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子宫颈癌组织中SOX1和LMX1A基因的甲基化状态
宫颈癌的发病率和病死率在女性恶性肿瘤中仅次于乳腺癌,位居第2位 ~([1]).迄今为止,宫颈癌发生的确切分子机制尚不清楚.目前的研究发现,多种肿瘤相关基因表达的下调或缺失与宫颈癌的发生、发展有关.
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肺癌细胞中SOX1调控ECT2的表达
目的：探讨肺癌细胞中SOX1基因是否直接调控ECT2的表达。方法运用甲基化特异PCR法检测50例原发肺癌和癌旁组织中SOX1的甲基化水平。以肺癌细胞株A-1细胞为研究对象，Realtime-PCR检测ECT2表达情况。通过荧光素酶报告检查法以及染色体免疫共沉淀方法检测SOX1基因是否直接调控ECT2的表达。免疫组化检测50例肺癌组织中ECT2与SOX1表达的关系。结果原发性肺癌的甲基化异常检出率是70%（35/50）。过表达SOX1后A-1细胞中ECT2表达下降，而siRNA抑制SOX1后ECT2表达升高，荧光素酶报告检查法以及染色体免疫共沉淀方法提示SOX1可直接与ECT2启动子结合，抑制ECT2的表达。SOX1与ECT2在肺癌组织中表达负相关（r=-0.433，P=0.001）。结论肺癌细胞A-1中SOX1基因直接调控ECT2的表达。
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Sox1抑制膀胱癌增殖及转移的作用及分子机制研究
目的:研究Sox1抑制膀胱癌增殖及转移的作用及分子机制.方法:通过慢病毒系统在T24细胞中上调Sox1的表达,在激光共聚焦显微镜下观察其结果,并通过相关实验观察其反应.结果:激光共聚焦显示Sox1定位于细胞核内,可显著抑制肿瘤细胞增殖能力;细胞侵袭实验表明Sox1可显著抑制细胞的迁移和侵袭能力;荧光素酶报告基因结果显示Sox1可以抑制β-catenin转录活性.结论:Sox1是重要的抑癌基因.本研究揭示了膀胱癌发生及转移的新机制,加深了对膀胱癌发生和转移的认识.
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小鼠SRY同源盒基因SOX1的克隆及其真核表达载体pEGFP-C3-SOX1的构建
目的:克隆小鼠SRY同源盒基因SOX1的全长cDNA,构建其携带增强型荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C3-SOX1,为进一步研究SOX1在间充质干细胞神经分化中的作用奠定基础.方法:采用RT-PCR方法从小鼠早期胚胎中扩增带有EcoRⅠ和HindⅢ双酶切位点的SOX1 cDNA片断,与pGEM-T载体连接后转化感受态细菌JM109,然后通过蓝白筛选、酶切技术筛选、鉴定出阳性菌落并进行DNA测序.用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切获得目的片断,再与EcoRⅠ和HindⅢ双酶切过的pEGFP-C3质粒相连接,重组子转化JM109感受态大肠杆菌,酶切方法鉴定阳性菌落.结果:多酶切及DNA测序结果表明提取及纯化的pEGFP-C3-SOX1质粒含有SOX1 cDNA碱基片段,方向及大小正确.结论:从小鼠胚胎中可成功克隆SOX1全长cDNA,并构建其真核表达载体pEGFP-C3-SOX1.
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miR-155-5p通过调节SOX1的表达促进乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭与迁移
目的 研究肿瘤相关微小RNA(microRNA,miRNA)miR-155-5p在乳腺癌细胞系MCF-7中调控性别决定区Y框蛋白1(sex determining region Y-box 1,SOX1)蛋白表达的机制,探讨其对MCF-7侵袭转移能力的影响.方法 在乳腺癌细胞系MCF-7中上调或下调miR-155-5p的表达,采用小室迁移实验(Transwell)检测细胞的迁移、侵袭能力的改变;real-time PCR及Western blot法分别检测SOX1 mRNA及蛋白表达水平;免疫荧光检测SOX1蛋白的分布及表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-155-5p与SOX1 mRNA的3'-UTR结合情况.结果 上调miR-155-5p,MCF-7细胞的侵袭与迁移能力增强,SOX1 mRNA及蛋白表达水平下降(均P<0.05);反之,抑制miR-155-5p,细胞的侵袭与迁移能力减弱,SOX1表达上升(均P<0.05).随后的双荧光素酶报告实验表明,miR-155-5p可与SOX1 mRNA 3′-UTR端的特定序列结合,调控SOX1表达转录后水平.结论 miR-155-5p通过抑制SOX1的表达来促进乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭与迁移.
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SOX1对鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响
目的 观察SOXl基因过表达对鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响.方法 采用脂质体Lipofectamin2000介导的方法,将SOXl基因转入鼻咽癌细胞CNE2和HONE1中,RT-PCR和Western blot法检测转染空载体对照组及转染SOX1过表达组鼻咽癌细胞中SOX1基因的表达,并用MTT法检测两组鼻咽癌细胞对化疗药物的敏感性.结果 RT-PCR和Western blot法表明,转染过表达组鼻咽癌细胞的SOX1基因的mRNA及蛋白表达水平均较对照组明显增强,MTT法结果表明过表达SOX1的鼻咽癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性显著提高(P＜0.05).结论 转染外源性SOX1并使之在鼻咽癌细胞中过表达,能提高CNE2和HONE1细胞对化疗药物的敏感性.
