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外用冻干重组人酸性成纤维细胞生长因子(艾夫吉夫)对15例溃疡创面的临床应用
在我们治疗过程中,常常会遇到各种难治的创面,无论是深度烧烫伤造成的不愈创面,还是感染导致的溃疡创面,长期卧床导致的褥疮,都是目前每个医生都头痛的问题,往往得通过手术治疗来解决.
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艾夫吉夫联合金霉素眼膏治疗浅Ⅰ度创面溃疡1例
压疮是昏迷、瘫痪、长期卧床的常见并发症之一,常由浅表溃疡创面发展而成,一旦演变成压疮不仅给患者增加痛苦,加重病情,延长病程,严重时可因感染引起败血症而危及生命.我科采用艾夫吉夫(外用冻干重组人酸性成纤维细胞生长因子)联合金霉素眼膏治疗1例浅Ⅰ度溃疡创面患者,效果显著,现将治疗方法介绍如下.
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重组人酸性成纤维细胞生长因子脂质体应用于冠心病治疗的研究
冠状动脉粥样硬化性心脏病或称冠状动脉性心脏病,简称冠心病(CHD),又称缺血性心脏病;它是因供应心脏本身的冠状动脉管壁形成粥样斑块造成血管腔狭窄所致心脏病变.同时心肌缺血引致的左心室室壁瘤,心肌栓塞后心室间隔缺损和乳头肌缺血引起的二尖瓣关闭不全,是中老年常见多发的后天性心脏病,并日益成为当代死亡率高的疾病之一.
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杀菌/通透性增加蛋白23-人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白在CHO细胞中的表达及活性鉴定
杀菌/通透性增加蛋白(BPI)是一种主要存在于中性粒细胞内的阳离子抗菌蛋白,具有杀菌、中和内毒素和抗真菌等作用,并且在发生生物学效应时,对机体不产生任何损害,在革兰阴性菌感染的治疗方面有很好的应用前景[1].研究表明,BPI N端片段BPI23(1~199氨基酸)具有完整BPI杀菌、中和内毒素等活性.人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)具有广泛的生物学活性,能促进伤口愈合,在治疗烧伤、机体缺血损伤、溃疡等方面具有极为广泛的应用前景、特别是在创伤修复方面,haFGF应用甚广,其活性部位主要集中在C端[2,3].
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TAT-haFGF14-154对小鼠的急性毒性和免疫原性
目的 研究人酸性成纤维细胞生长因子(Human acidic fibroblast growth factor,haFGF)和穿膜肽(Transcriptional activator protein,TAT)融合蛋白TAT-haFGF14-154在小鼠体内的急性毒性反应和免疫原性,初步评价其安全性.方法 取昆明小鼠,单次经尾静脉注射10 mg/kg TAT-haFGF14-154,观察并记录14d内小鼠的一般行为、中毒死亡情况和体重变化,各组织脏器中毒情况,HE染色观察各组小鼠大脑组织病理学变化.将900μg/kgTAT-haFGF14-154分别经静脉和鼻腔免疫昆明小鼠,每隔2d给药1次,分别于给药后的第1、2、3、4周经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价;分别将高(300 μg/kg)、中(100 μg/kg)、低(35μg/kg)剂量的TAT-haFGF14-154经鼻腔免疫快速老化小鼠(SAM P8),每隔2d给药1次,30 d后处死小鼠,经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价.结果 在整个急性毒性试验过程中,小鼠无一例死亡,体重变化正常,大脑未见明显病理学改变;TAT-haFGF14-154对小鼠的大耐受剂量大于10mg/kg;昆明小鼠经鼻腔给予TAT-haFGF14-154后,第3周产生抗体,而静脉给药后第2周即有抗体产生;抗体产生的强度呈剂量依赖性.结论 TAT-haFGF14-154属于弱毒性药物,但具有免疫原性,静脉给药的免疫原性强于鼻腔给药.
关键词: 急性毒性 免疫原性 人酸性成纤维细胞生长因子 穿膜肽 鼻腔给药 -
重组人aFGF工程菌发酵条件的优化
目的 优化重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)工程菌的发酵条件.方法 采用分批补料方式,在菌体快速生长阶段,通过变速流加碳源和氮源,控制流加比例,调节pH值和溶解氧(DO)含量,实现工程菌的高密度发酵及目的 蛋白的高效表达.结果 当碳源与氮源流加比例为3∶1时,菌体湿重可达145 g/L,干重达36 g/L,目的 蛋白表达量达28.9%;DO控制在20%时,全菌体和裂解液中目的 蛋白的表达量均高,分别可达29.11%和44.28%.结论 已初步优化了rhaFGF工程菌的发酵条件.
关键词: 人酸性成纤维细胞生长因子 工程菌 发酵 溶氧量 -
抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性鉴定
目的:构建和表达一种抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白,在创伤皮肤表面应用时能裂解成有功能的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子,预防伤口感染和促进皮肤修复.方法:利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽基因和人酸性成纤维细胞生长因子基因.再将两者作为模板,用PCR方法扩增出编码融合蛋白的DNA.将该DNA片段插入到载体pPICZαA中,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd1168中,Zeocin抗性筛选重组转化子.甲醇诱导96 h,SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的表达,并用Western-blot杂交检测融合蛋白的免疫原性.利用肝素亲和层析纯化融合蛋白,同时检测融合蛋白的抑菌和促3T3Bal/b细胞分裂活性.结果:筛选出能表达相对分子质量约为19 kD融合蛋白的重组转化株,SDS-PAGE电泳检测显示甲醇诱导96 h后,融合蛋白表达量达到高,且能与人酸性成纤维细胞生长因子抗体产生免疫反应.融合蛋白没有抑菌活性,而裂解产物则具有抑菌活性.此外,融合蛋白的促细胞分裂活性与野生型人酸性成纤维细胞生长因子相比没有明显的降低.结论:获得含凝血酶切割位点的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白,并在毕赤酵母中实现了表达.融合蛋白的裂解产物具有抑菌活性.
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重组人酸性成纤维细胞生长因子治疗乳腺癌根治术后皮瓣坏死的临床观察
皮瓣坏死所引起的创面愈合困难是乳腺癌根治术后的常见并发症,不但严重影响病人的生活质量,还延迟了术后化疗、放疗等综合治疗,临床上一直缺乏有效的措施[1].
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人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体pEGFP-N1-haFGF.方法 PCR扩增人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)基因,BglⅡ和HindⅢ双酶切后克隆入真核表达载体pEGFP-N1,构建haFGF真核表达载体pEGFP-N1-haFGF,并经限制性酶谱分析和DNA测序对重组表达载体的正确性进行鉴定.结果 重组真核基因表达载体pEGFP-N1-haFGF经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ酶切,DNA电泳显示465 bp的haFGF目的 片段和4 700 bp的pEGFP-N1载体片段,重组载体经DNA测序显示所克隆的haFGF 基因核苷酸顺序与Genbank中记载的haFGF序列一致.结论 本实验成功构建人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体,为进一步研究haFGF的功能奠定基础.
关键词: 人酸性成纤维细胞生长因子 pEGFP-N1载体 真核表达载体 -
酸性成纤维细胞生长因子对人脐静脉血管内皮细胞一氧化氮生成的影响
目的: 观察人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)及其非促分裂型突变体(nmhaFGF)对人脐静脉血管内皮细胞(HEC)一氧化氮(NO)生成的影响.方法: 实验分3组,分别为haFGF组、nmhaFGF组和对照组.用Griess反应法检测细胞培养上清NO相对含量(NO-2).结果: haFGF和nmhaFGF都能诱导内皮细胞NO的生成,但同样条件下,nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量与对照组比较在0.10、1.00、10.00、50.00、100.00 ng/mL时均高(P<0.01).与haFGF组比较在0.10、1.00、10.00、50.00 ng/mL时nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量明显下降(P<0.01),在0.01和100.00 ng/mL时也有降低(P<0.05).结论: nmhaFGF仍保留一定的诱导内皮细胞产生NO的作用,但NO生成量有显著下降.
关键词: 人酸性成纤维细胞生长因子 内皮细胞 一氧化氮 -
非促有丝分裂型人酸性成纤维细胞生长因子对细胞增殖活性的影响
目的研究观察人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)和N端缺失27个氨基酸残基的非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenetic human acidic fibroblast growth factor,nm-haFGF)对鼻咽癌细胞及血管内皮细胞增殖活性的影响.方法用不同浓度(0.01~100ng/ml)的人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)及nm-haFGF分别刺激鼻咽癌细胞及血管内皮细胞,作用48h后采用MTT法测定haFGF和nm-haFGF对两种细胞的增殖活性.结果在各浓度(>0.01 ng/ml)下,nm-haFF组对鼻咽癌细胞(除浓度为50ng/ml外)和血管内皮细胞的促增殖作用都显著低于haFGF组.结论nm-haFGF对鼻咽癌细胞及血管内皮细胞的促分裂活性下降.
关键词: 人酸性成纤维细胞生长因子 MTT法 有丝分裂 -
人酸性成纤维细胞生长因子基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化、鉴定
用Hind Ⅲ和EcoRⅠ双酶酶切经改造的PUC-aFGF质粒,获得了人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)基因,将该基因片段插入表达载体pkk223-3,筛选得到了重组质粒pkk-haFGF.加IPTG诱导该质粒转化的大肠杆菌JM109表达,haFGF在发酵液中的表达水平约80mg/L.用肝素亲和层析的方法,获得了电泳纯haFGF样品.纯化过程中haFGF活力回收率为65%.纯化haFGF样品的比活性为ED50 4.6ng/ml,理化及生物活性分析与天然haFGF对照品完全一致.
关键词: 人酸性成纤维细胞生长因子 基因克隆和表达 分离纯化 鉴定 -
重组人酸性成纤维细胞生长因子治疗深Ⅱ度烧伤创面的临床观察
成纤维细胞生长因子(FGF)是一组蛋白质结构相关的超家族,酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)为其2个主要成员.目前认为,所有源于内胚层和神经外胚层的细胞均经aFGF或bFGF的刺激而分化,由于aFGF在胚胎发生、发育、血管发生和创伤愈合等方面具有重要作用,其应用前景备受关注.为明确aFGF对深Ⅱ度烧伤创面的治疗效果,笔者选择32例患者进行同体对比观察.