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耐多药肺结核耐药基因突变与临床疗效探讨
目的了解耐多药肺结核耐药基因的突变与临床疗效的关系,为耐多药肺结核的治疗提供参考依据.方法 108例病人痰标本用PCR-SSCP方法检测了五种耐药基因和传统的药敏试验,并与临床疗效进行比较分析.结果耐多药肺结核耐药基因检测率分别是耐异烟肼的katG基因突变率为70.4%,耐利福平的rpoB基因突变率72.2%,耐链霉素的rpsL基因突变率71.9%,耐吡嗪酰胺的pncA基因突变率53.4%,耐乙胺丁醇的embB基因突变率31.7%,其中高浓度耐药菌的基因突变率远高于低浓度的突变率.根据药敏试验及耐药基因检测结果指导治疗,应用以KAOP为基础的化疗方案,配合患者过去未曾用过的1～2种抗结核药物,经过平均1.4年的治疗,108例耐多药病人74.1%的病人痰菌阴转,且67.5%的病人痰结核杆菌培养阴转,83.3%的病人病灶吸收好转,65.3%的空洞闭合,取得了临床上较为满意的疗效.结论对耐多药肺结核进行耐药基因检测是一项重要工作,对指导治疗及预后判断有一定的参考价值.但尚需进行更多的观察.
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DNA序列分析与PCR-SSCP分析结核分支杆菌利福平敏感性的比较
目的了解DNA序列分析与PCR-SSCP法分析利福平敏感性的价值.方法应用DNA序列分析与PCR-SSCP法检测利福平敏感的结核分支杆菌临床分离株25株、耐药株41株的利福平耐药相关基因rpoB基因核心区域的突变情况.结果 25株利福平敏感株DNA序列分析未检测到rpoB基因突变,41株耐利福平株中38株发生突变,突变率为92.7%(38/41);25株利福平敏感的结核分支杆菌菌株PCR-SSCP带型与对照H37Rv株相同,41株耐利福平结核分支杆菌菌株中38株SSCP带型不同于对照株,提示有突变存在.与DNA序列分析相比,PCR-SSCP检测准确率为93.9%(62/66),敏感度为92.1%(35/38);特异度是96.4%(27/28).结论 DNA序列分析对判断结核分支杆菌耐利福平非常有价值;PCR-SSCP可用于利福平耐药结核分支杆菌的初步筛选.
关键词： DNA序列分析 聚合酶链反应-单链构象多态性 药物耐受性 分支杆菌 结核 -
聚合酶链反应-单链构象多态性技术检测耐多药结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL突变的研究
目的应用PCR-SSCP技术快速检测耐INH,RFP,SM结核分支杆菌分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变,评价其在检测结核分支杆菌耐药性方面的价值.方法 32株耐INH、RFP、SM结核分支杆菌临床分离株及25株结核分支杆菌敏感分离株用PCR-SSCP方法分别检测,rpoB、KatG、rpsL基因突变.结果 32株耐多药结核分支杆菌分离株中,rpoB、KatG、rpsL PCR扩增产物PCR-SSCP分别有28株(87.5%)rpoB基因,19株(59.3%)KatG基因和23株(71.9%)rpsL基因电泳条带与结核分支杆菌标准株H37Rv电泳条带相比有明显差异,而25株结核分支杆菌敏感株的PCR-SSCP条带与结核分支杆菌H37Rv相似,特异性为100%.结论 PCR-SSCP方法敏感、特异,可快速检测结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL耐药基因突变,有利于耐多药结核分支杆菌耐药性的快速检测.
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雄激素受体基因突变与无精症、少精症关系的临床研究
目的:探讨雄激素受体基因外显子A突变与无精症、少精症的关系,为辅助生殖技术的遗传咨询提供依据.方法:选择60例正常男性(对照组)和65例无精症、少精症患者(病例组),采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析方法(PCR-SSCP)检测雄激素受体基因外显子A点突变,采用琼脂糖凝胶电泳方法检测插入和缺失突变.结果:对照组中未发现基因突变,突变率为0;病例组中有5例发生基因突变,均为点突变,未发现基因插入和缺失突变,突变率为7.69%;两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:雄激素受体基因外显子A突变是引起无精症、少精症的重要原因之一.
关键词： 雄激素受体基因 无精症 少精症 聚合酶链反应-单链构象多态性 -
结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征初步分析
目的 阐明结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点.方法 对110株结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区(RRDR)81个碱基在内的286 bp片段进行聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌rpoB基因此扩增区域进行序列测定.其中利福平耐药株73株,非利福平耐药株11株,敏感株26株.结果 PCR-SSCP检测显示利福平耐药株中有47株有突变存在,经直接测序分析其中76.6%的菌株存在rpoB基因的单位点突变,主要集中在531位(61.1%)和526位(25.0%);联合突变发生率为23.4%.此外,经PCR-SSCP检测,11株非利福平耐药株中2株有突变存在,26株敏感株中1株有突变存在.经直接测序分析突变涉及位点为511位、526位和535位.结论 rpoB基因耐药决定区发生突变是结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是常见的突变位点.
关键词： 结核分枝杆菌 耐药 聚合酶链反应-单链构象多态性 -
结核分支杆菌耐药基因检测对获得性耐药性的研究
了解不同年龄段肺结核病人的结核分支杆菌获得性耐药情况, 比较两种耐药性检测方法的检测效果, 评价它们的临床应用价值.用药敏试验(绝对浓度法)检测了结核分支杆菌株对RFP、INH、SM、PZA和EMB耐药情况, 采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检测结核分支杆菌耐药rpoB、katG、 rpsL、pncA和embB基因突变, 用绝对浓度法作药物敏感试验.青年组、中年组和老年组获得性耐药率分别为89.2%、85.3%和67.6%, 耐药基因突变率分别为76.2%、81.3%和63.2%,青年组耐药率和耐多药率显著高于其他组.结核杆菌耐药基因突变与耐药水平联系密切, 多数结核分支杆菌耐药基因突变易发生在高耐药区,也有少数基因突变发生在低耐药区.不规律用药时间越长耐药率越高.不同年龄组获得性耐药情况有差别, 应重视不同年龄组, 特别是青年组耐药率检测.PCR-SSCP是一种快速检测结核杆菌rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变敏感、特异的方法.
关键词： 分支杆菌 结核 药物耐受性 耐药基因 聚合酶链反应-单链构象多态性 -
分析5种结核杆菌耐药基因突变与耐药水平的关系
目的分析5种结核杆菌(M.tb)耐药基因突变的情况,了解基因突变和耐药水平的关系.方法134例临床分离株均做传统梯度药敏试验和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)试验.结果耐PZA(pncA)、SM(rpsL)、REP(rpoB)、INH(katG)、EMB(embB)基因突变率分别为42.7%、72%、78%、69%和43.9%.其中,上述高耐株基因突变率分别为70%、87.2%、93.4%、80%、43.9%.低耐株分别为12.5%、28.5%、45.4%、18.7%,EMB在低耐区无基因突变.结论M.tb耐药基因突变与耐药水平联系密切.多数M.tb耐药基因突变易发生在高耐药区,也有少数菌基因突变易发生在低耐药区.
关键词： 结核杆菌 药敏试验 聚合酶链反应-单链构象多态性 -
广西婴儿特发性肝内胆汁淤积SLC25A13基因突变的筛查
目的:对广西婴儿特发性肝内胆汁淤积的患者进行LC25A13基因筛查,了解有无突变.方法:收集2010-09/2012-06就诊于广西医科大学第一附属医院的婴儿特发性肝内胆汁淤积的患者63例作为病例组,另选取50例无肝内胆汁淤积,肝功能正常的婴儿为对照组.病例组患者送检血串联质谱、尿气相质谱分析筛查,对串联质谱怀疑为Citrin病的病例全部直接进行DNA测序分析,同时对阴性病例组及对照组采用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)联合DNA测序技术对SLC25A13基因国内外报道常见的1 2种热点突变进行筛查,了解有无SLC25A13基因突变,结果:在病例组进行蛋白质串联质谱分析有5例考虑为Citrin缺陷病,在进一步的DNA序列直接测序当中,未发现SLC25A13基因的12种常见突变.在其余病例组和正常组当中,PCR-SSCP筛查当中,均未发现相关的12种常见突变.结论:串联质谱分析考虑为Citrin缺陷病的5例患者、其余病例组患者及正常对照组当中均未发现SLC25A13基因常见的12种突变,广西婴儿特发性肝内胆汁淤积是否会存在SLC25A13基因的其他少见突变,仍需进一步的研究证实,包括纳入更多的样本研究及对其他未报道过的外显子进行研究.
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黄芩苷对错配修复基因缺失LoVo细胞的抑制作用及其机制
目的:探讨黄芩苷诱导LoVo细胞凋亡的作用及机制.方法:将黄岑苷40 mg溶于19.8 mL生理盐水+100 μL HCI+100 μL NaOH,阿斯匹林1.8 g溶于2 mL乙腈+4 mLNaOH+2 mLHCl,分别处理LoVo细胞,1 g/L乙腈溶液为对照.采用体外培养技术、TUNEL法观察细胞凋亡率,变性凝胶电泳检测微卫星标志BAT-25、D2S123状况.结果:黄芩苷和阿斯匹林均能诱导LoVo细胞凋亡,在各时间点与对照组比较统计学差异有显著意义(P=0.0000);黄芩对结肠LoVo细胞的诱导凋亡作用明显强于阿司匹林,24 h两差异无统计学意义,96 h和1 wk两者差异统计学有显著意义(93.33％ vs 44.23％,63.29％ vs23.20％,均P=0.0000),其作用时间在96 h达到高峰,与时间不呈依赖关系.黄芩苷和阿司匹林均未影响LoVo细胞的BAT-25、D2S123微卫星状态.结论:黄芩苷具有较强诱导LoVo细胞凋亡的作用.但对LoVo细胞的BAT-25、D2S123微卫星状态无影响,其诱导LoVo细胞凋亡可能是通过其它作用途径.
关键词： 黄芩苷 凋亡 微卫星不稳定 聚合酶链反应-单链构象多态性 -
姐妹2人同患家族性高胆固醇血症家系LDL-R基因突变分析
目的:对临床确诊的家族性高胆固醇血症(FH)两姐妹及其家系成员进行低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因突变分析,探讨其发病机制.方法:提取患者外周血基因组DNA,聚合酶链反应分别扩增启动子和18个外显子片断,采用单链构象多态性(PCR-SSCP)结合银染技术,对异常电泳条带进行核苷酸序列分析.结果:姐妹2人及其父亲,叔叔,祖母均发现LDL-R基因第13外显子存在一个错义突变,与GeneBank对照证实第1879位G→A碱基置换,氨基酸的改变为丙氨酸→苏氨酸(A606T突变),其母亲和女儿经测序并未发现此突变位点.结论:姐妹2人均为LDL-R基因存在A606T杂合错义突变,并均来自其父系亲属;可能是该家系发病的分子基础.
关键词： 高胆固醇血症 家族性 低密度脂蛋白受体 聚合酶链反应-单链构象多态性 基因突变 -
脊柱结核脓液中结核分枝杆菌耐利福平基因检测的实验研究
目的:探讨脊柱结核脓液中结核分枝杆菌对利福平(RFP)的耐药机制;评价聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chin reaction single-strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)在脊柱结核检测耐RFP基因中的临床应用价值.方法:将脊柱结核病灶中的脓液经预处理后接种于改良罗氏培养基上,对所培养出的菌株应用PCR-SSCP进行检测.检测包括核心区域(耐药决定区域)在内的rpoB基因.结果:PCR-SSCP检测耐RFP菌株的灵敏度和特异性均为100%,与常规经典药物敏感试验无差异(P＜0.05),但检测时间明显缩短,仅用2d.结论:rpoB基因突变是结核分枝杆菌对RFP耐药的重要机制,应用PCR-SSCP检测具有较高的灵敏性、特异性及快速性,是一种对脊柱结核耐RFP菌株快速检测的方法.
关键词： 脊柱结核 结核分枝杆菌 药物耐受性 聚合酶链反应-单链构象多态性 -
应用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌耐链霉素相关基因rpsL和rrs突变
目的 应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术,建立快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变的新方法.方法 采用常规药敏试验检测112株结核分枝杆菌临床分离株对链霉素的耐药性,建立PCR-SSCP法检测耐药相关基因rpsL和rrs的突变.采用PCR直接测序技术(PCR-DS)确定rpsL和rrs基因突变情况并与PCR-SSCP法检测结果进行比较.结果 112株结核分枝杆菌临床分离株均携带rpsL和rrs基因,52株(46.4％)对链霉素敏感,其中有1株敏感菌株rrs基因PCR-SSCP条带异常,PCR-SSCP方法的特异性为98.1％ (51/52).60株(53.6％)结核分枝杆菌对链霉素耐药,用PCR-SSCP方法分别检出46株(76.6％) rpsL基因和11株(18.3％)rrs基因条带异常,1株同时出现rpsL和rrs基因条带异常,PCR-SSCP检测的灵敏度为93.3％ (56/60).结论 PCR-SSCP方法检测结核分枝杆菌耐药相关基因rpsL和rrs突变的特异性和敏感性高,临床上值得推广应用.
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134例结核杆菌5种耐药基因的检测
应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法分析134例临床分离株的5种结核杆菌(MT)耐药基因突变情况.结果表明,耐吡嗪酰胺(PZA)pncA基因,耐链霉素(SM)rpsL基因,耐利福平(REP)rpoB基因,耐异烟肼(INH)katG基因,耐乙胺丁醇(EMB)embB基因的突变率分别为42.7%,71.7%,78.9%,68.6%,43.9%.证实MT存在多种耐药基因突变的情况.但MT药敏实验与5种耐药基因突变率并不一致,说明MT的耐药除基因突变外,尚有其他影响因素存在.
关键词： 分枝杆菌 药物耐受性 基因 聚合酶链反应-单链构象多态性 -
浙江省耐药结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变特点研究
目的 了解浙江省耐异烟肼、利福平、乙胺丁醇结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变特点.方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv为对照,应用聚合酶链反应--单链构象多态性(PCR-SSCP)技术、聚合酶链反应--直接测序(PCR-DS)技术检测100株耐药结核分枝杆菌临床分离株katG、rpoB、embB基因.结果 经PCR-DS检测katG基因突变率达54.8%,以Ser315Thr突变常见(40.3%);在耐利福平菌株中,rpoB基因突变率达88.9%,以526、531位氨基酸改变常见,总突变率达77.8%(63/81);在耐乙胺丁醇菌株中,embB基因突变率达60%,以Met306VaI改变常见(28.9%).结论 PCR-SSCP技术操作简单、检测快速,可作为临床耐药检测的辅助手段;浙江省结核菌耐药基因突变位点同国内研究基本一致,各位点突变形式所占比例有自身特点.
关键词： 结核分枝杆菌 耐药 聚合酶链反应-单链构象多态性 序列分析 -
APC、p53、K－ras在结直肠肿瘤检测中的研究价值
目的：采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ PCR－SSCP）银染法检测腺瘤多发性息肉病（ APC）、p53、K－ras三个基因在结直肠肿瘤筛查中的敏感性和特异性。方法选择2011年11月至2012年8月惠州市第一人民医院消化门诊收治的14例结直肠癌（ CRC 组），60例结直肠腺瘤（ CRA组），30例正常组粪便标本，提取DNA，PCR－SSCP银染法检测基因突变。结果 APC、p53、K－ras三个基因联合检测在CRC组、CRA 组、正常组突变率分别为57.1％（8／14）、30.0％（18／60）、3.3％（1／30）；在结直肠肿瘤的灵敏度和特异度分别为35.1％（26／74）、96.7％（29／30），粪便 DNA 联合检测CRC组、CRA组的检出率高于正常组（均P＜0.05）。结论粪便DNA联合检测在无创性筛查结直肠肿瘤中具有可行性，可能是一种适合于结直肠肿瘤筛查的无创性方法和筛查模式。
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GSTO1-1基因多态性与地方性砷中毒易感性的关系研究
目的 探讨砷代谢相关酶谷胱甘肽S转移酶Omega 1-1(GSTO1-1)基因第4外显子多态性与地方性砷中毒患病风险的关系.方法 于2006年,采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术对79名地方性砷中毒患者和110名正常人群外周血中GSTO1-1基因第4外显子的突变情况进行初筛,并进一步对异常带型进行直接DNA测序,以确定突变位点及类型,对多态性进行单因素分析和多因素非条件Logistic回归分析.结果 病例组131位密码子新的沉默突变131Ile(ATC)的携带率(2.5％)高于对照组(1.8％)；病例组140位密码子突变140Asp的携带率(38.0％)高于对照组(32.7％)；病例组155位密码子突变155Glu/Val的携带率(3.8％)高于对照组(2.7％),但差异均无统计学意义.在多因素非条件Logistic回归分析中调整年龄、性别等因素后,GSTO1-1基因多态性与地方性砷中毒发病仍无统计学意义.结论 GSTO1-1基因第4外显子上密码子131、140和155位点多态性与地方性砷中毒易感性无显著关系,出现这种情况的原因可能与分析的样本量较小、有关的多态性位点在GSTO1-1基因其他的外显子或非编码区上有关.
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血脂正常人群检出LPL内含子3C→T突变
目的:检测中国人群脂蛋白脂肪酶基因的突变情况,并探讨这些突变对机体脂质代谢可能产生的影响.方法:利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术对检测人群脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查,并利用DNA测序确定基因突变性质.结果:在1例血脂正常人员LPL基因内含子3的3'端-6bp处检出C→T转换突变.结论:与以往国内外报道该突变仅见于高甘油三酯血症患者不同,本文在一名血脂正常人员检出LPL基因内含子3C→T突变,对探讨该突变的可能影响具有一定的参考价值.
关键词： 脂蛋白脂肪酶 基因突变 聚合酶链反应-单链构象多态性 -
诱导结核分枝杆菌耐katG基因突变过程的分析
目的 在体外建立诱导结核分枝杆菌耐异烟肼药物产生的全过程,分析结核分枝杆菌产生耐药的机理.方法 对结核分枝杆菌强毒株(H37RV)进行诱导试验,与30株临床耐异烟肼药物分离株共同做聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和序列分析.结果 在第7代H37RV的PCR-SSCP电泳出现异常,经测序证实发生katG基因突变,与部分临床突变株的类型基本相同.结论 用药物间断性地不断刺激结核分枝杆菌,是产生结核分枝杆菌耐异娴肼药物的重要原因之一.
关键词： 结核分枝杆菌 诱导 聚合酶链反应-单链构象多态性 测序 -
内蒙古经典型苯丙酮尿症PAH基因外显子7突变的检测及一种新突变的鉴定
目的:探讨内蒙古地区经典型苯丙酮尿症(PKU)基因突变特征,为基因诊断提供依据.方法:应用PCR-单链构象多态性分析技术和DNA直接测序的方法,对22例内蒙古地区PKU病人苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因外显子7内突变进行了检测.结果:共检出4种错义突变:R243Q、R252Q、R261Q及G239D,1种剪接部位突变IVS7nt(2),突变频率分别为:8/44、1/44、1/44、1/44、1/44.经与国际PAH基因突变数据库比较,确认G239D(G→A)为国际上首次发现的新突变.结论:内蒙古地区PKU病人PAH基因外显子7的突变位点、突变频率和中国东北人群相类似,但与中国南方人群PAH基因突变特点不同,这对提高内蒙古地区基因诊断率有其理论及实用价值.
关键词： 苯丙酮尿症 苯丙氨酸羟化酶 聚合酶链反应-单链构象多态性 基因突变 -
内蒙古经典型苯丙酮尿症PAH基因外显子11突变的检测
目的:研究内蒙古地区经典型苯丙酮尿症(PKU)苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变的特点和频率,以提高该地区PKU的基因诊断率.方法:应用PCR-SSCP-银染法和DNA直接测序的方法,对22例内蒙古地区PKU病人PAH基因外显子11进行了检测.结果:检出一种已知突变Y356X(TAC→TAA),突变频率为13.6%.结论:内蒙古地区PKU病人PAH基因外显子11的突变频率均高于我国的其它北方人群,也高于云南PKU病人的突变频率,这为内蒙古地区PKU病人PAH基因分析和产前诊断提供了科学依据.
关键词： 苯丙酮尿症 苯丙氨酸羟化酶 聚合酶链反应-单链构象多态性 基因突变
