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卵巢癌组织和血清中RASSF1A基因甲基化的检测及临床意义
目的 检测卵巢肿瘤组织和血清中Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)基因启动子区异常甲基化,并探讨其与卵巢癌的关系.方法 收集新鲜的卵巢癌组织及其对应的血清标本67例,采用半巢式甲基化特异性PCR技术分别检测肿瘤组织DNA和血清游离DNA中RASSF1A基因启动子异常甲基化情况.结果 卵巢癌患者血清和癌组织中RASSF1A基因甲基化的检出率分别为28.4%和40.3%.卵巢良性肿瘤组织和血清以及健康志愿者血清中均未发生RASSF1A基因甲基化.癌组织中RASSF1A基因的甲基化状况与血清中出现RASSF1A基因甲基化关系密切(P《0.01);卵巢癌患者血清和癌组织中RASSF1A基因的甲基化改变与肿瘤的临床分期、细胞分化程度、组织学类型无明显相关性(P》0.05); 与淋巴结转移密切相关(P《0.01).结论 检测血清DNA的RASSF1A基因异常甲基化有可能成为辅助卵巢癌诊断的有效方法之一.
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RASSF1A基因在子宫内膜癌组织中的表达及意义
目的:探讨RASSF1A(RAS相关区域家族1A)基因转录表达与子宫内膜癌发生、发展的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)方法检测50例子宫内膜癌组织及20例正常子宫内膜组织中RASSF1A mRNA的表达水平.结果:①RASSF1A mRNA在所有正常子宫内膜组织中表达,而在子宫内膜癌组织中存在较高的表达缺失率(54%);②RASSF1A mRNA的表达缺失与子宫内膜癌手术病理分期、淋巴结转移、肌层浸润及病理组织学类型有明显相关性(P＜0.05);RASSF1A mRNA表达缺失与年龄和病理分级未见明显相关(P＞0.05).结论:RASSF1A转录表达缺失可能参与调控子宫内膜癌的发生、发展过程,并进而影响其生物学特点及预后.
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肝细胞癌患者癌组织中RASSF1A和WIF-1基因甲基化的临床意义
目的 观察肝细胞癌患者癌组织中RASSF1A基因甲基化状态的临床意义,阐明WIF-1基因甲基化在肝细胞癌发生发展中的作用.方法 97例肝细胞癌患者手术切除癌组织蜡块标本为肝细胞癌组,随机留取26例手术切除肝细胞癌旁肝硬化组织蜡块标本为肝硬化组.两组标本经蜡块组织DNA提取、亚硫酸盐甲基化修饰,并采用甲基化特异性PCR法对抑癌基因RASSF1A和WIF-1进行目的片段的扩增,扩增产物通过电泳凝胶成像系统进行甲基化结果分析判定；根据患者术前实验室检测是否感染HBsAg,将肝细胞癌组细分为HBsAg阳性组及HBsAg阴性组,分析抑癌基因RASSF1A和WIF-1甲基化的意义.结果 RASSF1A基因甲基化率肝细胞癌组(67.01％)高于肝硬化组(42.31％),差异有统计学意义(P=0.021)；WIF-1基因甲基化率肝细胞癌组(46.39％)高于肝硬化组(7.69％),差异有统计学意义(P＜0.05)；肝细胞癌组中抑癌基因RASSF1A和WIF-1基因甲基化表达均阳性为35.05％,肝硬化组为7.69％,差异有统计学意义(P=0.006).HBsAg阳性肝细胞癌组RASSF1A基因的甲基化阳性率(72.84％)高于HBsAg阴性组(23.08％),差异有统计学意义(P=0.001)；WIF-1基因在HBsAg阳性(44.44％)和阴性肝细胞癌组(53.84％)差异无统计学意义(P =0.528).肝细胞癌患者RASSF1A和WIF-1基因的甲基化状态与生存率比较差异无统计学意义(P=0.735,P=0.229).结论 肝细胞癌患者癌组织较肝硬化组织RASSF1A,WIF-1基因甲基化率高,提示抑癌基因RASSF1A和WIF-1的甲基化在肝细胞癌的发生中起到一定作用.
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骨髓增生异常综合征患者RASSF1A基因启动子区甲基化及基因表达的缺失
目的 检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓RASSF1A基因的表达水平及其启动子区甲基化状态,探讨RASSF1A基因异常甲基化在MDS发生发展中的作用,为去甲基化药物治疗MDS提供新靶点.方法 选取30例MDS患者为实验组,非恶性血液病患者15例为对照组,按MDS国际IPSS评分标准对实验组进行分组.应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS PCR)、逆转录PCR(RTPCR)法检测两组患者骨髓RASSF1A基因mRNA表达水平及启动子区甲基化状态,对比地西他滨治疗前后的MDS患者RASSF1A基因的甲基化情况.结果 实验组RASSF1A基因甲基化率(73.33％)明显高于对照组(P＜0.05),且中高危MDS患者骨髓RASSF1A基因甲基化率(81.8％)明显高于低危MDS患者(18.2％)(P＜0.05)；实验组RASSF1A基因mRNA表达水平明显低于对照组(P＜0.05)；经地西他滨治疗后,MDS患者RASSF1A基因的甲基化程度较初诊时降低.结论 MDS患者骨髓RASSF1A基因的异常甲基化与该基因的表达失活紧密相关,可能是MDS发生发展的机制之一；地西他滨能够逆转RASSF1A基因的甲基化,为地西他滨治疗MDS提供新的理论依据.
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RASSF1A基因甲基化在乳癌中的研究进展
随着人们对肿瘤的深入研究,发现多数实体肿瘤存在 3 号染色体短臂(3p)缺失,提示 3p 区域所含的基因对肿瘤发生发展起着重要作用,可能隐含肿瘤抑制基因.因此,人们从染色体3p上发现了BLU、FUS1、RASSF1A等抑癌基因.现将RASSF1A甲基化在乳癌中的研究进展综述如下.1 RASSF1A及其相关基因的介绍
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广西肺鳞状细胞癌RASSF1A及RPRM基因甲基化分析
目的 研究RASSF1A及RPRM甲基化在广西肺鳞状细胞癌患者中的发生频率.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测30例临床上经病理确诊为肺鳞状细胞癌患者(肺癌组)和20例良性肺部疾病患者(对照组)RASSF1A及RPRM甲基化的状态,建立广西肺鳞状细胞癌相关基因的甲基化谱式.结果 肺癌组RASSF1A及RPRM甲基化率分别为83.3% (25/30)和70.0% (21/30),对照组分别为0和10%(2/20),P均<0.01.结论 RASSF1A及RPRM基因DNA甲基化状态的检测有助于准确诊断肺鳞状细胞癌.
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RASSF1A基因对膀胱癌细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响
目的 探讨RASSF1A基因表达对人膀胱癌细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响.方法 采用脂质体介导的基因转染法建立野生型和突变型RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染膀胱癌BIU87细胞株,细胞株分为空白对照组(A组)、空载组(B组)、转染突变型RASSF1A组(C组)与转染野生型RASSF1A组(D组),B,C,D组采用化疗药物丝裂霉素作用于细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖程度,原位凋亡细胞检测技术检测膀胱癌BIU87细胞凋亡.Western blot测定Caspase-3蛋白的表达水平.结果 成功建立稳定表达野生型和突变型RASSF1A基因的膀胱癌细胞株;加入丝裂霉素前、后D组细胞增殖比、凋亡指数及Caspase-3蛋白表达水平与A,B组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),C组与A,B组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 野生型RASSF1A的重表达可促进膀胱癌BIU87细胞凋亡,提高膀胱癌细胞对丝裂霉素的敏感性.
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非小细胞肺癌患者血清RASSF1A和Survivin基因启动子异常甲基化检测及其临床意义
目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清RASSF1A和Survivn基因启动子区域的甲基化情况及其临床意义,为非小细胞肺癌的早期诊断提供科学依据.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测了60例NSCLC患者、30例肺良性病变患者及30例健康对照者血清RASSF1A和Survivin基因启动子区域的甲基化状况,并分析其与临床病理参数之间的相关性.结果:NSCLC患者血清RASSF1A和Survivin基因启动子区域的甲基化检出率较肺良性病变患者及健康对照者明显提高(P＜0.01)；RASSF1A启动子甲基化的阳性状态与肿瘤组织分化程度存在差别(P＜0.05),而与年龄、性别、转移情况、Dukes分期无关；Survivin启动子甲基化与NSCLC患者的转移情况、肿瘤组织分化程度有关(P＜0.05),与年龄、性别和Dukes分期无关.结论:血清RASSF1A和Survivn基因启动子区域的甲基化状态对NSCLC患者有较好的临床诊断价值,有望成为非小细胞肺癌早期诊断及高风险人群筛查诊断的新方法.
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肺癌患者RASSF1A和FHIT基因启动子区甲基化检测
目的:探讨外周血RASSF1A 和FHIT基因启动子区甲基化与肺癌发生发展的关系.方法:应用实时荧光定量甲基化特异PCR(qMSP)方法检测200例肺癌患者和200例健康对照人群外周血RASSF1A和FHIT基因启动子区的甲基化率,分析其在2组人群中甲基化水平的差异,并分析年龄、性别、吸烟史、组织学类型及临床分期对基因启动子区甲基化率的影响.结果:2组外周血RASSF1A和FHIT基因启动子区甲基化率的差异有统计学意义(RASSF1A:Z=2.075,P=0.038;FHIT:Z=3.044,P=0.002).肺癌患者的性别、年龄和吸烟史、组织学类型及临床分期与RASSF1A和FHIT基因启动子区甲基化无关.随着RASSF1A和FHIT基因启动子区甲基化水平增加,患肺癌的危险性增加[RASSF1A:β=0.235,OR(95%CI)=1.551(1.023~2.353);FHIT:β=0.091,OR(95%CI)=1.763(1.116~2.671)].结论:RASSF1A和FHIT基因启动子区的甲基化与肺癌有关,检测外周血中RASSF1A和FHIT基因启动子区甲基化水平可能有助于肺癌的早期预警.
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非小细胞肺癌组织中RASSF1 A蛋白的表达
目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中RASSF1A蛋白的表达.方法:采用Western Blot检测96例NSCLC患者癌组织及相应的癌旁正常肺组织中RASSF1A蛋白的表达.结果:①在NSCLC组织中,RASSF1A失表达或低表达率达60.4%(58/96),而相应的癌旁正常肺组织均正常表达,2者比较,差异有统计学意义(P<0.05).②RASSF1A表达下调或缺失与肿瘤的病理分期和淋巴结转移有关(P<0.05),但与患者的性别、年龄、是否吸烟,肿瘤的组织学类型及分化程度无关(P>0.05).结论:RASSF1A在中国人NSCLC组织中有较高比例的表达下调或缺失,该蛋白低表达或阴性表达可能促进NSCLC的发生、发展及淋巴结转移.
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替米沙坦对大鼠心肌肥厚组织中RASSF1A表达的影响
目的:观察替米沙坦对心肌肥厚大鼠左室心肌组织中RASSF1A表达的影响.方法:SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和干预组.模型组和干预组给予异丙肾上腺素3 mg/(kg·d)皮下注射,干预组在建模同时灌胃替米沙坦8.33 mg/(kg·d).10 d后,进行血流动力学和心肌肥厚指数测定;取大鼠左心室心肌组织,分别采用RT-PCR和免疫组化法检测RASSF1A mRNA 和蛋白的表达,同时观察病理学变化.结果:血流动力学、心室肥厚指数及病理观察结果提示,模型组大鼠发生心肌肥厚,干预组上述变化较模型组减轻.3组大鼠心肌组织中RASSF1A mRNA和蛋白的表达差异均有统计学意义(F=38.968,284.445,P<0.001).与对照组相比,模型组、干预组RASSF1A mRNA和蛋白的表达降低(P<0.05);与模型组相比,干预组RASSF1A mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05).结论:替米沙坦可通过调节RASSF1A的表达抑制心肌肥厚的发生.
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食管鳞状细胞癌组织中RASSF1A蛋白的表达
目的：检测RASSF1A蛋自在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达情况。方法：采用免疫组化法检测ESCC组织(n=245)和正常食管黏膜组织(n=201)的组织芯片中RASSF1A蛋白的表达情况，并探讨其与ESCC患者年龄、性别、肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移、TNM分期、大体分型和5 a生存率的关系。结果：ESCC组织中RASSF1A蛋白阳性表达率低于正常食管黏膜组织中的阳性表达率(46.9％vs73.1％；x2=31.263，P＜0.001);RASSF1A蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期有关(X2=11.498和7.912，P均＜0.05)，而与年龄、性别、肿瘤细胞分化程度和大体分型无关(P均＞0.05)；RASSF1A蛋白阴性表达的ESCC患者5 a生存率低于阳性表达者。结论：RASSF1A阴性表达可能与ESCC的发生发展和预后有关。
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食管癌组织Ras相关区域家族1A基因启动子区甲基化检测
目的:检测食管癌和癌旁正常组织Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化变化.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测79例食管鳞癌患者癌组织及对应的20例癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区甲基化,并观察食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化与临床病理变化的关系.结果:79例食管鳞癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率(67%,53/79)明显高于癌旁正常组织(15%,3/20).食管癌组织中不同年龄、分化程度的RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),而淋巴结转移与否、肿瘤分期间甲基化阳性率差异无统计学意义.20例同一个体癌组织甲基化阳性率明显高于癌旁正常组织(50%(10/20)vs 15%(3/20))(P＜0.05),仅3例同时出现甲基化,一致率为15%.结论:RASSF1A基因启动子区甲基化是食管鳞癌频发的分子事件.食管鳞癌组织RASSF1A基因甲基化明显高于癌旁正常组织,并且和年龄、分化程度有关.
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基于3种基因启动子甲基化联合端粒长度构建肺癌诊断支持向量机模型?
目的：：探讨基于外周血白细胞 DNA FHIT、RASSF1A 和 p16基因启动子甲基化水平以及 DNA 端粒长度等4项生物标志建立的支持向量机模型在肺癌诊断中的意义。方法：通过实时定量甲基化特异性 PCR 法,测定200例正常人(对照组)和200例肺癌患者外周血白细胞 DNA 中 FHIT、RASSF1A 和 p16基因启动子甲基化水平,实时荧光定量 PCR 方法测定外周血 DNA 相对端粒长度,基于上述4种生物标志构建肺癌诊断支持向量机模型。结果：肺癌组和对照组中 FHIT、RASSF1A 和 p16基因启动子甲基化水平分别为3.33(1.86~6.40)和2.85(1.39~5.44),27.62(9.09~52.86)和17.17(3.86~50.87),0.59(0.16~4.50)和0.36(0.06~4.00),端粒长度分别为(0.93±0.32) kb 和(1.16±0.57) kb,两组间差异有统计学意义(Z =3.044、2.075、2.641和4.972,P 均<0.05)。基于上述4项生物标志建立的判别分析和支持向量机模型对预测集的 ROC 曲线下面积及95% CI 分别为0.670(0.569~0.761)和0.810(0.719~0.882)。结论：成功构建基于 p16、RASSF1A、FHIT 基因启动子甲基化和端粒长度的肺癌诊断支持向量机模型。
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血浆RASSF1A甲基化检测及其在非小细胞肺癌诊断中的意义
目的:分析非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血浆游离DNA和相应的肿瘤组织中RASSF1A启动子甲基化情况,探讨检测血浆中该基因异常甲基化在NSCLC诊断中的意义.方法:应用半巢式MSP法分析了96例NSCLC、12例肺良性病变患者及20例健康人血浆游离DNA,MSP法分析了96例NSCLC患者对应的肿瘤组织DNA,检测RASSF1A的异常甲基化改变.结果:①血浆及相应的肿瘤组织RASSF1A异常甲基化检出率分别为43.75%和48.96%,血浆中该基因甲基化仅发生在相应的肿瘤组织甲基化阳性的NSCLC患者.②血浆RASSF1A异常甲基化只与肿瘤的组织学类型有关,鳞癌组(57.14%)高于腺癌组(33.33%,P＜0.05).但与患者的年龄、性别、是否吸烟,肿瘤的TNM分期、分化程度和有无淋巴结转移无关(P＞0.05).③检测RASSF1A异常甲基化用于诊断NSCLC的敏感性43.75%,特异性100%,阴性预测值41.30%,阳性预测值100%.结论:RASSF1A异常甲基化很可能是NSCLC发生过程中的早期分子事件,检测血浆游离DNA中该基因异常甲基化可能成为NSCLC早期诊断的有效方法之一.
关键词： RASSF1A 半巢式甲基化特异性PCR 非小细胞肺癌 DNA甲基化 -
RASSF1A基因表达对人肝癌细胞株QGY-7703生长的影响
目的 观察RASSF1A基因的表达对人肝癌细胞株QGY-7703在体内外生长的影响.方法 利用已构建成功的稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株QGY-7703,通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、细胞周期的测定和裸鼠致瘤性试验对各稳定表达株的生物学行为进行检测.结果 以未转染的QGY-7703为对照,RASSF1A基因的表达可明显抑制肝癌细胞在体外的生长速度,使肝癌细胞周期阻滞在G1/S期,显著降低肝癌细胞在软琼脂中形成的克隆数目(P＜0.01)和大小,显著减慢裸鼠皮下瘤的生长速度和重量(P＜0.01).空载体的表达对肝癌细胞的生长影响不明显.结论 RASSF1A的重表达抑制肝癌细胞在体内外的生长;RASSF1A基因是一个新的肝癌相关的抑癌基因.
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RASSF1A基因在肝癌组织中的表达及其临床意义
目的 观察人肝癌组织RASSF1A的表达情况.方法 应用半定量反转录聚合酶联反应技术检测62例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中RASSF1A的表达情况.结果 69.4%(43/62)的肝癌组织中RASSF1A表达缺失,而癌旁组织中仅30.6%(19/62)该基因表达缺失,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 中晚期肝癌中RASSF1A表达处于失活状态,其可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现、早期诊断以及预后的判断.
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NORE1B、RASSF1A mRNA在肝细胞癌中的表达及其相关性
目的 探讨肝细胞癌(HCC)组织中NORE1B、RASSF1A的转录表达及其临床意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析41例HCC及对应癌旁组织中NORE1B、RASSF1AmRNA的表达情况,以及与临床病理特征的关系,并探讨两者表达的相关性.结果 NORE1B mR-NA在HCC中的缺失率为63.4%,癌旁组织中为34.1%(P<0.01).RASSF1A mRNA在HCC中的缺失率为75.6%,癌旁组织中为39.0%(P<0.05).两者的差异表达与乙肝、肝硬化以及Edmondson分级均存在相关性(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小、术前肝功能Child-Push分级和血清AFP检测值均无显著相关.NORE1B与RASSF1A mRNA在HCC中的表达呈正相关性(P<0.05).结论 NOBE1B与RASSF1A在HCC的发生发展中可能存在协同作用.
关键词： 癌 肝细胞 NORE1B RASSF1A 逆转录-聚合酶链反应 -
RASSF1A基因对肝癌细胞化疗药物敏感性的影响
目的 探讨RASSF1A基因的表达对肝细胞肝癌化疗药物敏感性的影响.方法 利用已构建成功的稳定表达野生型和突变型RASSF1A基因的肝癌细胞株QGY-7703,化疗药物Mitomycin、Adria-mycin、Etoposide、5-Fluorouracilur、Cisplatin分别作用各细胞株后,比较生长抑制率、细胞周期及P53、P21、Bax、Caspase-3蛋白的表达水平.结果 野生型RASSF1A的表达可提高Mitomycin诱导的肝癌细胞生长抑制率、凋亡发生率(P<0.05)和Caspase-3的活性,对P53、P21、BaX基因的蛋白表达水平没有影响.结论 野生型RASSF1A基因可提高肝癌细胞对Mitomycin的敏感性.
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RASSF1A和p16转录本在非小细胞肺癌中的表达及启动子区甲基化
目的 研究RASSF1A和p16基因在国人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的转录及启动子区甲基化情况,探讨其转录失活的机制,为NSCLC的诊断和治疗寻找新的途径.方法 应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR法分析96例NSCLC及远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因mRNA的表达和启动子区甲基化情况.结果 (1)53.12%(51/96)的NSCLC中RASSF1A表达明显下调或缺失;36.46%0(35/96)的p16表达下调或缺失,而远癌正常肺组织均表达良好.(2)96例NSCLC中RASSF1A甲基化率48.96%(47/96),该基因表达明显下调或缺失的51例中39例(76.5%)出现甲基化,表达正常的45例中8例(17.8%)出现甲基化,两组对比差异有统计学意义(P＜0.05);96例NSCLC中33例(34.38%)检测到p16启动子区甲基化,p16基因表达明显下调的35例中20例(57.1%)出现该基因CPG岛的甲基化,而表达正常的61例中13例(21.3%)出现甲基化,两组比较差异显著(P＜0.05).96例远癌正常肺组织均未检测到此两基因启动子有甲基化.结论 RASSF1A和p16基因mRNA在国人NSCLC中较高比例的表达下调或缺失;甲基化可能是两基因表达失活的主要原因.
