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粘多糖贮积症Ⅱ型IDS基因的1343-TT新突变
目的研究中国粘多糖贮积症Ⅱ型(MPSⅡ)艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)的基因突变,为产前基因诊断打下基础.方法应用尿粘多糖含量检测、聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)对1例MPSⅡ患儿及其父母的IDS基因的突变热点exons 9,3,8,进行突变检测,并对PCR-DHPLC 检出的突变样品进行直接测序.结果经PCR-DHPLC分析,发现患儿的IDS基因exon 9有明显异常峰形;DNA序列分析进一步发现,患儿IDS基因的exon 9发生1343-TT新移码突变,突变部位在第407位密码子(TTT)内,即IDS基因cDNA 第1343 bp的T后缺失了2个T,并在第429位提前遇上终止密码TGA,导致肽链从550个氨基酸缩短至428个.患儿为这一突变的半合子,而其母为这一突变的杂合子.结论新发现的移码突变(1343-TT)导致肽链比正常的少了122个氨基酸,极可能引起酶活性大大降低,因此可能是该MPSⅡ患儿发病的真正原因.
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粘多糖贮积症Ⅱ型的酶学诊断、产前诊断及临床分析
目的 检测硫酸艾杜糖-2-硫酸酯酶酶活性,对粘多糖贮积症Ⅱ型疾病进行诊断及产前诊断.方法 设置荧光检测仪激发波长355μm,发射波长460μm,检测处理后的血浆或细胞上清液.结果 共测17标本,门诊患者10例,其中1例为女性,硫酸艾杜糖-2-硫酸酯酶酶活性均异常；胎儿产前诊断7例,根据酶活性结果判定5例正常,2例患病.结论 荧光酶学方法检测粘多糖贮积症Ⅱ型疾病操作快速、诊断明确.
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Hunter综合征患者IDS基因的一个新突变
目的研究Hunter综合征患者的艾杜糖-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase,IDS)基因的突变情况,为产前基因诊断等打下基础.方法应用尿粘多糖含量检测、聚合酶链反应-变性高效液相色谱(polymerase chain reaction-denaturing high-performance liquid chromatography,PCR-DHPLC)分析对1例Hunter综合征患者及其父母的IDS基因的突变热点第9、3、8外显子进行突变检测, 并对PCR-DHPLC检出的突变样品进行直接测序.结果经PCR-DHPLC分析发现该患者的IDS基因第9外显子有明显异常峰形;DNA序列分析进一步发现该外显子发生一新的移码突变,突变部位在第482位密码子(TTA)内,即cDNA第1569 bp的T后插入了2个T,致使新肽链提前在第483位遇上终止密码TAA,导致新肽链从原来的550个氨基酸缩短至482个.该患儿为这一突变的半合子,而其母为这一突变的杂合子.结论 PCR-DHPLC和DNA序列分析是诊断Hunter综合征的有效方法,发现的移码突变(1569+TT)导致肽链比正常的少了68个氨基酸,从而引起IDS酶活性明显降低,可能是该Hunter综合征患者的致病原因.
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粘多糖贮积症Ⅱ型患者IDS基因的一个新突变
目的研究粘多糖贮积症Ⅱ型(mucopolysaccharidosis typeⅡ,MPSⅡ)患者的艾杜糖-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase,IDS)基因的基因突变. 方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism, PCR-SSCP)对患者的IDS基因可能的常见突变第2、3、5、7～9外显子进行检测,并对PCR-SSCP检出的突变进行直接测序,测序发现的突变进行PCR-限制性酶切分析验证.结果经PCR-SSCP和DNA序列分析发现该患者的第7外显子发生新的点突变(G1253T);聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)电泳检测示患者和母亲出现突变导致的酶切位点,进一步验证了序列分析结果. 结论筛查所得的点突变G1253T可能是该MPSⅡ患者的致病原因.
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粘多糖贮积症Ⅱ型患者艾杜糖-2-硫酸酯酶基因常见突变的检测
目的探讨并建立粘多糖贮积症Ⅱ型(mucopolysaccharidosisⅡ,MPSⅡ)患者艾杜糖-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulphatase, IDS)基因常见突变的检测方法.方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)对IDS基因突变热点外显子3、8和9进行点突变检测;应用DNA测序对PCR-SSCP检出的突变进行序列分析;应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)对DNA测序的结果进行检测. 结果经PCR-SSCP发现该患者的IDS基因外显子9有明显异常泳动的条带;DNA测序发现患儿的外显子9发生点突变(C1672T),从而导致患者艾杜糖-2-硫酸酯酶蛋白发生氨基酸替换(R468W);PCR-RFLP电泳检测结果显示粘多糖贮积症Ⅱ型患者仅出现554 bp 1条带,而患儿父母出现257 bp和297 bp 2条带,进一步验证了序列分析的结果. 结论 PCR-SSCP分析、DNA序列分析和PCR-RFLP分析是诊断MPSⅡ的有效方法,三者联合使用可以相互验证、互为补充,提高基因诊断的准确率和成功率.
关键词： 粘多糖贮积症Ⅱ型 聚合酶链反应-单链构象多态性 突变检测 -
1例粘多糖贮积症Ⅱ型IDS基因的新发突变
粘多糖贮积症(mucopolysaccharidosis,MPS),简称粘多糖病,是一种因蛋白聚糖降解酶先天性缺陷所引起的蛋白聚糖分解代谢障碍性疾病.由于溶酶体内酶活性下降或者缺乏,机体分解粘多糖障碍,导致这些粘多糖分子在细胞内、血液和结缔组织中沉积,从而产生相应的临床症状,可分为MPSⅠ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅵ型、Ⅶ型、Ⅺ型和数种亚型.各型MPS的代谢基础相似,但遗传类型和临床表现各不相同.研究表明,MPS群体发病率在1/25 000～1/400 000,MPSⅡ型中国报道为1∶132 000.现报道1例MPSⅡ新发基因突变.
