为3组(n=30):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚后处理组(SP组).离体心脏缺血30 min,再灌注2h.SP组于缺血末至再灌注15 min灌注经3.0％七氟醚饱和的K-H液,随后更换为正常K-H液再灌注105 min.于再灌注2h时测定心肌梗死体积,计算心肌梗死体积百分比,采用Western blot法检测心肌细胞p-p70S6K/t-p70S6K、细胞质和线粒体细胞色素c和caspase-8的表达水平.结果 与S组比较,I/R组心肌梗死体积百分比升高,心肌细胞p-p70S6K/t-p70S6K、细胞质细胞色素c和caspase-8表达上调,线粒体细胞色素c表达下调(P＜0.05);与I/R组比较,SP组心肌梗死体积百分比降低,心肌细胞p-p70S6K/t-p70S6K和线粒体细胞色素c表达上调,细胞质细胞色素c和caspase-8表达下调(P＜0.05).结论 七氟醚后处理可减轻离体大鼠离体心脏缺血再灌注损伤,其机制与上调心肌细胞p-p70S6K表达,抑制线粒体细胞色素c转移至细胞质,从而减少细胞凋亡有关.
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mTOR/P70S6K 信号通路在宫颈癌组织中的表达及其临床意义
目的：探讨 mTOR/ P70S6K 信号通路在宫颈癌组织中的表达水平及其相关临床诊断、治疗意义。方法收集2012年1月—2014年1月手术切除或进行活检的正常宫颈组织65例,宫颈癌组织、癌旁组织各85例,提取组织中的 mRNA,应用 RT-PCR 的方法来检测3种组织中 mTOR 和 P70S6K mRNA 的表达水平,并进行分析。结果宫颈癌组织中 mTOR、P70S6K mRNA 的表达明显高于癌旁组织及正常组织(P <0．05),mTOR、P70S6K mRNA 水平在宫颈癌组织、癌旁组织及正常组织中均呈正相关(P <0．05)。结论 mTOR 信号通路在宫颈癌组织中处于活化状态,其在宫颈癌的发生发展以及向其他部位转移中具有重要作用,是一个诊断和治疗的分子靶点。
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蟾蜍令灵对裸鼠食管鳞癌原位移植瘤中 P70S6K 表达的影响
背景食管癌是世界上常见的消化道恶性肿瘤之一，近年研究发现，核糖体蛋白 S6激酶（P70S6K）与其发生密切相关。笔者前期的研究表明，蟾蜍令灵（Bufalin）有明显的抗肿瘤作用。目的探讨 Bufalin 对裸鼠食管鳞癌原位移植瘤中 P70S6K 表达的影响。方法 Nu/ Nu 健康裸鼠36只，雌雄各半，采用随机数字表法分为4组，每组9只，即对照组（0.9%氯化钠溶液）、Bufalin 低剂量（0.5 mg/ kg，BL）组、Bufalin 中剂量（1.0 mg/ kg，BM）组、Bufalin 高剂量（1.5 mg/ kg，BH）组。观察经 Bufalin 治疗后裸鼠肿瘤生长情况；反转录 PCR（RT - PCR）法检测裸鼠原位移植瘤中 P70S6K mRNA 的表达，Western blotting 及免疫组化法检测裸鼠原位移植瘤中 P70S6K 和p - P70S6K相对表达量。结果4组治疗前及治疗后第1天裸鼠体质量比较，差异无统计学意义（P >0.05）。4组治疗前肿瘤体积比较，差异无统计学意义（P >0.05）；治疗后第15天肿瘤体积比较，差异有统计学意义（P <0.05）。治疗后第15天，BM组、BH 组肿瘤体积均低于 BL 组和对照组（P <0.05）。3组肿瘤抑制率比较，差异有统计学意义（ P <0.05）。4组P70S6K mRNA 及 P70S6K 相对表达量比较，差异无统计学意义（F =0.634、0.119，P >0.05）。4组p - P70S6K相对表达量比较，差异有统计学意义（F =233.005，P <0.05）。结论 Bufalin 对裸鼠食管鳞癌原位移植瘤具有抑制作用；Bufalin 可以下调 P70S6K 的磷酸化水平，而 P70S6K 则不受影响，提示 Bufalin 可能通过抑制 P70S6K 活化而发挥作用。
关键词： 食管肿瘤 蟾蜍令灵 核糖体蛋白质S6激酶类 70-kDa 原位移植瘤 -
氧化型低密度脂蛋白通过Akt/mTOR/p70S6K通路诱导血管内皮细胞自噬
目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, oxLDL)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)自噬和Akt/mTOR/p70S6K信号通路的影响.方法 将培养的HUVECs分为oxLDL组和对照组,分别用100 μg/ml oxLDL和等体积磷酸盐缓冲液处理.在培养6 h和12 h后收集细胞.应用透射电子显微镜观察自噬小体,实时荧光定量聚合酶链反应检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3)和p62 mRNA表达,应用蛋白质印迹法检测LC3、p62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR和p-p70S6K/p70S6K蛋白表达.结果 与对照组相比,oxLDL处理组细胞内的自噬小体数量明显增多(P<0.05),LC3 mRNA及蛋白表达水平均显著增高(P均<0.05),而p62 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05).此外,oxLDL处理组Akt、mTOR、p70S6K磷酸化蛋白表达水平均较对照组显著降低(P均<0.01),但Akt、mTOR和p70S6K总蛋白表达水平与对照组无显著差异.结论 oxLDL可通过抑制Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导HUVECs自噬.
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mTOR信号通路与肿瘤研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是1991年从酵母中分离出的一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是多条信号通路的关键蛋白分子，在体内参与多种细胞增殖、分化、自噬、凋亡及周期调控，是近年来在肿瘤领域的研究热点并已取得很大进展。本文就其与常见肿瘤的关系作一综述。
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miR-181b影响ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的自噬调节机制
目的 探讨微小RNA 181b(miR-181b)是否通过调节自噬相关靶蛋白参与动脉粥样硬化发展.方法通过颈总动脉套环诱导ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块形成.通过尾静脉注射miR-181b慢病毒载体构建其过表达(miR-181bOE)及低表达(miR-181bKD)模型.检测血浆中脂质水平,苏木精-伊红染色对动脉粥样硬化斑块大小和体积进行定量,Western Blot检测自噬相关蛋白的表达.结果各组ApoE-/-小鼠血浆中总胆固醇 、三酰甘油 、低密度脂蛋白胆固醇水平均无显著差异(P>0.05).MiR-181bKD和miR-181bOE分别显著减少和增加颈动脉斑块面积和体积(F=118.95~322.03,P<0.05).MiR-181bOE可下调微管相关蛋白1轻链3膜结合型(LC3-Ⅱ)的表达,上调核糖体蛋白质S6激酶类70-kDa(p70S6K)表达,抑制自噬体形成;相反,miR-181bKD可上调LC3-Ⅱ 的表达,下调p70S6K表达,促进自噬体形成.差异均有显著性(F=107.38~398.13,P<0.05).结论抑制miR-181b可能通过下调p70S6K表达增加自噬活性,延缓颈动脉粥样硬化斑块的形成.
关键词： 动脉粥样硬化 微RNAs 自噬体 核糖体蛋白质S6激酶类 70-kDa
