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T细胞和肿瘤逃逸关系研究进展
T细胞自身的低反应性或无能,加上外界的调节性T细胞及体内大量细胞因子合成对杀伤性T细胞的抑制等促进了肿瘤的免疫逃逸.T细胞特异性杀伤肿瘤是肿瘤免疫治疗的中心环节.如何消除免疫抑制因子和刺激活化信号从而纠正免疫失衡是我们治疗顽固抵抗性肿瘤考虑的首选问题.
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肿瘤浸润淋巴细胞治疗非霍奇金淋巴瘤的临床疗效分析
20世纪80年代肿瘤生物免疫疗法创立以来,为肿瘤的临床治疗开辟了新途经,其中,免疫活性细胞的过继免疫疗法是引人注目的手段之一.肿瘤浸润淋巴细胞(tumor 1nfiltratinglymphocytes,TIL)是一种肿瘤局部组织的免疫反应细胞,是继LAK细胞之后的第2代新型抗肿瘤效应细胞.TIL经rIL-2刺激后,在一般条件下可扩增上百倍、甚至上千倍,对自体肿瘤具有杀瘤活性、特异、高效.鉴于目前难治性NHL的治疗困难、效果不好,我院1977～1999年对人TIL的分离、培养、扩增及其中晚期NHL的临床疗效进行了初步研究,报道如下.
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TIL治疗肿瘤研究进展
肿瘤组织中有淋巴细胞浸润现象,证明浸润的淋巴细胞反映了机体对肿瘤的特异性免疫反应.1986年Rosenberg等首先将小鼠肿瘤中分离的浸润淋巴细胞在体外培养,用IL-2扩增达到一定数目后回输给荷瘤小鼠,能有效地控制肝和肺中转移灶的生长,这种淋巴细胞称为肿瘤浸润的淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes,TIL).
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艾灸血清培养的肿瘤浸润淋巴细胞抑瘤作用的实验研究
目的:观察尾静脉回输艾灸血清培养的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)对荷瘤小鼠的抑瘤作用.方法:采用G57BL/6小鼠移植实体瘤模型,静脉回输艾灸血清培养的TIL,观察荷瘤小鼠肿瘤结节出现时间、瘤重、生存期,流式细胞术检测肿瘤细胞周期时期分布、凋亡率.结果:艾灸血清培养的TIL静脉回输治疗H22荷瘤小鼠,与肿瘤对照组和治疗对照组比较,在减缓肿瘤结节出现时间、抑制肿瘤结节生长、延长生存期、诱导肿瘤细胞凋亡方面,疗效更为显著.结论:静脉注射艾灸血清培养的TIL在荷瘤小鼠体内具有更显著的抗肿瘤作用.
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TIL识别的HLA-A2限制性人黑色素瘤特异抗原肽的研究
目的:探讨TIL识别的人黑色素瘤HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽特性.方法:通过亲和层析柱从三种肿瘤细胞系(624-Mel、Chap-Mel和JY)中纯化HLA-A2蛋白和结合的多肽分子,经弱酸高温处理和离心超滤后,应用反相-高效液相色谱层析(RT-HPLC)分离各多肽组份,并将其各组份与T2细胞共同孵育、进行重建TIL识别的人黑色素瘤特异表位试验,鉴定肽分子生物活性,通过质谱分析所获活性肽分子特性,参照活性肽序列,制备人工合成肽加以进一步证实.结果:从RT-HPLC层析的624-Mel的肽组份,经特异表位鉴定发现3个活性峰(P19、P25和P31).其中P31, TIL杀伤率达67%,质谱分析表明肽分子量为948,氨基酸序列为H+ Ala Lue Trp Lue Phe Phe Gly Val Lue OH-的9肽分子.经特异表位测定表明人工合成肽具有纯化活性肽的生物活性特征.结论:分离鉴定的这一9肽分子是一种TIL识别的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽,为肿瘤防治、合成肽疫苗的研究奠定了可靠的实验基础.
关键词： TIL HLA-A2 限制性 肿瘤抗原肽 疫苗 -
肝癌患者细胞因子分泌和肿瘤浸润淋巴细胞杀伤肝癌细胞的研究
为探讨肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)杀伤肝癌细胞的作用机制,用透射电镜观察了TIL与肝癌细胞共同培养后,TIL吸附、包绕和吞噬自体和EBL-7402肝癌细胞,促使肝癌细胞凋亡.接受TIL治疗的肝癌术后患者,外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素(IFNγ)活性和血清肿瘤坏死因子(TNF-α)活性,明显高于手术对照组.与单纯手术治疗组比较,TIL组生存时间明显延长.肝癌术后应用TIL的疗效显著优于单纯手术治疗,可望为肝癌的综合治疗提供新的方法.
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静脉回输艾灸血清培养的肿瘤浸润淋巴细胞对荷瘤小鼠T细胞亚群的影响
肿瘤浸润淋细胞(TIL)是继淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)之后的又一种抗肿瘤效应细胞.只需少量IL-2就可发挥抗肿瘤作用.TIL的抗瘤活动虽较LAK细胞明显增强,但仍难满足临床需要.如何有效地激活TIL,增强TIL的特异性杀伤活性已成为TIL治疗的研究重点.艾灸血清是近年来针灸研究中提出的一种新的研究思路和方法[1],实验研究表明:艾灸血清中可能含有多种免疫活性因子,具有非特异性免疫作用[2].
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CD3AK细胞在肿瘤治疗中的研究进展
随着免疫学、分子生物学与基因工程技术的发展,以肿瘤免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为继手术、化疗和放疗后的新模式.CD3AK(anti-CD3 antibody induced activated killer cells)是指抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞,以其存活时间长、外源性IL-2用量小,以及体内外抗瘤作用优于LAK细胞等优势,成为继LAK(Lymphokineactivated killer,LAK)和TIL(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)之后,肿瘤AIT研究中受关注的肿瘤效应细胞[1].
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TIL肿瘤过继细胞治疗研究进展
肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)是从肿瘤组织中分离出的CD4+、CD8+T细胞,在体外经白介素2(interleukin-2,IL-2)的刺激、活化、扩增后可应用于临床肿瘤过继细胞治疗(adoptive cell therapy,ACT).为避免IL-2在扩增中的大量使用使得TIL中CD4+ CD25+ Treg数量增加所产生的免疫耐受现象,现在研究集中于改进TIL的体外扩增方法；研究显示,“年轻”型TIL(young TIL)靶向肿瘤的特异性更高,故其是潜在的扩增对象.临床使用TIL过继治疗前需对肿瘤患者进行全身放疗处理；TIL过继治疗联合化疗药物(如环磷酰胺,氟达拉滨等)对自体淋巴清除(lymphodepletion)的肿瘤患者疗效显著,将成为以后肿瘤免疫治疗的主要方向；除化疗药物外,还可开发肿瘤疫苗、单克隆抗体等联合TIL过继治疗.本文主要介绍TIL培养体系、功能改进的研究以及TIL过继治疗联合化疗药物在临床恶性肿瘤治疗中的应用,讨论其可能存在的问题并展望未来的发展方向.
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TIL细胞治疗恶性胸(腹)腔积液的临床研究
目的探索CD3单抗和IL-2联合诱导、活化的TIL治疗恶性胸腹水的佳培养时间和临床疗效.方法抽取患者胸腹水分离TIL,用含rIL-2、CD3单抗的1640完全培养液培养,扩增4周以上,收获细胞局部注入治疗恶性胸腹腔积液,共15例.结果TIL培养至30 d时扩增倍数高、杀伤活力强;治疗后完全缓解(CR)9例,占60%,部分缓解(PR)4例,占27%.总有效率87%.结论TIL体外诱导、培养30d,用于治疗恶性胸腹水,效果明显,安全,无毒副作用.
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TGF-β1和TIL在喉癌局部免疫反应中作用的4研究
目的:检测喉癌组织TGF-β1的表达,分析TGF-β1与喉癌临床指标的关系,明确TGF-β1表达对TIL细胞浸润和局部免疫功能的影响.方法:38例原发性喉癌标本,应用免疫组化SP法,检测喉癌组织CD3、CD4、CD8、CD57、CD68和CD25的浸润及TGF-β1的表达;同时以10例声带息肉做对照组.结果:与对照组相比,喉癌组织TGF-β1蛋白表达减少,且TGF-β1表达与喉癌病人性别、年龄、临床分期及不同发生部位无关,随着恶性度的增高,TGF-β1表达减少,淋巴结转移组TGF-β1阳性率多于未转移组,TGF-β1表达与CD4细胞浸润无关,而与CD8浸润有显著正相关,TGF-β1表达能诱发CD4/CD8比值倒置.结论:喉癌组织TGF-β1蛋白表达减少,TGF-β1对喉癌细胞的生长可能起抑制作用,有利于肿瘤细胞的转移,通过影响CD8细胞的浸润,改变CD4/CD8比值,进而抑制肿瘤局部免疫功能.
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肿瘤患者T细胞克隆性增殖与预后的分析
目的通过分析肿瘤患者肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)和外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes, PBL)中克隆性增殖T细胞的TCRβ基因谱型的分子特征,研究T细胞免疫在肿瘤预后中的作用.方法采用RT-PCR及变性聚丙烯酰胺测序凝胶电泳方法扩增并分离TCRβ基因V-J重排片断.通过PCR产物直接测序的方法,判断T细胞克隆的特征,得到CDR3区氨基酸序列.结果在结直肠癌、肺癌TIL和术前PBL中均发现TCRβ基因的寡克隆性扩增,它们在术后的PBL中均消失.具有术前PBL的克隆性增殖T细胞的患者还可能影响肿瘤的预后.结论肿瘤患者的肿瘤组织和术前外周血中都存在肿瘤肽特异性激活的T细胞克隆,T细胞免疫系统的激活在肿瘤的预后中可能起着重要作用.
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几种免疫调节剂对口腔鳞癌浸润淋巴细胞的体外增殖、杀瘤活性的影响研究
目的:研究IL-4、GM- CSF和香菇多糖对口腔鳞癌浸润淋巴细胞(TIL)的体外培养和细胞毒效应的影响.方法:将手术切取的标本通过酶消化加机械分离法提取TIL,分成4组.以单纯加IL-2培养的TIL为对照组,另3组在加IL-2的基础上分别加入IL-4、GM- CSF和香菇多糖进行培养.每3d计数1次并绘制细胞生长曲线图.于对数生长期用MTT法检测TIL的杀瘤活性并进行统计学比较.结果:添加IL-4和GM- CSF的TIL增殖速度明显大于对照组和香菇多糖组,对数生长期出现早且持续时间较长,细胞增殖量也较对照组和香菇多糖组多.MTT法检测TIL杀瘤活性显示,IL-4和GM- CSF组的杀瘤活性强于对照组和香菇多糖组,差异均显著.结论:GM- CSF、IL-4协同IL-2能够提高TIL的增殖速度,促进TIL的增殖,且能在一定程度上解除TIL的免疫抑制,提高其杀瘤活性.
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肝癌癌周组织淋巴细胞和TIL的分布及抗瘤活性的研究
目的：研究肝癌癌周组织淋巴细胞和肝癌TIL的分布及抗瘤活性。方法：用冷胶原酶消化分离法来分离肝癌癌周组织淋巴细胞及肝癌实质部和中心部TIL并测定它们的获得率。用3H-TdR释放法测定它们对自体肝癌细胞的杀伤活性。结果：肝癌实质部TIL获得率高，肝癌癌周组织淋巴细胞获得率次之，肝癌中心部TIL获得率低。它们对自体肝癌细胞的杀伤活性从高到低则分别为肝癌实质部TIL、肝癌中心部TIL和肝癌癌周组织淋巴细胞。结论：肝癌癌周组织和肝癌组织不同部位的淋巴细胞分布有所不同。它们的抗瘤活性也各不相同。为了获得数量多和抗瘤活性高的淋巴细胞，应尽量从肝癌实质部来分离获取。
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肝癌瘤苗激活的TIL对原发性肝癌患者免疫功能的影响
目的:探讨经肝癌瘤苗激活的TIL对原发性肝癌(下称肝癌)患者免疫功能的影响.方法:使用冷冻方法制成肝癌瘤苗,用于激活TIL.并将经肝癌瘤苗激活的TIL用于26例肝癌患者的治疗,检测治疗前后其CD3、CD4、CD8、CD4/CD8比值,并与对照组相比较.结果:应用经肝癌瘤苗激活的TIL治疗的肝癌患者,其CD3、CD4、CD8、CD4/CD8比值明显升高,CD8则明显下降,经与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:应用经肝癌瘤苗激活的TIL治疗肝癌患者,能明显提高肝癌患者的免疫功能.
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冷冻免疫瘤苗激活的TIL对恶性黑色素瘤患者T淋巴细胞亚群的影响
[目的]观察冷冻免疫瘤苗激活的TIL对恶性黑色素瘤患者T淋巴细胞亚群的影响.[方法]将42例恶性黑色素瘤患者分为A、B两组,A组单纯回输TIL,B组在A组基础上应用恶性黑色素瘤冷冻瘤苗来激活TIL,观察两组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群的变化.[结果]两组回输TIL后外周血T淋巴细胞亚群提高,但经冷冻瘤苗激活的TIL较单回输TIL外周血T淋巴细胞亚群提高(均P＜0.05).[结论]经恶性黑色素瘤冷冻瘤苗激活的TIL具有提高机体细胞免疫功能的作用.
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肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞体外增殖的抑制作用
目的研究肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞的抑制作用及其临床意义.方法分离和培养肺癌细胞及TIL细胞,用MTT法检测原代肺腺癌细胞及腺癌细胞株A549对TIL体外增殖的抑制作用及FasL抗体对TIL的保护作用.结果原代肺癌细胞及A549细胞株对TIL均有不同程度的抑制作用.结论肺癌细胞对TIL细胞的抑制作用可能是机体逃避免疫攻击的机制之一.
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黄芪和地黄对食管癌TIL增殖及体外抗肿瘤作用的研究
目的:探索黄芪、地黄在促进食管癌TIL增殖和特异性杀伤活性中的作用和食管癌TIL免疫治疗的可行性.方法:采用3H-TdR掺入法.应用黄芪和地黄联合多种细胞因子对9例食管癌TIL的增殖和特异性杀伤活性进行研究.结果:在促进TIL增殖、杀伤活性中,黄芪联合IL-2、IL-2+IL-4、IL-2+TNF-α均较单用这些细胞因子有明显增强作用(P<0.05或0.01).结论:食管癌TIL免疫治疗是完全可行的.
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原代培养的肺癌细胞对TIL的反杀伤作用
目的探讨肺癌细胞对TIL细胞是否具有反杀伤作用及意义.方法用MTT法检测8例人原发性肺癌的原代培养肿瘤细胞被Fas配体(Fas ligand.FasL)抗体封闭前后对肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor Infiltrating Lymphocytes,TIL)的杀伤活性.结果发现原代培养的肺癌细胞被FasL抗体封闭前后对T1L均有不同程度的杀伤作用,但经FasL抗体封闭后的肿瘤细胞对TIL的杀伤活性均有所下降,两组之间存在显著差异(p＜0.05).结论提示肺癌细胞对TIL细胞的反杀伤作用可能是其逃避免疫攻击的机制之一.
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原代培养的肺癌细胞对TIL的反杀伤作用
目的:探讨肺癌细胞对TIL细胞是否具有反杀伤作用及意义.方法:用MTT法检测8例人原发性肺癌的原代培养肿瘤细胞被Fas配体(Fas ligand,FasL)抗体封闭前后对肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor Infiltrating Lymphocytes,TIL)的杀伤活性.结果:发现原代培养的肺癌细胞被FasL抗体封闭前后对TIL均有不同程度的杀伤作用,但经FasL抗体封闭后的肿瘤细胞对TIL的杀伤活性均有所下降,两组之间存在显著差异(P＜0.05).结论:提示肺癌细胞对TIL细胞的反杀伤作用可能是其逃避免疫攻击的机制之一.
