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Sonic hedgehog信号对口腔鳞癌中组蛋白甲基化转移酶的研究
目的 检测Sonic hedgehog信号在口腔鳞癌致病过程中是否具有调节组蛋白甲基化转移酶表达的功能.方法 利用人重组SHH-N蛋白及过表达M2-SMO在舌鳞状细胞癌细胞系SCC6激活Shh信号,利用Cyclopamine阻断Shh信号,采用Real-time PCR在mRNA水平检测组蛋白甲基化转移酶相关基因的表达.结果发现激活Shh信号通路,组蛋白甲基化转移酶DOT1、MLL2和MLL4在mRNA水平表达明显升高.抑制Shh信号通路,DOT1、MLL2和MLL4表达明显降低.结论 在口腔鳞癌中组蛋白甲基化转移酶DOT1、MLL2和MLL4是Shh信号通路的下游基因,其表达受Shh信号分子的正向调控.
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高糖环境下趋化因子8促进间充质干细胞旁分泌功能提高人脐静脉血管内皮细胞归巢
背景：趋化因子具有促进干细胞旁分泌血管活性因子，加速血管新生的重要作用。目的：观察高糖环境下，趋化因子8(CXCL-8)刺激的人骨髓间充质干细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞归巢的影响，并分析Sonic Hedgehog信号通路在CXCL-8刺激骨髓间充质干细胞的机制。方法：①细胞体外实验：在细胞高糖环境模型下，将质量浓度100μg/L趋化因子8刺激的间充质干细胞设为高糖CXCL-8组，预先以5μmol/L的shh抑制剂辛基马来酰亚胺处理45 min，再用质量浓度100μg/L CXCL-8刺激间充质干细胞者为高糖Shh抑制剂组，高糖环境下培养的间充质干细胞为高糖对照组。提取各组细胞上清液为条件培养基培养人脐静脉血管内皮细胞，其分组按条件培养基而定。使用CCK8细胞增殖实验、细胞划痕实验或Transwel 细胞小室实验分别观察各条件培养基(CM)对人脐静脉血管内皮细胞增殖、凋亡、趋化等能力的影响；②动物体内实验：建立C57BL/6J小鼠糖尿病皮肤溃疡模型，分别以各组间充质干细胞条件培养基进行处理，验证CXCL-8刺激的间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞归巢和溃疡愈合的影响。结果与结论：①体外实验结果：与高糖对照条件培养基相比，高糖CXCL-8组条件培养基能够促进人脐静脉血管内皮细胞增殖、降低人脐静脉血管内皮细胞凋亡率，并且细胞划痕面积闭合率、细胞迁移率均明显提高(P<0.01)，高糖CXCL-8组条件培养基中血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子水平明显提高(P<0.01)；与高糖CXCL-8组相比，高糖Shh抑制剂组上述结果指标呈反向变化(P<0.01)；②体内实验结果：与Shh抑制剂-CM组和间充质干细胞-CM组相比，CXCL-8-CM组糖尿病皮肤溃疡的愈合效果和绿色荧光蛋白标记的人脐静脉血管内皮细胞数均显著升高(P<0.01)；③结果提示，在高糖环境下，CXCL-8能够通过Shh通路，刺激间充质干细胞旁分泌血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子，提高了对脐静脉血管内皮细胞招募的能力。
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白藜芦醇抑制Sonic hedgehog信号并减轻大鼠肺纤维化的研究
目的 研究白藜芦醇对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的影响.方法 完全随机分组法将40只SD雄性大鼠分为4组:对照组、模型组、25μmol白藜芦醇组和50μmol白藜芦醇组.模型组大鼠气管内滴注博莱霉素,25和50μmol白藜芦醇组大鼠气管内滴注博莱霉素后分别用25和50μmol白藜芦醇灌胃,对照组大鼠气管内滴注生理盐水.处理30 d后,观察各处理组大鼠肺组织病理变化并检测大鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)和Ⅰ型胶原蛋白含量.分离各组大鼠肺成纤维细胞,并利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测细胞中SHH(Sonic hedgehog,SHH)、Smo、Gli-1 mRNA和蛋白的表达,同时检测细胞增殖和凋亡.结果 模型组大鼠肺泡结构严重破坏并伴有胶原纤维沉淀,白藜芦醇处理可减轻纤维化病变.白藜芦醇可降低肺组织中博莱霉素诱导的HYP和Ⅰ型胶原蛋白含量.博莱霉素能显著上调成纤维细胞中SHH、Smo、Gli-1mRNA和蛋白的表达,而白藜芦醇则可抑制SHH、Smo和Gli-1的表达.博莱霉素促进成纤维细胞增殖并减少凋亡,白藜芦醇抑制细胞增殖并促进细胞凋亡.结论 白藜芦醇可抑制博莱霉素诱导的SHH信号活化并减轻大鼠肺纤维化.
关键词： 白藜芦醇 Sonic hedgehog信号 肺纤维化 博莱霉素 成纤维细胞 -
sonic hedgehog信号参与马兜铃酸损伤肾小管上皮细胞的体外实验研究
目的 探讨马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞损伤机制及sonic hedgehog(Shh)信号在损伤过程中发挥的作用.方法 以溶剂作为对照组,AA分别以浓度1、10、100 mg/L作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,培养24、48、72 h后,水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞增殖抑制率；Hoechst 33258染色观察胞核形态变化；实时定量PCR检测膜受体patched 1(Ptch1)、信号开关蛋白smoothened (Smo)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子(TGF)β1和Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA表达；ELISA法检测Shh和TGF-β1含量；Western印迹法检测bcl-2、bax、α-SMA和E-cadherin蛋白表达.结果 WST-1结果显示,AA作用24 h可明显抑制NRK-52E细胞增殖,并呈浓度依赖性(r=0.817,P=0.047).Hoechst 33258染色发现,1、10 mg/L AA可诱导细胞凋亡,但浓度为100 mg/L时则诱导细胞坏死.10mg/L AA作用细胞24h后,bcl-2蛋白表达下调而bax蛋白表达上调,提示启动细胞凋亡机制可能是通过线粒体途径.Shh蛋白和Smo mRNA表达升高,而Ptch1 mRNA表达下降(P＜0.05),提示Shh信号活化.此外,TGF-β1、α-SMA和ColⅢ表达增加,而E-cadherin表达下降(P＜0.05),提示出现细胞转分化和胶原累积.结论 AA可明显抑制肾小管上皮细胞增殖,诱导其凋亡和坏死.在此过程中,Shh信号被活化,并诱导细胞表型转化进而出现纤维化.
关键词： 马兜铃酸 细胞增殖 纤维化 肾小管上皮细胞 Sonic hedgehog信号 -
AR42J细胞自分泌Shh信号参与雨蛙素诱导的急性胰腺炎
目的:观察Hedgehog信号在急性胰腺炎(AP)体外模型中的表达变化.方法:不同浓度的雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J,构建AP体外细胞模型,重组Shh作用于AR42J细胞.采用RT-PCR、Western-blot分别检测细胞Shh信号分子表达;ELISA检测上清Shh水平.结果:与对照组相比,雨蛙素诱导组Shh的mRNA和蛋白水平表达明显升高,细胞自分泌Shh水平也明显升高,呈雨蛙素浓度依赖性.重组Shh刺激后,Shh相关信号Shh、Gli1和Ptch1表达呈浓度依赖性地升高.结论:在雨蛙素诱导的AR42J细胞,自分泌的Shh信号参与急性胰腺炎的发病机制.
关键词： 雨蛙素 AR42J 急性胰腺炎 Sonic hedgehog信号
