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内质网应激表达在蛋白酶抑制剂MG-132诱导人类脑胶质瘤细胞凋亡中的作用
目的 探讨内质网应激(ERS)指标在MG-132诱导人类脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡中的作用.方法 通过传代法培养人类脑胶质瘤细胞,选择MG-132处理24 h,采用处理前(对照组)和不同浓度(5、10、15、50 μmol/L)处理后的胶质瘤细胞,用MTT比色法榆测细胞活力,RT-PCR和Western blotting方法检测ERS指标GRP78和凋亡指标Caspase-12的表达.结果 MTT比色法检测结果显示,MG-132处理24 h后,SHG-44细胞活力明显下降(39%)(P<0.05),且随着MG-132浓度的加大,继续呈现显著下降的趋势(P<0.05).RT-PCR结果显示,经过MG-132处理24h后,SHG-44细胞ERS相关蛋白GRP 78表达5、10、15、50 μmol/L处理后显著增加,Caspase-12表达在经5 μmol/L处理后显著增加,10、15 μmol/L处理后表达较5 μmol/L处理后增加不明显,50 μmol/L处理后与5、10、15 μmol/L3组比较差异有统计学意义.Western blotting结果显示,ERS相关蛋白GRP78表达在经5 μmol/L处理后显著增加,10、15 μmol/L处理后表达较5 μmol/L处理后增加不明显,50 μmol/L处理后达高峰.结论 在MG-132处理诱导胶质瘤细胞凋亡的过程中,ERS是发挥作用的主要通路之一.
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MG-132激活SHG-44细胞株自噬途径的体外实验
目的 探讨抑制蛋白酶体功能对人胶质瘤SHG-44细胞内自噬途径的激活作用.方法 采用5.0μmol/L蛋白酶体特异性抑制剂MG-132抑制人胶质瘤细胞SHG-44蛋白酶体功能.采用HE染色光镜观察细胞形态变化,AO染色荧光显微镜观察胞质内酸性囊泡细胞器的形成,锇铀铅染色透射电镜观察亚细胞结构变化.差速离心及蛋白印迹分析自噬关联蛋白Beclin及LC3的表达.结果 蛋白酶体功能被抑制后,HE染色光镜下可见SHG-44细胞的胞核呈深蓝色,大小无明显变化,部分染色质轻度浓缩,胞质内可见空泡,胞核附近胞质呈嗜酸性红染;荧光显微镜下见胞核呈黄绿色荧光,细胞核周围的胞质呈点状红色荧光;透射电镜下可见胞核无明显变化,胞质内出现自噬前体、自噬体及自噬溶酶体等亚细胞结构;蛋白印迹分析显示胞质内的Beclin、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ显著增加.结论 抑制蛋白酶体功能可以有效地激活人胶质瘤SHG-44细胞内自噬途径.
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激光共聚焦显微镜观测蛋白酶抑制剂MG-132诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的研究
目的 探讨MG-132诱导人脑胶质瘤细胞SHG-44损伤中钙超载的作用.方法 通过传代方法 培养人脑胶质瘤细胞.选取MG-132处理24小时,采用处理前(对照组)和不同浓度(5、10,1 5、50μmol/L)处理后的胶质瘤细胞,采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,激光共聚焦检测细胞内钙离子荧光强度.结果 MTT比色法检测发现,MG-132处理24h后,SHG-44细胞活力明显下降43%(P<0.05),且随着MG-152浓度的加大,继续呈现显著下降的趋势(P<0.05).流式细胞仪检测结果 发现,与对照组比较,MG-132作用24h后.各组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),5、10,15μmol/L组细胞调往情况相似(P>0.05),但50 μmol/L细胞凋亡率升高较为明显(P<0.05).激光共聚焦测钙离子荧光强度结果 显示,与空白对照组相比钙离子荧光强度明显升高(P<0.05),5、10,15μmol/L组钙离子荧光强度相似(P>0.05),但50μmol/L细胞钙离子荧光强度明显升高(P<0.05).结论 MG-132处理可以通过激发细胞内钙超载诱导胶质瘤细胞凋亡.
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氰基丙烯酸正丁酯纳米载体促进紫杉醇粒抗脑胶质瘤作用的实验研究
目的:动物实验水平研究聚氰基丙烯酸正丁酯纳米载体促进紫杉醇粒抗脑胶质瘤的作用.方法:①紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒悬液的制备.②制备胶质瘤模型,制备的胶质瘤模型随机分成四组,每组20只,Ⅰ组注射生理盐水、Ⅱ组注射紫杉醇、Ⅲ组注射PBCA+ NP、Ⅳ组注射紫杉醇+PBCA+ NP,15d后观察Wistar大鼠的变化,观察肿瘤病理切片,检测肿瘤细胞的凋亡率.结果:①Wistar大鼠的生存状态,Ⅳ组好于其它三组.②Ⅱ组和Ⅲ组Wistar大鼠脑胶质瘤血管的减少和坏死肿瘤组织比Ⅳ组少.③Wistar大鼠脑胶质瘤调亡率Ⅳ组高于Ⅱ组、Ⅲ组,具有统计学显著差异(P＜0.05).结论:聚氰基丙烯酸正丁酯纳米载体明显提高紫杉醇抗Wistar大鼠脑胶质瘤的作用.
关键词： 聚氰基丙烯酸正丁酯紫杉醇 SHG-44 Wistar大鼠 病理 -
Wistar大鼠SHG-44脑胶质瘤动物模型建立
目的:建立Wistar大鼠SHG-44脑胶质瘤模型,为胶质瘤药物的药效学研究提供实验基础.方法:采用立体定向技术,将体外培养的SHG-44胶质瘤细胞浓缩悬液,5×106/10μL接种于Wistar大鼠的右侧尾状核区,种植后连续观察大鼠的生存状态,并于7d行MRI扫描,将未成瘤的大鼠去除,分别于7d、14d、21d、自然死亡几个区间观察大鼠的生存状态,21d处死和自然死亡的大鼠,取脑制作病理切片,HE染色,光镜下观察.结果:1周内均较活泼,全部正常,术后1～2周表现为表现为精神萎靡,反应迟钝,食欲不振,活动减少,体重下降,步态不稳,2周后上述症状加重,逐渐有死亡的大鼠.HE染色可明显观察到大鼠脑胶质瘤的形成.结论:建立的Wistar大鼠SHG-44脑胶质瘤动物模型可靠稳定,其肿瘤生长特性及病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤研究的理想模型.
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全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞基因的差异表达
目的 分析全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞所致的差异表达基因,为研究胶质瘤进展的基因通路及机制提供依据.方法 运用cDNA微阵列技术比较全反式维甲酸处理前后胶质瘤SHG-44细胞(WHO Ⅳ级)的基因表达谱,鏊定与胶质瘤进展相关的差异表达基因.随机选择数个差异表达基因进行Northem杂交以验证cDNA微阵列结果的可靠性.结果 鉴定出42个差异表达基因,其中表达上调28个、下调14个;按功能有凋亡类、细胞侵袭与转移类、细胞周期与生长调节类、细胞骨架类、细胞代谢类等.结论 初步揭示SHG-44细胞基因的差异表达,开展时这些基因的研究有可能阐明胶质瘤进展的基因通路及机制.
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两种级别胶质瘤细胞系代谢基因的差异表达
目的 基因的异常表达和功能调节在胶质瘤的进展过程中扮演着重要的作用.然而,导致胶质瘤由低级向高级进展的基因通路远未阐明.本实验拟从不同级别的胶质瘤细胞系筛选代谢相关的差异表达基因,为进一步研究胶质瘤进展的机制提供实验基础.方法 以两株不同级别的胶质瘤细胞系(CHG-5,WHO Ⅱ级;SHG-44,WHO Ⅳ级)和全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)为实验模型,运用cDNA微阵列技术进行研究.通过芯片杂交,分别检测CHG-5以及全反式维甲酸诱导前后SHG-44的基因表达谱,筛选差异表达基因;随机选择数个差异基因进行Northern杂交实验,以验证cDNA微阵列的结果.结果本实验发现13个与胶质瘤进展密切相关的代谢基因存在差异表达,它们涉及细胞的糖类和核苷酸代谢.其中,TPI1,BPGM,ALDOA,AKR1B1,LDHA,ADSL,RRM1和NP表达上调,而UGT287,ACAT1,IMPDH2,PRPS1和PKM2表达下调.此外,有5个基因(TPI1,BPGM,ALDOA,LDHA和RRM1)在全反式维甲酸诱导的SHG-44细胞中也出现差异表达,提示这些基因不仅存在于不同级别的胶质瘤细胞系之间,而且存在于分化诱导处理的胶质瘤细胞之间.部分差异表达基因为Northern杂交实验所验证.结论 利用cDNA微阵列技术首次发现有13个差异表达基因与胶质瘤细胞的代谢密切相关,它们可能在胶质瘤的恶性转化和进展中扮演着重要的作用.
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不同级别胶质瘤细胞系生长调节相关重叠基因的鉴定
目的 利用cDNA微阵列分析不同级别和全反式维甲酸诱导的胶质瘤细胞系生长调节相关的重叠基因,为进一步研究胶质瘤恶性转化的基因机制提供依据.方法 通过运用eDNA微阵列技术比较两种不同级别胶质瘤细胞系CHG-5(WHO Ⅱ级)和5HG-44(WHO Ⅳ级)以及10μmoL/L全反式雏甲酸诱导3d的SHG-44细胞系的基因表达谱,鉴定与胶质瘤生长调节相关的重叠基因,并消除细胞系间的个体差异.随机选择数个重叠基因进行Northern杂交实验.以验证cDNA微阵列结果的可靠性.结果 实验鉴定出31个重叠基因,其中表达上调20个、下调11个;5个重叠基因:MDM2、DCTN2、FADD、PDCD5和SOD2与胶质瘤的生长调节相关.部分重叠基因的可靠性为Northern杂交实验所验证.结论 初步揭示不同级别的胶质瘤细胞系之间存在生长调节相关基因的差异表达,提示这些重叠基因可能与胶质瘤的进展有关.
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全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞侵袭相关基因的差异表达
目的 筛选全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞系所致侵袭相关差异表达基因,为进一步研究胶质瘤的侵袭机制提供依据.方法通过运用cDNA微阵列技术比较10μmol/L全反式维甲酸处理前后胶质瘤SHG-44细胞(WHOⅣ级)的基因表达谱,鉴定与胶质瘤侵袭相关的差异表达基因.随机选择数个差异表达基因进行Northern杂交实验,以验证cDNA微阵列结果 的可靠性.结果 实验鉴定出42个差异表达基因,其中表达上调28个、下调14个.4个差异表达基因:CD151、G3BP、UGB和CSTB与胶质瘤的侵袭相关.部分差异表达基因的可靠性为Northern杂交实验所验证.结论 初步揭示全反式维甲酸能诱导胶质瘤细胞侵袭相关基因的差异表达,进一步开展对前述差异表达基因的研究有可能阐明胶质瘤侵袭的基因通路及机制.
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不同级别胶质瘤细胞系与侵袭和转移相关的重叠基因
目的 利用cDNA微阵列分析不同级别和全反式维甲酸诱导的胶质瘤细胞系与侵袭和转移相关的重叠基因,为进一步研究胶质瘤的侵袭机制提供依据.方法 通过cDNA微阵列技术比较两种不同级别胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44以及全反式维甲酸诱导3天的SHG-44细胞系的基因表达谱,消除细胞系间的个体差异,鉴定与胶质瘤侵袭和转移相关的重叠基因.随机选择数个重叠基因进行Northern杂交实验,验证cDNA微阵列结果 的可靠性.结果 实验鉴定出31个重叠基因,表达上调20个,下调11个.其中,4个重叠基因,包括CD151、G3BP、UGB和CSTB与胶质瘤的侵袭和转移相关.部分重叠基因的可靠性为Northern杂交实验所验证.结论 初步揭示不同级别的胶质瘤细胞系之同存在侵袭和转移相关基因的差异表达,提示这些重叠基因可能与胶质瘤的进展有关.
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全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞增殖相关基因的差异表达
目的 筛选全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞所致增殖相关差异表达基因,为进一步研究胶质瘤进展的基因通路及机制提供依据.方法 通过运用cDNA微阵列II技术比较10 μmol/L全反式维甲酸处理前后胶质瘤SHG-44细胞(WHOⅣ级)的基因表达谱,鉴定与胶质瘤增殖相关的差异表达基因.随机选择数个差异表达基因进行Northern杂交实验,以验证cDNA微阵列结果 的可靠性.结果 实验鉴定出42个差异表达基因,其中表达上调28个、下调14个.5个差异表达基因;MDM2、PDCD5、SOD2、SERPINF1和MAPK11与胶质瘤的增殖相关.结论 初步揭示全反式维甲酸能诱导胶质瘤细胞增殖相关基因的差异表达,提示前述差异表达基因可能与胶质瘤的进展有关.
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异氟醚下调MYC表达抑制高级别脑胶质瘤细胞增殖转移
目的 探究异氟醚对高级别脑胶质瘤细胞MYC基因表达及细胞增殖转移能力的影响.方法 分别采用含2％异氟醚的气体环境及常规气体环境(5％ CO2)培养对数生长期的人脑胶质瘤细胞系SHG-44 6 h,作为异氟醚组及对照组;CCK-8实验检测两组细胞气体暴露完成后0、24、48、72 h相对增殖能力;Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞侵袭及迁移能力;Western Blotting检测两组细胞C-Myc及N-Myc的蛋白表达.结果 异氟醚组细胞于暴露完成后48、72 h时增殖能力较对照组细胞显著下调,差异具有统计学意义(P＜0.01);异氟醚组穿透基质胶的侵袭细胞数、穿过微孔的迁移细胞数均较对照组显著减少,差异均具有统计学意义(P＜0.01、0.001);异氟醚组C-Myc及N-Myc的表达较对照组均显著下调,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 异氟醚可通过下调C-Myc及N-Myc基因的表达,抑制人高级别脑胶质瘤细胞的增殖转移.
