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CIK细胞的表型分析及生物学活性研究
目的体外诱导培养细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其表型及生物学活性.方法从外周血分离淋巴细胞,经过IFN-γ、CD3McAb及IL-2诱导并培养,获得大量的CIK细胞.FACS测定CIK表面CD3CD56、CD3、CD54、HLA-DR、CD11a、CD28、CD86、CD80等CD分子表达情况及其百分率,3H-TdR检测其增殖能力,MTT法检测CIK对胃癌MGC 803细胞、肝癌Bel 7402细胞的杀伤活性.结果 CIK细胞高度表达CD3、CD54、CD11a,中度表达CD3CD56、HLA-DR、CD28CD54、CD28,不表达CD86、CD80,且具有较强的增殖能力及非MHC限制性杀瘤活性.结论 IFN-γ、CD3McAb及IL-2三种细胞因子体外诱导单个核细胞可获得具有高增殖活性及较强杀瘤活性的CIK细胞.
关键词： 细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK) 增殖 表型 杀伤活性 -
CIK细胞诱导及对K562细胞毒作用的研究
目的 体外诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其生物学活性.方法 从外周血分离单个核细胞(PBMC),经过细胞因子诱导、培养并扩增CIK细胞,以LAK细胞作比较,检测CIK的增殖能力,流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56,MTT法检测对K562细胞系杀伤活性.结果 CIK细胞第二周进入快速增殖期,到第21d扩增倍数超过120倍,CD3+、CD56+细胞扩增倍数达15倍以上;CIK对K562细胞的杀伤能力明显优于LAK细胞.结论 CIK细胞是一种具有很强杀瘤活性的免疫活性细胞,具有临床应用前景.
关键词： 细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK) K562细胞 表型 杀伤活性 -
CIK与DC细胞免疫治疗在血液肿瘤中的临床应用
细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)是一种新型的免疫活性细胞,它是由白细胞介素(interleukin,IL)-2、γ-干扰素(interferon,IFN)和CD3单克隆抗体等诱导而成的对多种肿瘤细胞具有杀伤活性的细胞毒性T淋巴细胞.由于该种细胞同时表达CD3和cD56两种膜蛋白分子,故又称为自然杀伤(natural killer,NK)细胞样T淋巴细胞.树突状细胞(dendritic cells,DC)是目前所知抗原递呈功能强的抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC),可有效的刺激幼稚T细胞活化和诱导特异性的抗原免疫反应,从而将先天和获得性免疫有机联系在一起,是免疫反应的始动者.本文就CIK、DC及DC-CIK细胞免疫治疗在血液肿瘤中的应用进行综述.
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DC+CIK联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效评价
生存率分别为27.0%和10.1%(P＜0.05).结论:临床研究证实了DC+CIK联合常规化疗能够延长晚期NSCLC患者的生存期,提高患者的生存率和生活质量.
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DC-CIK对K562/A多药耐药基因mdr1表达的影响
目的:体外观察树突状细胞(dendritic cell,DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine inducedkiller,CIK)对K562/A细胞株多药耐药基因mdr1表达的影响.方法:采集健康人的外周血,分离出单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),在体外加入多种细胞因子经诱导生成DC及CIK细胞,以流式细胞仪检测其表面标志,将DC细胞内加入K562/A细胞裂解物致敏后,再与CIK细胞混合培养48小时.将致敏后的DC-CIK细胞与K562/A及K562分组培养后以荧光定量PCR检测其mdr1基因表达的情况,PBMC作为对照组.结果:RT-PCR中可见K562/A+DC-CIK组中mdr1 mRNA表达较K562/A明显降低,经荧光定量PCR观察到K562/A内mdr1 mRNA表达为K562的10.27倍、K562/A/PBMC略低于未处理的K562/A (P＞0.05),K562/A/DC-CIK细胞中mdr1 mRNA含量较K562/A、K562/A/PBMC少(P＜0.05).DC-CIK细胞与细胞株混合培养后,mdr1基因表达较混合培养前明显降低.结论:实验数据显示DC-CIK可使耐药细胞株内mdr1基因表达下调.但K562与DC-CIK混合培养后该基因降低不明显,提示该基因在细胞中存在着基础表达,意义在于维持细胞内稳态.目前针对逆转白血病耐药的研究较少,需要多进行相关研究以拓宽细胞免疫治疗在逆转耐药领域的应用.DC-CIK是具有发展潜力的抗肿瘤方法.本实验将为下一阶段研究逆转耐药的机制提供依据,DC-CIK细胞免疫疗法有望成为逆转肿瘤耐药的新方法.
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自体DC、CIK细胞在急性髓细胞白血病治疗中的研究进展
树突状细胞(DC)是初级免疫应答的激发者,是有活力的抗原递呈细胞(APC),可以有效地抑制白血病细胞逃逸.未成熟DC细胞从细胞外捕获各种抗原信息,成熟DC细胞传递各种抗原信息给宿主淋巴结的T细胞,激活抗原相关的主要组织相容性复合体(MHC)限制性特异性免疫应答,另外,亦可通过影响B细胞的增殖,不同程度的活化体液免疫应答.细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是一组具有细胞毒作用的异质细胞群,是较LAK细胞溶瘤活性更强的一种免疫活性细胞,对包括白血病在内的多种恶性肿瘤具有抗肿瘤效应,具有非MHC限制性的杀瘤特点.二者联合培养及应用又增强了各自的活性.DC细胞与CIK细胞对于白血病的疗效不仅在实验室得以证实,而且已经逐步应用于临床,其在清除微小残留病以及预防造血干细胞移植后复发中取得了良好的效果.随着细胞制备技术的完善和研究的进一步深入,自体DC、CIK细胞治疗急性髓细胞白血病逐渐获得众多专家的认可.中国卫生部已经把自体免疫细胞治疗技术做为第三类医疗技术应用于临床,批准号200984.本文就目前DC、CIK、DC-CIK细胞免疫疗法在急性髓细胞白血病中的应用进展加以综述.
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细胞因子诱导的杀伤细胞治疗恶性黑素瘤临床疗效的初步分析
目的:初步评价细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)在恶性黑素瘤治疗中的效果.方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2005年1月至2010年12月术后接受CIK治疗的38例恶性黑素瘤患者作为CIK治疗组,按1∶3比例选取同期术后未接受CIK治疗的114例恶性黑素瘤患者作为对照组,两组配对因素包括临床分期、性别、年龄、有无溃疡、乳酸脱氢酶(lactate dehyolrogenase,LDH)活性、病理类型、KPS评分(Karnofsky performance status scale)等均衡一致.随访时间为2005年3月至2012年3月,临床疗效的观察终点为总生存(overall survival,OS)期.结果:CIK治疗组与对照组1年OS率分别为86.8％、74.6％ (P=0.097),3年OS率分别为76.3％、46.5％(P=0.001),5年OS率分别为71.1％、43.9％(P=0.004);CIK治疗组中位生存期明显长于对照组(CIK治疗组中位生存期未达到观察终点,对照组中位生存期为20.1个月,P =0.004).单因素和多因素分析显示,病理类型、LDH水平是影响CIK治疗恶性黑素瘤患者疗效的独立影响因素；CIK免疫治疗的疗程数可能与黑素瘤患者OS相关,CIK疗程＞8次具有延长黑素瘤患者OS期的趋势.结论:CIK免疫治疗能改善恶性黑素瘤患者的OS期,增加CIK疗程数可能提高其疗效.
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细胞因子诱导的杀伤细胞治疗肾细胞癌临床疗效的评价
目的:评价细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)免疫治疗在肾细胞癌治疗中的效果.方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2000年1月至2010年7月接受CIK治疗的119例肾细胞癌患者作为治疗组,IL-2联合IFN治疗的119例肾细胞癌患者作为对照组.119对患者确诊时临床分期为:Ⅰ期21对,Ⅱ期21对,Ⅲ期49对,Ⅳ期28对.配对因素包括临床分期、性别、年龄、中性粒细胞计数、血小板、血红蛋白、乳酸脱氢酶、β2-微球蛋白、KPS评分等,两组配对因素均衡一致.随访时间为2001年1月至2011年4月,临床疗效的观察终点为无进展生存(progression-free survival,PFS)和总生存(overall survival,OS).结果:治疗组与对照组5年PFS率分别为44%、42% (P =0.056),5年OS率分别为72%、51% (P ＜0.01).两组患者中位PFS时间分别为54和43个月(P=0.088),中位OS时间分别为134和60个月(P＜0.01).两组中Ⅰ+Ⅱ期患者的PFS、OS差异无统计学意义;Ⅲ+Ⅳ期患者中,治疗组5年PFS、OS率明显高于对照组(26%vs18%,P＜0.01;58%vs 31%,P＜0.01),且中位PFS、OS时间明显长于对照组(36个月vs 13个月,P＜0.01;68个月vs 33个月,P＜0.01).多因素分析显示,CIK治疗的疗程数与患者PFS( HR =0.95,95% CI:0.92～0.99,P＜0.05)和OS(HR =0.79,95% CI:0.71 ～0.87,P＜0.001)相关,佳CIK治疗的疗程数为7次以上.结论:CIK免疫疗程可以显著改善Ⅲ、Ⅳ期肾细胞癌患者预后,增加CIK治疗疗程数可以提高疗效.
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抗原负载的树突细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞的影响
目的:研究树突细胞(DC)负载不同形式的抗原对其成熟和功能的影响,及DC对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)增殖和功能的影响. 方法:外周血单个核细胞(PBMC)经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,将Bel 7402细胞制备成肿瘤细胞冻融物、坏死肿瘤细胞及正常生长的肿瘤细胞,并作为不同状态的肿瘤抗原刺激DC,以流式细胞仪检测DC表面分子的表达.应用MTT法检测肿瘤抗原负载的DC刺激的CIK对肿瘤细胞的杀伤力. 结果:负载肿瘤细胞冻融物的DC其表面CD1a、CD80、CD83、HLA-DR高表达,促进CIK增殖和杀伤力的功能强;与正常肿瘤细胞共培养的DC细胞成熟程度受到抑制;负载Bel 7402抗原的DC刺激的CIK对Bel 7402有较强杀伤力,而对HerpG2杀伤力弱. 结论:肿瘤细胞冻融物预刺激的DC成熟程度高,诱导抗原特异性CIK细胞的功能强,为临床DC瘤苗和CIK的应用提供了实验依据.
关键词： 树突细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK) 肿瘤抗原 -
CIK细胞的诱导及其对肝癌细胞毒作用的体外研究
目的体外诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其生物学活性.方法从外周血和脐血分离单个核细胞(PBMC),经过细胞因子诱导、培养并扩增CIK细胞,以LAK作比较,流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56.3H-TdR释放法检测CIK的增殖能力,MTT法检测对肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402,正常胎肝细胞L-02的杀伤活性.结果 CIK细胞第二周进入快速增殖期,到第31d扩增倍数超过60倍,CD3+CD56+细胞扩增倍数达800倍以上;CIK对肝癌细胞的杀伤能力明显优于LAK细胞(65%～81%);对正常胎肝细胞的细胞毒作用(＜5%).结论 CIK细胞是一种具有很强杀瘤活性的免疫活性细胞,具有临床应用前景.
关键词： 细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK) 肝癌细胞 表型 杀伤活性 -
C57BL/6小鼠CIK细胞体外培养及表型分析
目的 体外诱导培养C57BL/6小鼠细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其表型.方法 从脾组织中分离淋巴细胞,经过IFN-γ,CD3单抗,IL-1α及IL-2诱导并培养,获得大量的CIK细胞,FACS测定CIK表面CD3,CD4,CD8和NK1.1等CD分子表达情况及其百分率.结果 经IFN-γ,CD3单抗,IL-1α和IL-2四种细胞因子诱导后,于第4天FACS测定CD3阳性细胞＞90％,CD8阳性细胞＞30％,NK1.1阳性细胞＞15％,于细胞因子诱导后第7天收获CIK细胞后FACS测定CD3阳性细胞＞87％,CD8阳性细胞＞20％和NK1.1阳性细胞＞10％.结论 CIK细胞培养成功.
关键词： 单核细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK) 表型
