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荧光定量PCR方法检测婴儿尿液中人类巨细胞病毒基因的含量
目的探讨FQ-PCR方法检测婴儿尿液中HCMV-DNA含量对于临床症状性HCMV感染的诊断价值,同时,比较FQ-PCR方法与定性PCR方法的敏感性.方法应用双标探针水解的FQ-PCR方法检测89例临床怀疑有巨细胞病毒感染患儿(病例组)尿液中的HCMV-DNA拷贝数,并以82例同年龄组健康婴儿做对照,比较两组阳性标本中HCMV-DNA含量.同时,在两组中随机选取94例(其中疑诊为HCMV感染的56例,健康儿38例),用FQ-PCR方法与普通定性PCR方法共同检测进行比较.结果病例组阳性52例,称为症状性感染组,对照组阳性30例,称为无症状性感染组.症状性感染组52例,尿液HCMV-DNA拷贝数对数值(log10X)在3.81-9.93,平均为5.30;无症状性感染组30例,尿液中HCMV-DNA拷贝数对数值在2.70-4.60,平均为3.46,两组均值差异有显著性(T=8.09,P<0.01),拷贝数大于105拷贝/mL高度预示症状性HCMV感染.FQ-PCR方法阳性率为60.64%(57/94),定性PCR方法阳性率32.98%(31/94),两方法一致率70.21%(χ2=25.30>6.63,P<0.01),FQ-PCR方法优于定性PCR方法(χ2=23.32>6.63,P<0.01).结论婴儿尿液中HCMV-DNA拷贝数与临床症状性HCMV感染密切相关,FQ-PCR方法检测婴儿尿液中HCMV-DNA量可以作为临床诊断HCMV症状性感染的一种快速、有效的实验室方法.
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真菌性角膜炎常见致病菌株——镰刀菌的AFLP指纹图谱分析
目的 采用AFLP对镰刀菌进行基因分型.方法 对镰刀菌分离、纯化、重新鉴定后,用CTAB法提取其DNA.经EcoRI和MseI双酶切,对酶切片段进行预扩增和选择性扩增.扩增后的产物经6%聚丙烯酰胺凝胶电泳.银染成像.结果 用20株镰刀菌作材料.筛选出3对多态性较高.带型质量较好的AFLP引物,分别是E-TCM-CAA,E-TAM-ClYr,E--TA M-CAC.各菌株同的相似率为74%~90%.在SM=0.74(74%)的相似性水平上,镰刀菌明显地分为2种.14株茄病镰刀菌种内可分为9型,6株串珠镰刀菌种内可分为4型.结论 AFLP可用于真菌性角膜炎常见致病菌株即镰刀菌的基因分型.
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蜡样芽胞杆菌实验室诊断技术进展
蜡样芽胞杆菌广泛分布于自然界及食品中,并可在其中生长繁殖,引起人类食物中毒.引起的食物中毒有两型,一类由不耐热肠毒素引起的腹泻型,临床表现为腹痛、腹泻和里急后重,与产气荚膜梭菌引起的食物中毒相似;另一类由耐热肠毒素引起的呕吐型,临床表现为恶心、呕吐,似葡萄球菌食物中毒.临床上不容易区别,须通过实验室检测确证,蜡样芽胞杆菌分离培养及鉴定耗时,操作繁琐.近年来出现的新型免疫学方法和聚合酶链反应具有较高的敏感性和特异性,作者将蜡样芽胞杆菌实验室诊断检测技术进展进行综述.
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脂酶试验与聚合酶链反应鉴别中间普氏菌的比较研究
目的研究脂酶试验和常规生化方法与聚合酶链反应比较在鉴别中间普氏菌Pi中的敏感度和特异度。方法对207株牙周临床分离的产黑色素G-厌氧杆菌分别进行脂酶试验、常规生化法鉴定和16srRNA特异引物PCR鉴定。结果 207株实验菌中PCR鉴定出Pi 97株,脂酶试验检测出Pi 126株,其中有85株PCR阳性,其敏感度为87.6%,特异度为63.7%。常规生化方法和脂酶试验共同鉴定出Pi 80株,其中有65株PCR为阳性,其敏感度为67%,特异度为86.4%。结论脂酶与常规生化方法对Pi的鉴别能力低于PCR(P<0.05),尚不能作为Pi菌种的可靠鉴定方法。
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应用PCR技术快速诊断马尔尼菲青霉
采用特异性引物和聚合酶链反应(PCR)技术,检测6株临床分离的马尔尼菲青霉、2株竹鼠体内分离的马尔尼菲青霉,及其它致病真菌、细菌、人白细胞系DNA.结果(1)8株马尔尼菲青霉的25℃菌丝相、37℃酵母相DNA均可扩增347bp的特性片段,而其它致病真菌、细菌、人白细胞DNA无特性片段扩增.(2)5株马尔尼菲青霉25℃连续传代10代,其中一株发生变50株马尔尼青霉均可扩增出特性片段.(3)敏感性试验表明,该方法可检测约8个菌细胞的马尔尼菲青霉.PCR可快速、灵敏、准确的诊断马尔尼菲青霉,具有临率应用价值.
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聚合酶链反应和尿素酶试验检测幽门螺杆菌观察与胃部疾病关系
我院于1998年2月~6月对216例有上消化道症状患者行胃镜活检同位粘膜标本分别作聚合酶反应(PCR)和尿素酶试验(RUT)检测对照幽门螺杆菌(Hp)与上消化道疾病关系,现报告如下.
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金东区鼠类检出埃立克体及无形体DNA片段
目的 了解金华市金东区某地鼠类自然感染埃立克体及无形体的状况.方法 对当地监测捕获的多种鼠类取肝、脾脏器标本,用巢式PCR扩增无形体科16S rDNA的5'端片段.结果 在184只鼠中,检出阳性6只,总阳性率为3.26%;其中黄毛鼠阳性率为4.12%(4/97),社鼠阳性率为4.17%(1/24),黑线姬鼠阳性率为4.35%(1/23).经序列比对分析,4份与牛埃立克体相应片段为接近,属无形体科,无形体属;1份与反刍动物埃立克体相应片段区为接近,属无形体科,埃立克体属;1份与无形科新成员Ehrlichia sp.'Ratus strain'为接近.结论 在当地鼠类检出埃立克体及无形体DNA片段,提示可能存在埃立克体病自然瘦源地.
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金华鼠类标本中检测到伯氏疏螺旋体DNA片段并测序分析
目的:了解金华鼠类中伯氏疏螺旋体自然感染的状况.方法:用巢式PCR扩增鼠中的伯氏疏螺旋体5S-23srRNA间隔区片段,对阳性产物进行测序.结果:在浙江省金华捕到的128只鼠类标本中检到阳性12份,其中,黄毛鼠、小林姬鼠、鼩鼱阳性率分别为7.5%、1.43%和25%,其测序分析结果显示,这些动物感染的螺旋体与法雷斯疏螺旋体BorreliavalaisianaOS 115 (AB091447)和B.valaisianaQX 13P25 (DQ 188933)核酸序列高度同源,相似率达100%.结论:金华地区存在伯氏疏螺旋体病原,可感染黄毛鼠、姬鼠、鼩鼱等宿主动物.
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浙江省在鼠中检测到埃立克体及无形体DNA片段并测序分析
目的:了解鼠中自然感染埃立克体及无形体的状况.方法:用巢式PGR扩增鼠中埃立克体属及嗜粒细胞无形体属16S rDNA的5'末端片段,对阳性产物克隆后测序.结果:在浙江省金华市金东区捕到鼠128只.在黄毛鼠中检到阳性4份,阳性率为3.125%,并对其进行克隆后测序.与Genbank上比对分析,三份与牛埃立克体相同基因区为接近,属无形体科,无形体属.一份与反刍动物埃立克体相同基因区为接近,属无形体科,埃立克体属.均为国内首次报道.结论:初步认为浙江省存在埃立克体及无形体病原.黄毛鼠可能为埃立克体及无形体宿主,尚需进一步调查.
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浙江省首次在蜱中检测到莱姆病螺旋体DNA片段
目的:了解蜱、鼠中自然感染莱姆病螺旋体的状况.方法:用PCR法检测鼠类脾脏和蜱类中莱姆病DNA片段.结果:在浙江省金华市金东区及丽水市青田县捕到蜱215只.分别在微小牛蜱和长角血蜱中各检到阳性1份,阳性率为0.93%.结论:初步认为浙江省存在莱姆病病原,尚需进一步调查和病原分离加以证实.
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安吉县在鼠中检测到伯氏疏螺旋体DNA片段
目的:了解鼠中自然感染伯氏疏螺旋体的状况.方法:用巢式PCR扩增鼠中的伯氏疏螺旋体5S-23srRNA间隔区片段,对阳性产物进行测序.结果:在安吉县捕到鼠109只.分别在黑线姬鼠、青毛鼠中检到阳性6份,阳性率分别为5%和13%.结论:初步认为安吉县存在伯氏疏螺旋体病原.可能黑线姬鼠、青毛鼠为伯氏疏螺旋体宿主,尚需进一步调查.
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聚合酶反应快速诊断结核性脑膜炎53例
结核性脑膜炎是中枢神经系统感染的主要疾病之一,结脑的早期诊断对于其治疗、预后有较大的临床意义.运用聚合酶链反应(polymerase chain reation,PCR)检测各种临床标本中结核杆菌,具有快速、敏感、特异的优点.PCR法适用于结脑的快速诊断,临床标本不需经过培养,直接用PCR扩增试验,当天可出结果,具有早期诊断的价值.为此,本研究对53例结脑的脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)标本进行PCR-结核杆菌检测,并同时用直接涂片染色法与抗结核抗体检测做对比研究,以探明其诊断价值.
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应用聚合酶反应-反向斑点杂交法检测利福平结核分支杆菌rpoB基因突变
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WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义
目的:探讨WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定53例急性白血病、15例慢性粒细胞白血病、21名正常人的WT1基因表达.结果:53例急性白血病患者中41例WT1基因表达阳性,阳性率为77.35%,其中急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)阳性率分别为80.6%和72.0%,两组相比差异无统计学意义(P>0.05);15例的慢性粒细胞白血病(CML)WT1基因表达阳性率为46.7%,其中7例急变期和加速期阳性率为100%,8例慢性期阳性率为0%.27例急性白血病完全缓解(CR)患者中22例(81.5%)WT1基因表达转阴,4例复发患者WT1基因表达再次升高.21例正常人的WT1基因表达阴性;RT-PCR检测WT1基因灵敏度为10-4水平.结论:①WT1基因在各种类型白血病患者中均有表达,在正常人中不表达.WT1的表达与白血病病程相关;②WT1基因可作为检测MRD的标记性基因.WT1基因的表达与白血病患者的化疗效果及预后密切相关.
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汉族人低密度脂蛋白受体基因多态性对血脂、脂蛋白和载脂蛋白水平的影响
研究表明,低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor, LDL-R)基因多态性影响血脂水平,已有报道LDL-R基因PvuⅡ、StuⅠ位点多态性影响正常人血脂水平[1],HinⅡ位点多态性影响糖尿病患者脂代谢[2].近Ahn等[3]发现LDL-R基因外显子18 NcoⅠ位点多态性与总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平有关.我们应用聚合酶反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,研究了NcoⅠ位点多态性对汉族人血脂、脂蛋白和载脂蛋白水平的影响.
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影响PCR-RFLP的相关因素
限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应(restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction, PCR-RFLP)是一种模拟体内DNA复制过程的体外酶促合成特异性核苷酸片段技术,又称无细胞分子克隆技术.它以待扩增的两条DNA链为模板,由一对人工合成的寡核苷酸作为介导,通过DNA聚合酶反应,在体外进行特异DNA序列扩增.扩增后,将PCR产物直接酶切、电泳、显色,即可对目的基因进行分类分型.现将我做PCR-RFLP的体会简要陈述如下.
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84例膀胱癌的治疗护理
膀胱癌是一种多发常见的泌尿系肿瘤,致病因素与吸烟和从事某些暴露的化学致癌物质的接触如橡胶工、油漆工等有关,膀胱结石、血吸虫病、细菌感染和尿中pH值增高等泌尿系统疾病也可使膀胱癌的发生率增高,据新研究表明,膀胱癌与P53基因突变和染色体9的变异有关,约90%的病人首发症状是内肉眼或镜下血尿.通过肾盂造影,膀胱镜、分子生物技术、聚合酶反应(PCR)CT等检查,均可早期确定诊断.我院自1980~2000年共收治膀胱部病人84例,手术治疗是佳方案,术后坚持一年按常规应用抗癌药丝裂霉系膀胱灌注是预防复发的基础,在其治疗方案,预防术后感染和并发症,满足病人的心理需求,提高膀胱癌术后病人的生活质量及存活年限是我们护理工作的重点.