蛇毒血凝酶

蛇毒生物药品的现状与前景

综述了近l0多年来国内外以蛇毒为原料的生化药物的现状.对蛇毒抗凝、镇痛和止血等多种活性的临床应用进行了讨论,同时也指出了蛇毒制药的前景和目前存在的问题.

来源于浙江尖吻蝮蛇毒抗肿瘤多肽的纯化与特性

采用超滤和反相色谱法从浙江尖吻蝮蛇毒中分离出3个抗肿瘤活性多肽.结构研究表明它们分别为焦谷氨酰赖氨酰色氨酸(pyroGlu-Lys-Trp)、焦谷氨酰门冬酰胺酰色氨酸(pyroGlu-Asn-Trp)和焦谷氨酰谷氨酰胺酰色氨酸(pyroGlu-Gln-Trp).MTT试验结果显示,在10 μg/ml时,活性多肽对人低分化胃癌细胞BGC-283、乳腺癌细胞MDA-MB-231及人肝癌细胞SMMC-7721有30％～60％的增殖抑制活性.

活化C蛋白样酶的筛选与特性研究Ⅰ.从蛇毒中筛选

活化C蛋白(activated protein C,APC)是人体内重要的生理抗凝剂,对凝血系统、炎症的发生和发展、细胞凋亡等生理反应进行调控.大量动物试验和临床研究表明APC对严重脓毒症、弥散性血管内凝血、婴儿紫斑和脊髓损伤等疾病有显著疗效.Lilly公司开发的重组人APC(商品名Xigris)于2001年由FDA批准上市,是首个治疗成年人严重脓毒症的生物药物[1,2].

蛇毒金属蛋白酶及去整合素的结构与功能

蛇毒金属蛋白酶是蛇毒主要功能性蛋白质之一,它直接作用于局部组织的毛细血管,影响毛细血管内皮细胞与基底膜之间的相互作用;蛇毒去整合素与蛇毒金属蛋白酶来自共同的前金属蛋白酶原,这些酶原都含有4个共同的结构域:信号肽、前导肽、蛋白酶结构域、间隔区.去整合素因能特异性识别整合素而得名,蛇毒去整合素为低分子量蛋白质,含有多个Cys残基,它能阻断整合素与其配体的结合,抑制整合素介导的细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的黏附反应,在血小板聚集、感染、炎症反应、肿瘤转移等病理过程中发挥重要作用.

蝮蛇抗栓酶胸膜腔注射防治胸膜粘连肥厚的疗效观察

1990年4月至1998年10月,我们对结核性渗出性胸膜炎在应用抗结核化疗、胸腔抽液、胸腔内注射异烟肼与地塞米松的基础上(Ⅰ组),加用蝮蛇抗栓酶(以下简称蛇毒)胸膜腔注射(Ⅱ组),在防治胸膜粘连、肥厚、包裹性积液,促进胸液吸收方面对照观察,Ⅱ组疗效显著优于Ⅰ组,现报告如下:

178例毒蛇咬伤患者的急救护理

毒蛇咬伤在我国农村特别是南方农村较常见,咬伤后症状的轻重与蛇的大小、蛇毒进入体内的多少、蛇毒的种类有密切关系.咬伤后处理是否正确、及时,护理是否得当,对提高抢救成功率有重要意义.现将我科2000年5月至2004年10月收治的178例毒蛇咬伤患者的急救护理报告如下.

蛇毒抗高凝状态酶对种植肝癌H22小鼠肿瘤抑制作用的研究

目的 探讨蛇毒抗高凝状态酶(AHCSE)对实验小鼠肿瘤的抑制作用.方法 20只Balb/c小鼠随机分为治疗组和对照组,左前肢腋下接种H22肝癌瘤组织,治疗组腹腔途径注射AHCSE 2 mg/kg体重,对照组用生理盐水代替.结果 对照组瘤结较大,显微镜下见瘤细胞生长活跃、核大、核仁明显、核分裂多见,而坏死灶少见,且瘤细胞向周围浸润扩散;治疗组瘤体较小,瘤细胞固缩、核仁不明显、核分裂少见,而坏死灶多见,瘤细胞周围有少量纤维组织增生.结论 AHCSE具有显著的体内抑制肿瘤生长的作用.

100例毒蛇咬伤者心电图特征

目的 探讨毒蛇咬伤者的心电图特点与临床症状相关性研究.方法 对100例毒蛇咬伤者心电图(A组)进行回顾性分析,与100例正常体检者心电图(B组)对照.结果 心律失常、P波改变、T波改变及窦性心动过速等两组间有显著性差异(P＜0.01).结论 毒蛇咬伤者具有心律失常、ST-T改变、窦性心动过速等特征,心电图改变往往是具有血循毒的毒蛇咬伤者.

蛇毒素成分及临床应用进展

蛇毒是从毒蛇的毒腺中分泌出的一种毒液,属于生物毒素.一般蛇毒的新鲜毒液呈蛋清样粘稠液体,弱酸性,常温下易失活.全世界现有蛇类2 700余种,其中毒蛇约470种.我国有毒蛇60多种,其中剧毒蛇10余种[1],可见丰富的毒蛇资源有助与蛇毒研究.蛇毒含多种蛋白质、多肽、酶类和其他小分子物质,具有广泛的生物学活性.近年来,对蛇毒应用研究主要集中在对蛇毒成分的生物学特点上.研究者发现蛇毒具有抗炎,抗肿瘤,止血与抗凝,溶栓,镇痛等作用.此外,蛇毒还被应用到抗异种心脏移植排斥反应的研究中.本文在此对其主要成分及临床作用作一综述.

广西产尖吻蝮蛇蛇毒细胞毒素的纯化与活性鉴定

采用Sephdex G50,Source 30Q及phenyl sepharose HP柱层析从广西五步蛇蛇毒分离纯化出一种电泳纯细胞毒素I3-H3,分子质量为36ku.I3-H3对体外培养的人癌细胞有较强抑制和杀伤作用.用溴化二苯四偶氮盐比色法检测其对体外培养的人癌细胞的细胞毒作用,探索量效关系.其对体外培养的人肺癌细胞株(A549),人胃癌细胞株(BGC)和人鼻咽癌细胞株(KB)的抑制作用呈明显剂量依赖关系,作用24 h的IC50分别为27.75,26.90和64.46μg/ml.

蛇毒神经毒素的研究进展

蛇毒神经毒素是蛇毒毒液中主要的毒性成分,是一种低分子质量的碱性多肽.神经毒素因其能够治疗神经性疼痛、癌痛及神经硬化症等,应用于临床;而且是研究神经系统中神经递质的产生和传递过程分子作用机制的重要探针,神经毒素具有科学研究及临床应用的重要前景.该文就各类神经毒素的研究进展状况及镇痛机制方面的研究作了综述.

蛋白组学技术在抗蛇毒血清研究中的运用

毒蛇咬伤是热带、亚热带地区比较常见,给公众健康带来严重危害的一类疾病.动物源性的抗蛇毒血清是现代蛇伤治疗的主要手段,但是由于蛇毒成分复杂,且存在种内、种间变异,由全蛇毒免疫所获得的抗蛇毒血清存在诸多不足之处.随着蛋白组学技术在蛇毒研究的应用,使人们对蛇毒的研究有了一些新的认识,近年来出现的“蛇毒蛋白组学”(Venomics)和“抗蛇毒血清组学”(Antivenomics)技术的出现,为生产新型的、毒素特异性的抗蛇毒血清带来了可能,本文现就“蛇毒蛋白组学”(Venomics)和“抗蛇毒血清组学”(Antivenomics)在蛇毒研究及抗蛇毒血清设计和质量控制等几个方面进行综述.

眼镜蛇(Naja naja atra)神经毒素与心脏毒素分离纯化研究进展

眼镜蛇神经毒素与心脏毒素分别具有显著的镇痛活性和抗肿瘤活性.这两种毒素同源性高,等电点,分子质量以及蛋白结构都很相似,给分离纯化造成一定难度.获得单一成分的神经毒素和心脏毒素是理化性质分析、药理活性研究和临床应用的前提,文章综述了多年来舟山眼镜蛇蛇毒中神经毒素与心脏毒素的分离纯化研究进展.

蛇毒三肽pENW对血管内皮的保护作用及机制探讨

目的:体外实验评价pENW对血管内皮细胞氧化应激损伤和炎性损伤的保护作用,并对其作用机制进行探讨,以提供pENW可开发成为抗血栓药物的依据.方法:原代堵养的血管内皮细胞以消化合并刮取法取自牛胸主动脉.H<,2>O<,2>(800μmol·L<'-1>) 和LPS(1 mg·L<'-1>) 分别用于模拟氧化应激损伤和炎性损伤,经典的Griess Reagent法用于检测一氧化氮的含量.LPS(100μg·L<'-1>) 用于刺激血管内皮细胞分泌一氧化氮.在考察pENW对血管内皮细胞的保护作用时,设空白对照组(给予等体积的磷酸盐缓冲溶液) 、模型组(分别给予H<,2>O<,2>(800μmol·L<'-1>) 或LPS 1 mg·L<'-1>进行造模) 、阳性药给药组(在H2O<,2>造模前给予依达拉奉10<'-5>mol·L<'-1>或在LPS造模前给予阿司匹林10<'-4>mol·L<'-1>) 和不同剂量pENW给药组(造模前分别给予pENW 10<'-4>,10<'-5>,10<'-6>和10<'-7>mol·L<'-1>).在探讨病理条件下pENW对血管内皮细胞释放一氧化氮的调节作用时,设空白对照组(给予等体积的磷酸盐缓冲溶液) 、模型组(给予LPS 100 μg·L<'-1>) 、阳性对照组(造模前给予阿司匹林10<'-4>mol·L<'-1>) 和不同剂量pENW给药组(造模前分别给予pENW 10<'-4>,10<'-5>,10<'-6>和10<'-7>mol·L<'-1>),而在进行正常生理条件下pENW调节血管内皮细胞一氧化氮释放作用的研究时,除不设模型组外,其余各组亦不给LPS.结果:pENW能剂量依赖性地减轻H<,2>O<,2>和LPS引起的血管内皮细胞损伤.在pENW10<'-4>mol·L<'-1>+H<,2>O<,2>和pENW 10<'-4>mol·L<'-1>+LPS组,细胞存活率分别升高至(97.6±40.4) %和(64.7±8.0) %;10<'-4>mol·L<'-1>的pENW使血管内皮细胞在正常生理条件下合成的一氧化氮由空白组的(15.50±2.82) 升高至(48.68±10.81) μmol·L<'-1>(P<0.01) ;但pENW能抑制LPS(100 μg·L<'-1>) 引起的一氧化氮大量升高,且抑制作用呈剂量依赖性.结论:pENW对血管内皮细胞损伤具有保护作用,其作用与调节内皮细胞一氧化氮的释放有关.

白唇竹叶青蛇毒5'-核苷酸酶对血小板聚集的影响及其机制研究

目的 研究白唇竹叶青蛇毒5'-核苷酸酶对血小板聚集的影响,探讨其作用机制.方法 采用比浊法测定白唇竹叶青蛇毒5'-核甘酸酶对二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)、血小板活化因子(PAF)诱导血小板聚集的影响.结果 白唇竹叶青蛇毒5'-核甘酸酶能抑制ADP、AA、PAF诱导的血小板聚集,且其抑制率与剂量增加成正比;抑制血小板聚集作用与ADP的水解和腺苷的积累有关.结论 白唇竹叶青蛇毒5'-核甘酸酶能抑制血小板聚集,抑制作用主要通过水解ADP和积累腺苷,可能与阻断僦的生成有关.

眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞生长及其生化机制初探

目的 探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抑制新生牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)生长的作用及其生化机制.方法 用MTT法测定CCVAF抑制BAVEC的增殖活性,用伊红-考马斯亮蓝法观察细胞骨架,罗丹明-鬼笔环肽荧光探针F-actin骨架蛋白定位,荧光标记流式细胞法测荧光强度表胞内钙离子浓度[Ca~(2+)]_i及分光光度法测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮(NO)的含量.结果 CCVAF(0.625～20 μg/mL)剂量依赖性地抑制内皮细胞的生长,IC_(50)=2.45 μg/mL.CCVAF与BAVEC共同孵育后,引起细胞间连接减少,细胞F-actin分布混乱;细胞上清液中LDH活力及NO的含量及胞内[Ca~(2+)]_i分别增加.结论 CCVAF抑制BAVEC增殖,可能与CCVAF导致细胞骨架改变,LDH及NO分泌量及胞内Ca~(2+)浓度增加等生化机制有关.

蝮蛇毒小分子多肽的分离、纯化及其抗肿瘤作用研究

目的 从长白山岩栖蝮蛇蛇毒中分离纯化1种小分子多肽saxis,测定理化性质,研究其对肿瘤细胞的生长抑制作用.方法 利用有机溶剂沉淀和Sephadex G-50、Sephadex G-25凝胶过滤色谱等方法分离纯化长白山栖岩蝮蛇蛇毒中的1种小分子多肽Saxis;采用Trieine-SDS-PAGE鉴定;利用Bradford蛋白质测定法测定蛋白质浓度;运用MTT比色法检测该小分子多肽对宫颈癌细胞Hela、肝癌细胞SMMC-7721和胃腺癌细胞SGC-7901的生长抑制作用.结果 该小分子多肽Saxis的相对分子质量约为5 200,它能抑制Hela、SMMC-7721和SGC-7901细胞的增殖,并且对这3种肿瘤细胞的抗增殖作用具有药物剂量依赖关系,24 h的IC50分别为66.3,54.5,62.2μg/mL.结论 利用有机溶剂沉淀和凝胶过滤色谱法可以从长白山岩栖蝮蛇蛇毒中分离纯化1种小分子多肽Saxis,其对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用.

白唇竹叶青蛇(Trimeresurus albolabris)毒降纤酶的分离纯化以及性质

目的 从白唇竹叶青蛇(T. albolabris)毒中分离纯化无出血作用的降纤活性组分,探讨其理化性质及部分生物功能.方法 用DEAE-SephadexA-25,SephadexG-100和CM-SephadexC-50三步色谱法进行分离纯化.SDS-PAGE和HPLC鉴定其纯度和相对分子质量,平板法测定其降纤活性.结果 从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化获得单一的降纤组分,能迅速水解纤维蛋白原或纤维蛋白原Aα链,缓慢水解Bβ链,而对γ链无作用,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为56000.EDTA能抑制其纤维蛋白原水解活性,而PMSF、β-巯基乙醇对其活性无影响,提示该组分为单链α金属蛋白酶.结论 从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化得到1种无出血作用且降纤活性强的新蛇毒降纤酶.

中华眼镜蛇毒组分F的体外抗血管生成活性研究

目的研究中华眼镜蛇毒组分F对血管内皮细胞黏附功能的抑制作用和体外的抗血管生成活性.方法MTT快速测定法测定组分F对原代培养的血管内皮细胞对纤维蛋白原(Fg)、纤连蛋白(Fn)、Matrigel的黏附作用的影响;采用平面拟毛细血管生成培养法,观察组分F对血管生成的抑制效应.结果组分F可抑制血管内皮细胞的黏附功能,对细胞黏附Fn、Fg和Matrigel 3种物质的作用从1.2 μg/ml浓度起即有抑制效应(P＜0.05),且均呈浓度依赖性,组分F对细胞黏附Fg和Matrigel的抑制作用较其对Fn的作用强(P＜0.05);组分F可抑制内皮细胞在培养基质中生成血管样网状结构的反应,并且随浓度的不同抑制程度有明显不同.结论中华眼镜蛇毒组分F具有体外抗血管生成活性.