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他莫昔芬对人胰腺癌细胞增殖的影响及其分子机制
目的:探讨他莫昔芬(TAM)对人胰腺癌细胞增殖的影响及其机制.方法:采用钙离子荧光指示剂flour-3/Am,流式细胞仪动态检测TAM作用后人胰腺癌细胞(Capan-Ⅱ)内游离钙离子([Ca2+]I)水平的变化,同时用MTT比色法测定细胞增殖情况.结果:TAM使细胞内[Ca2+]I水平上升,与静息状态细胞内[Ca2+]I水平相比差异有统计学意义,P<0.05.高浓度的TAM对癌细胞的增殖有抑制作用.结论:TAM有抑制人胰腺癌细胞增殖的作用,其作用机制除通过竞争性结合雌激素受体来抑制雌激素的作用外,还可通过诱导细胞内[Ca2+]I水平升高,抑制Ca2+依赖蛋白激酶C和钙调蛋白,从而抑制癌细胞的生长.
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地塞米松快速抑制气道平滑肌细胞收缩的机制初探
目的 通过对平滑肌细胞进行地塞米松快速预处理,拟证实糖皮质激素(glucocorticoids,GC)对气道平滑肌细胞内三磷酸肌醇(trisphosphate,IP3)和细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度升高有快速抑制作用.方法 原代培养的大鼠气道平滑肌细胞,比较不同浓度地塞米松预处理后10 min与对照组之间游离钙上升情况的区别.利用离子交换层析液闪法和Fura-2/AM显微荧光检测技术,分别检测肌IP3和[Ca2+]i在受到激动剂刺激后的浓度变化;同时设米非司酮(mifepristone,RU486)及放线菌酮(cycloheximide,CHX)对照组,排除基因组作用在该反应中的影响.结果 用GC温浴大鼠气道平滑肌细胞10 min,能够明显降低刺激物引起的气道平滑肌细胞内IP3和[Ca2+]i峰值.以上反应均不能被RU486和CHX影响或者逆转.结论 GC能够通过非基因组作用快速抑制刺激物引起的气道平滑肌的收缩反应,使细胞内IP3和[Ca2+]i浓度降低.GC对于气道平滑肌的收缩可能存在着快速抑制作用,并且这一作用是通过非基因组机制实现的.
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三(2-氯乙基)磷酸酯诱导肝细胞线粒体毒性的研究
[目的]研究三(2-氯乙基)磷酸酯[tris(2-chloroethyl)phosphate,TCEP]对肝细胞线粒体功能的影响.[方法]用0.00(溶剂对照组)、3.12、12.50、50.00和200.00 mg/L TCEP分别处理人正常肝细胞(L02细胞)和人肝癌细胞(HepG2细胞)24h和48h.测定细胞活力、线粒体内活性氧水平、线粒体DNA拷贝数、线粒体膜电位和胞内游离钙(Ca2+)水平以及胞内ATP的浓度. [结果]与相应溶剂对照组相比,在24h,200.00 mg/L TCEP处理组L02细胞活力降低(P＜0.05),≥12.50 mg/L TCEP处理组HepG2细胞活力降低(P＜0.05);在48h,50.00 mg/L和200.00 mg/L TCEP处理组两种细胞活力降低(P＜0.05).所有TCEP处理组两种细胞的线粒体DNA拷贝数均减少(P＜0.05或P＜0.01).在24h,所有TCEP处理组两种细胞的线粒体膜电位均下降(P＜0.05或P＜0.01).在24h,200.00 mg/L TCEP处理组两种细胞胞内游离Ca2+水平均升高(P＜0.01);在48h,50.00mg/L和200.00mg/L TCEP处理组两种细胞胞内游离Ca2+均升高(P＜0.01).在24h和48h,200.00mg/LTCEP处理组L02胞内ATP水平降低(P＜0.05);在24h,50.00 mg/L和200.00mg/LTCEP处理组HepG2胞内ATP浓度下降(P＜0.05或P＜0.01). [结论]一定浓度的TCEP可致肝细胞线粒体损伤和线粒体功能指标异常,提示TCEP有肝细胞线粒体毒性.
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利用激光扫描共聚焦显微镜观察丹参滴丸对乳鼠心肌细胞缺氧的保护作用
目的:探讨丹参滴丸对培养的乳鼠心肌细胞缺氧/再给氧的保护作用机制.方法:出生3～7 d的大白鼠乳鼠的心脏在无菌条件下取出来,剪碎,经胰蛋白酶消化分离成单个细胞,放入含15%小牛血清的1640培养液内培养36 h,将培养的细胞随机分成:Ⅰ正常对照组;Ⅱ缺氧10 min组;Ⅲ缺氧10 min加丹参滴丸组;Ⅳ缺氧10 min再给氧10 min加丹参滴丸组.缺氧时向培养瓶内通N2,流量为每分钟100个气泡(直径0.5 cm);给氧时向瓶内通O2(含5%CO2),加丹参滴丸组在通气前先加入丹参滴丸,终浓度为40 μg/mL.将实验后的细胞用0.25%的胰蛋白酶从培养瓶内消化下来,加入无血清无酚红的1640培养液清洗,离心后弃上清,用PBS清洗离心5 min,500 r/min,弃上清,加入含10 μmol的Fluo-3/AM染色,37℃恒温水浴锅内孵育1 h,经PBS清洗弃上清,放入无酚红无血清1640培养液内备用.胞内游离钙离子可与钙荧光探针Flio-3结合,产生一种荧光物质,激光扫描共聚焦显微镜(美国Meridian公司生产的Insight plus型),通过发射波长是488 nm的激光,激发细胞内游离钙产生荧光,通过纤维成像系统,可观察及测量出细胞内钙离子平均荧光强度的变化.结果:Ⅰ组细胞内钙离子平均荧光强度为1005.75,Ⅱ组钙离子强度为1509.43,经t检验,P＜0.05,二者有显著差异;Ⅲ组钙离子荧光强度有所减弱,为1217.78,与Ⅰ相比无显著差异(P＞0.05);Ⅳ组钙离子荧光强度为1567.91,与Ⅰ组相比有显著差异(P＞0.05).结论:丹参滴丸对心肌细胞缺血缺氧后所致钙超载有拮抗作用.
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三苯氧胺对人结肠癌细胞增殖的影响及其机理的探讨
目的:探讨三苯氧胺(TAM)对人结肠癌细胞增殖的影响及其机理.方法:采用钙离子荧光指示剂flour-3/Am,流式细胞仪动态检测TAM作用后人结肠癌细胞内游离钙离子([Ca2+]i)水平的变化,同时用MTT比色法测定细胞增殖情况.结果:①TAM使细胞内[Ca2+]i水平在1分钟内上升,以后维持在一个较高水平(349.97nM),与静息状态细胞内[Ca2+]i水平(107.88nM)相比有显著性差异(P＜0.05).②TAM对癌细胞的增殖有抑制作用,其浓度与细胞增殖率呈显著性相关(r＝-0.957,P＜0.05).结论:TAM有抑制人结肠癌细胞增殖的作用,其作用机理除通过竞争性结合雌激素受体来抑制雌激素的作用外,还可通过诱导细胞内[Ca2+]i水平升高,抑制Ca2+依赖蛋白激酶C和钙调蛋白,从而抑制癌细胞的生长.
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雌三醇及三苯氧胺对人结肠癌细胞内游离钙离子浓度的影响
目的:探讨雌三醇(E3)及三苯氧胺(TAM)对人结肠癌细胞内游离钙离子([Ca2+]i)水平的影响及其意义.方法:采用流式细胞仪动态检测E3及TAM作用后,人结肠癌细胞内[Ca2+]i水平的变化.结果:①E3使细胞内[Ca2+]i水平下降,并维持在一个较低水平(27.88nM),与静息状态细胞内[Ca2+]i水平(94.40nM)相比有显著性差异(P＜0.05).②TAM使细胞内[Ca2+]i水平上升,并维持在一个较高水平(349.97nM),与静息状态细胞内[Ca2+]i水平(107.88nM)相比有显著性差异(P＜0.05).结论:①E3不引起胞内[Ca2+]i水平升高,E3促人结肠癌细胞增殖作用的机理符合甾体激素的基因调节作用,未见与钙离子通道的非基因的快速调节作用有关.②TAM抑制人结肠癌细胞增殖的机理,除通过竞争性结合雌激素受体外,还可能通过了改变胞内[Ca2+]i浓度等途径.
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雌三醇对人结肠癌细胞增殖的影响及其机理探讨
目的探讨雌三醇(E3)对人结肠癌细胞增殖的影响及其机理.方法采用钙离子荧光指示剂flour-3/Am,流式细胞仪动态检测E3作用后,人结肠癌细胞内游离钙离子[Ca2+]i水平的变化,同时用MTT比色法测定细胞增殖情况.结果①E3使细胞内[Ca2+]i水平在1分钟内下降,以后维持在一个较低水平(27.88nmol/L),与静息状态细胞内[Ca2+]i水平(94.4nmol/L)相比有显著性差异(P＜0.05).②E3对癌细胞有促增殖作用,其浓度对数值与细胞增殖率呈显著性正相关(r=0.975,P＜o.05),其中1×10-5mmol/L浓度的E3促增殖作用大.结论E3有促人结肠癌细胞增殖作用,但不引起细胞内[Ca2+]i水平升高.E3的促癌细胞增殖作用未见与经钙离子通道引起的非基因的快速调节作用有关,推测是基因调节作用的结果.
