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棘霉素对肝癌SMMC7721细胞凋亡相关基因影响的研究
目的:探讨棘霉素诱导肝癌SMMC7721细胞的凋亡作用及对转录因子Twist、p53、Survivin和hTERT(人端粒酶)基因的影响.方法:采用MTT法测定棘霉素对肝癌细胞的生长抑制率;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测与肝癌的发生和转移密切相关的转录因子Twist,与细胞增殖和凋亡联系紧密的p53、Survivin和hTERT的mRNA表达水平的改变;利用Western blot方法分析棘霉素治疗后上述基因的蛋白表达情况.结果:体外实验证实,棘霉素浓度＞10.0 ng/mL各组对细胞的生长抑制均显著增加,P<0.05,随棘霉素药物浓度增加,细胞抑制率明显增大.棘霉素抑制肝癌细胞株SMMC7721的作用呈剂量-时间依赖性. RT-PCR 方法证实,随着棘霉素剂量的增加,肝癌SMMC7721细胞株中Twist、Survivin和hTERT mRNA表达水平逐渐下调,P<0.01,p53 mRNA表达水平微弱上调,P<0.05.Western blot检测显示,Twist、 Survivin和hTERT蛋白的表达量呈递减趋势,P<0.01,p53蛋白的表达微弱上调,P<0.01.结论:随着棘霉素剂量的增加,细胞凋亡率显著增加.棘霉素能够抑制与肝癌生长密切相关基因的Twist、Survivin和hTERT mRNA表达,促进p53 mRNA表达上调,相应蛋白的表达呈下调和上调.棘霉素可能通过抑制肝癌细胞的生长、转移和促进肝癌细胞的凋亡起到抑制肿瘤生长的作用.
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脱氢环氧甲基醌霉素对头颈部鳞状细胞癌的抑制
目的 探讨核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)抑制剂脱氢环氧甲基醌霉素(dehydroxymethy-lepoxyquinomicin,DHMEQ)对头颈部鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞内NF-κB活性的抑制作用及对头颈部鳞癌细胞体外增殖的抑制作用.方法 选择口腔鳞癌细胞株KB、鼻咽部鳞癌细胞株YCU-N861及喉咽部鳞癌细胞株YCU-H891为研究对象,应用western blot技术检测细胞核蛋白内NF-κB p65蛋白表达水平及经10 μg/ml及20 μg/ml的DHMEQ处理48小时后细胞核蛋白内NF-κB p65蛋白表达的变化;应用荧光素酶报告基因技术检测DHMEQ对NF-κB基因活性的影响;采用WST-1快速比色法及细胞计数法,研究头颈部鳞癌细胞对DHMEQ的敏感性和DHMEQ对其体外增殖的抑制.结果 NF-κB在KB和YCU-H891细胞核内高表达,在YCU-N861细胞核内低表达;DHMEQ能抑制三种头颈部鳞癌细胞株NF-κB基因活性,且随DHMEQ用药浓度升高,核内NF-κB p65蛋白的表达呈下降趋势.DHMEQ对三种头颈部鳞癌细胞的体外增殖均有明显的抑制作用.结论 NF-κB在部分头颈部鳞癌细胞株中高表达.作为NF-κB的抑制剂,DHMEQ能通过抑制NF-κB的核移位来有效抑制NF-κB的活性,从而抑制头颈部鳞癌细胞的体外增殖.
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抑制低氧诱导因子-1α对PC12细胞存活的影响
目的 通过抑制低氧诱导因子-1α转录活性,研究低氧诱导因子-1α在低氧诱导的细胞死亡中的作用.方法 ①将PC12细胞接种于12孔板,在20％常氧和3％低氧环境中培养24h,在光镜下拍照并应用计数方法记录PC12细胞的生长情况.②将PC12细胞接种于96孔板,在常氧和低氧环境中培养24h后,用细胞活力检测剂(a novel tetrazolium compound,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl) -2- (4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium inner salt,MTS)检测PC12细胞的生长情况.③在常氧和低氧条件下分别用5 nmol/L、50 nmol/L、500 nmol/L的低氧诱导因子-1α抑制剂棘霉素处理PC12细胞24 h和48 h后,用MTS法检测细胞活力.结果 ①细胞计数和MTS法检测细胞活力的结果均显示3％的低氧条件可明显诱导PC12细胞死亡.②不同浓度的低氧诱导因子-1α抑制剂棘霉素处理PC12细胞24h之后,低氧和常氧的细胞活力没有显著区别.③不同浓度的低氧诱导因子-1α抑制剂棘霉素处理PC12细胞48 h之后,低氧不再促进细胞死亡,相反,低氧条件处理的细胞活力明显好于常氧.结论 低氧会促使PC12细胞死亡,棘霉素抑制HIF-1α的转录活性24h后,低氧对PC12细胞的促死亡作用减弱；48 h后,低氧组的细胞活力还可超过常氧组.这表明,低氧下过量的HIF-1α转录激活对细胞是有害的.
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棘霉素诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡的研究
目的 研究棘霉素诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡的作用,探讨其抗肿瘤的作用机制.方法 通过细胞计数获得不同浓度棘霉素作用SMMC7721细胞的生长抑制率,观察棘酶素对肝癌细胞生长的影响;通过流式细胞仪分析棘霉素对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果 棘霉素浓度＞10 ng/ml时可抑制SMMC7721细胞的生长.结论 棘霉素在体外可诱导肝癌细胞凋亡,具有很强的抗肿瘤作用.
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棘霉素对伊马替尼敏感及耐药K562细胞ERK、AKT和SPK表达的影响
目的 比较棘霉素对伊马替尼敏感及耐药K562细胞ERK、AKT和SPK表达的影响.方法 MTT法检测细胞存活率,Western blot检测ERK和AKT的表达,同位素掺入检测SPK的活性.结果 棘霉素对K562和耐伊马替尼细胞的IC50分别为0.82 mg/L和0.87 mg/L;棘霉素对ERK和AKT均有不同程度的抑制作用;耐药K562细胞中SPK的表达远高于敏感细胞,且棘霉素对耐药细胞中的SPK活性有显著抑制作用.结论 棘霉素对敏感及耐药K562细胞均有较强的抑制作用,其机制与抑制ERK、AKT和SPK的作用有关.
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棘霉素对耐伊马替尼K562细胞SPK及P-gp表达的影响
目的 研究棘霉素对耐伊马替尼K562细胞SPK及P-gp表达的影响.方法 MTT法检测细胞存活率,同位素掺入检测SPK的活性,流式细胞术检测细胞的P-gp表达.结果 棘霉素对K562和耐伊马替尼细胞的IC50分别为0.82 μg/L和0.87 μg/L;棘霉素对耐药细胞中的SPK和P-gp活性有抑制作用;通过抑制SPK的活性可以下调P-gp的表达.结论 棘霉素对敏感及耐药K562细胞均有较强的抑制作用,抑制K562/Ima存活的机制可能与影响细胞中SPK的表达,并通过下调SPK进一步影响P-gp的表达,从而增加药物在细胞内的累积浓度有关.
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棘霉素对K562细胞生长及相关激酶的影响
目的 研究棘霉素对人白血病细胞K562生长及相关激酶的影响.方法 取对数生长期的K562细胞,采用0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、3.0μg/L棘霉素分别处理24 h,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术观察细胞周期分布,Western blot检测Bcr-Abl、AKT的表达.结果 棘霉素对K562细胞的IC50为0.82μg/L.随着浓度的增加,棘霉素对酪氨酸激酶的抑制作用增强;棘霉素在2.0 μg/L时,其抑制细胞蛋白激酶B的磷酸化程度高.结论 棘霉素可以抑制K562细胞的增殖,其机制与抑制酪氨酸激酶和下调蛋白激酶B的作用有关.
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棘霉素对KBV200细胞作用的初步研究
目的 初步研究棘霉素(echinomycin)对KBV200细胞(耐长春新碱的口腔癌细胞)的作用及其作用机制.方法 采用MTT法及流式细胞仪分别检测KBV200细胞的增殖和凋亡;用同位素掺入、Western blot、RT-PCR等方法分别检测鞘氨醇激酶、P-糖蛋白、缺氧诱导因子的表达.结果 棘霉素可诱导KBV200细胞的凋亡,流式结果 出现DNA亚二倍体凋亡峰;棘霉素对鞘氨醇激酶、p-糖蛋白、缺氧诱导因子的表达有不同程度的抑制作用.结论 棘霉素对KBV200细胞有细胞毒作用,其作用机制与抑制鞘氨醇激酶、P-糖蛋白、缺氧诱导因子的表达有关.
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挤压综合征性肾损伤时HIF-1α变化及与肾血流量和血液流变学的关系的研究
目的 通过CoCl2上调HIF-1α的表达和棘霉素抑制HIF-1α转录活性,观察挤压综合征性肾损伤时HIF-1α表达与肾血流量及血液流变学的关系.方法 SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、CoCl2组、棘霉素组.检测肾血流量、血液流变学指标、肾功能和形态学改变以及肾组织HIF-1 α表达,ImagePro plus6.0图像分析软件进行半定量分析.结果 模型组肾血流量明显减少,血液流变性指标和Cr、BUN增高(P＜0.05),肾小管上皮肿胀,部分管腔闭塞,坏死,管型可见,肾HIF-1 α少量表达.与模型组比较,CoCl2组HIF-1 α表达增加(P＜0.05),其余指标异常有所改善(P＜0.05);棘霉素处理HIF-1 α表达未增加,其余指标异常进一步加重(P＜0.05).结论 HIF-1α表达增加可改善血液流变性,增加肾血流量,对挤压综合征性肾损伤具有一定保护作用.
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抗肿瘤抗生素棘霉素的研究进展
醌霉素是一类链霉菌产生的非核糖体肽类的天然产物,结构中的两个喹喔啉环生色团为活性基团,该基团通过插入到DNA碱基对间从而抑制DNA的复制和RNA的合成,这类化合物具有非常广泛的抗菌,抗肿瘤和抗病毒活性.棘霉素是这类化合物之一,是抗肿瘤药物药物研究和开发的重要靶分子.棘霉素的生物合成和抗肿瘤作用机制一直在研究中,综述了近10年来对棘霉素生物合成、抗肿瘤作用机制和应用的新研究进展,以期待其更广泛的服务于抗肿瘤药物研究.
