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结直肠癌RASSF1A蛋白表达与细胞凋亡的关系
目的 探讨结直肠癌RASSF1A蛋白表达的临床病理学意义和细胞凋亡的关系.方法 收集50例结直肠癌、20例结直肠腺瘤、20例正常结直肠黏膜组织,采用免疫组化检测RASSF1A蛋白的表达;原位末端标记法(TUNEL)检测结直肠癌细胞凋亡指数.结果 RASSF1A蛋白阳性率结直肠癌组织显著低于腺瘤组织及正常黏膜组织(P＜0.05);RASSF1A蛋白表达与肿瘤Duke′s分期和淋巴结转移有关(P＜0.05);与性别、年龄、组织学分型及分化程度等无关(P＞0.05);结直肠癌RASSF1A蛋白阳性者的细胞凋亡指数显著高于阴性者(P＜0.01).结论 RASSF1A蛋白表达缺失可能通过影响肿瘤细胞凋亡,促进结直肠癌的发生发展.
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RASSF1A与Elf-1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
目的 利用组织芯片技术结合免疫组化方法探讨RASSF1A和Elf-1基因在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的蛋白表达及与临床病理学特征的关系.方法 构建含有72例非小细胞肺癌及10例正常肺组织标本的组织芯片,以免疫组织化学PowerVision TM-900(PV-9000)法检测RASSF1A和Elf-1在NSCLC与正常肺组织中的蛋白表达.结果 RASSF1A 和Elf-1在肺癌组织中均呈异质性表达.RASSF1 A在NSCLC组织中的阳性率为47.22%(34/72),显著低于正常肺组织100%(10/10),两组间的蛋白表达差异具有统计学意义(P=0.002);RASSF1A在有淋巴结转移组的表达强度显著低于无淋巴结转移组(χ2=4.379,P=0.036);RASSF1A的表达在不同的临床分期间差异有统计学意义(χ2=17.979,P=0.000).Elf-1在NSCLC及正常肺组织中的阳性表达率分别为73.61%(53/72)及20.00%(2/10),两组间的表达差异具有统计学意义(P=0.001),其表达强度与NSCLC的分化程度有关(χ2=7.116,P=0.028);有淋巴结转移组Elf-1的表达强度高于无淋巴结转移组(χ2=5.304,P=0.021);Elf-1的表达在不同的临床分期间亦有差异(χ2=6.791,P=0.034).NSCLC组织中RASSF1A和Elf-1蛋白的表达强度呈负相关(r=-0.433,P=0.000).结论 在NSCLC组织中RASSF1A表达下调和Elf-1过度表达可能与NSCLC的发生、发展及预后不良有关,RASSF1A及Elf-1基因表达的检测有望作为NSCLC早期诊断、评估其侵袭性及转移性的重要参考指标.
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结直肠癌RASSF1A与cyclin D1蛋白的表达及意义
[目的]研究RASSF1A和cyclin D1蛋白在结直肠癌组织中的表达及相关性.[方法]收集结直肠癌标本50例,腺瘤标本20例,正常黏膜标本20例,采用免疫组化检测RASSF1A和cyclin D1蛋白的表达.[结果]①RASSF1A蛋白阳性率:结直肠癌组显著低于腺瘤及正常黏膜组(P ＜0.05或P＜0.01)；RASSF1A蛋白表达与肿瘤Duke's分期和淋巴结转移有关(P＜0.05),与患者性别、年龄、肿瘤部位、组织学分型和分化程度等无关(P＞0.05)；②cyclin D1蛋白阳性率:结直肠癌组显著高于腺瘤及正常黏膜组(P ＜0.05)；cyclin D1蛋白表达与肿瘤分级、Duke's分期及淋巴结转移有关(P＜0.05),与性别、年龄、肿瘤部位及组织学分型等无关(P＞0.05)；③结直肠癌RASSF1A与cyclin D1蛋白表达呈显著负相关(r=-0.313,P＜0.05).[结论]RASSF1A及cyclin D1蛋白在结直肠癌的异常表达,对肿瘤发生发展起到重要作用.
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RASSF1基因与肿瘤的关系
RASSF1基因位于染色体3p21.3,其转录本RASSF1A已被确认为一种候选肿瘤抑制基因,在多种实体肿瘤中表达异常,参与细胞周期和细胞凋亡的调控,并抑制细胞生长,但作用机理尚未阐明.
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原发性肝癌组织芯片中RASSF1A的表达及临床意义
[目的]探讨RAS相关区域家族IA(RASSF1A)蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)组织芯片中的表达及其临床意义.[方法]98例HCC,89例非癌肝组织及24例癌旁肝组织构建组织微阵列.应用免疫组化技术检测RASSF1A蛋白的表达水平,并分析其与HCC临床病理特征的关系.[结果](1)组织微阵列利用率为97.16%(205/211);(2)RASSF1A蛋白明确定位于肝细胞胞浆内;(3)HCC组织中的RASSF1A蛋白的阳性率为39.58%(38/96).明显低于非癌组织组57.65%(49/85,P=0.015)及癌旁肝组织组66.67%(16/24,P=0.017);(4)HCC中临床TNM分期Ⅰ,Ⅱ期RASSF1A阳性率为57.38%(35/61),明显高于Ⅲ,Ⅳ期8.57%(3/35,P=0.000);(5)HCC中无转移组RASSF1A阳性率为63.64%(28/44),明显高于转移组4.88%(2/41,P=0.000);(6)RASSF1A蛋白表达在＜50岁组(16/54,29.63%),AFP≥400 μg/L组(14/55,25.45%),有门脉癌栓组(3/31,6.98%),包膜浸润组(16/64,25%)及多个结节组(5/31,16.13%)明显低于≥50岁组(22/42,52.38%,P=0.024),AFP＜400 μg/L(24/41,58.54%,P=0.002),无门脉癌栓组(35/65,53.85%,P=0.000),无包膜浸润组(22/32,68.75%,P=0.000)及单个结节组(33/65,50.77%,P=0.000),与性别、有无肝硬化、HCC分化程度及肿瘤大小无关(P＞0.05).[结论]应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的,具有快速、方便、经济、准确的特点.RASSF1A表达缺失在HCC的发生发展中起重要作用;检测RASSF1A蛋白指标有助于HCC诊断和判断患者预后.
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新疆乳腺癌患者RASSF1A基因甲基化的分析
目的 探讨RASSF1A基因在乳腺癌患者血浆中的异常甲基化情况.方法 按照1∶1配比的病例对照研究,采用聚合酶链式反应(PCR)对72例乳腺癌患者和72例健康者外周血中的抑癌基因RASSF1A进行扩增,并进行焦磷酸测序,检测该基因的甲基化情况.结果 经单因素分析,RASSF1A基因PM00104139CpG-2,CpG-5的甲基化程度差异有统计学意义(P＜0.05).根据雌激素受体(ER)阴性阳性分组,PM00104139CpG-3的甲基化程度差异有统计学意义;而RASSF1A各甲基位点与孕激素(PR)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)阴性阳性分组以及病理组织分级差异无统计学意义.结论 新疆乳腺癌患者RASSF1A基因位点2和3可能是乳腺癌的易感基因位点,对早期乳腺癌的检测可能有意义.
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基于RASSF1A为标志的无损性孕妇血浆中胎儿RHD-DNA检测方法的建立
目的 建立基于表观遗传标志RASSF1A为标志的孕妇外周血浆中胎儿RHD-DNA检测路径,用于无损性产前胎儿RhD血型预测.方法 首先采用PCR-SSP对孕妇外周血细胞基因组DNA做RHD基因多个外显子检测,以确定其RHD基因型;其次对无外显子表达或部分外显子表达的孕妇,对其外周血浆中胎儿游离的DNA采用RT-PCR扩增其RHD基因exon7与10,同时扩增SRY基因;另对exon 7、10和SRY都为阴性的标本检测甲基化RASSF1A基因作为胎儿DNA存在的标志.待胎儿分娩后,将基因检测结果与婴儿血清学检测结果比对,以评价该方法的准确性.结果 57位受检孕妇中,含RHD全部外显子者有17人;3人含exon1和10,为RHD1-CE(2-9)-D10杂化基因;37人不含外显子.后两者40名孕妇中,22人检测出SRY基因,出生胎儿均为男性;另有2人为假阴性结果.39人检测出exon 7和10,其中38人基因型结果与胎儿出生后血清学结果相符,1例假阳性结果;1人未检测到SRY、exon 7和10的标本,检测到RASSF1A证明胎儿DNA存在,且胎儿出生后证实为RhD阴性女婴.结论 建立了基于RASSFIA为标志的、符合中国人RHD基因特点的RhD阴性孕妇血浆游离DNA中胎儿RHD基因的检测程序,可用于临床无损性产前胎儿RhD血型预测.
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RASSF1A在大肠肿瘤中的表达及意义
目的 研究肿瘤抑制基因RASSF1A(RAS相关区域家族1A)在大肠肿瘤中表达及与肿瘤的病理类型、转移、患者预后的关系,探讨其在大肠癌发生及进展中的作用.方法 采用免疫组化(SABC)法对45例大肠癌、33例散发性大肠腺瘤、22例正常肠黏膜中RASSF1A蛋白的表达进行检测.结果正常肠黏膜上皮中90.9%显示阳性或强阳性,大肠癌中11.1%呈强阳性,37.8%呈阳性,37.8%呈弱阳性,13.3%呈阴性,与正常肠黏膜相比,RASSF1A蛋白表达有显著减少.经半定量分析,正常肠黏膜中RASSF1A蛋白表达均呈阳性,积分范围在1～12分,平均8.18分;大肠癌中RAsSF1A蛋白表达明显减弱或缺失,积分范围在0～12分,平均4.04分,与正常肠黏膜相比,RASSF1A蛋白的表达有显著减少.大肠癌中RASSF1A蛋白的表达与Dukes分期、淋巴结转移无明显相关.结论 RASSF1A蛋白在正常肠黏膜中的表达均呈阳性,而在大肠癌中的表达有显著减少,散发性大肠腺瘤中RASSF1A蛋白的表达有所减少,提示RASSF1A功能的缺失促进了大肠癌的发生发展,在腺瘤～癌序列中RASSF1A基因启动子甲基化出现了一个渐进积累、由量变到质变的过程.大肠癌中RASSF1A蛋白的表达与Dukes分期、淋巴结转移无明显相关.
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RASSF1A和TIP30在大肠癌中的表达及临床意义
目的 探讨RASSF1A和TIP30在大肠癌的发生、恶性转化、侵袭和转移的作用和临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测大肠正常组织、大肠癌组织和大肠癌旁组织中RASSF1A和TIP30蛋白表达.综合分析它们与患者的年龄、性别、分化程度、淋巴结转移等临床病理因素相关性.采用Spearman等级相关分析RASSF1A和TIP30的相关性.结果 在大肠正常组织、癌旁组织和癌组织中RASSF1A阳性率分别为90％、72％、16％,TIP30阳性率分别是95％、70％、13％,在大肠癌中RASSF1A和TIP30的表达与淋巴结转移、浸润深度、分化程度有关(P＜ 0.05). Spearman等级相关分析RASSF1A和TIP30的表达呈正相关(rs=0.292,P＜0.05).结论 RASSF1A和TIP30与大肠癌的发生、恶性转化、侵袭和转移的作用有关,可能作为大肠癌的早期诊断和预后判断的一种新的潜在的分子标志物,对大肠癌患者早期诊断,评价恶性程度,指导临床治疗,判断预后具有一定临床意义.
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RASSF1A基因与乳腺癌的研究进展
RASSF1是新发现的一种定位于染色体3p的肿瘤抑制基因.该基因存在多种不同的转录本,而RASSF1A是重要常见的转录本.它在多种实体肿瘤中如乳腺癌表达缺失,其主要原因是启动子甲基化.启动子甲基化作为肿瘤标记物在乳腺癌的诊断、治疗等方面有着广泛的研究前景和临床价值.
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RASSF1A与胃癌关系的研究进展
RASSF1A基因是一种新型侯选肿瘤抑制基因,多项研究表明通过该基因的失活与其启动子区甲基化和杂合子缺失,参与细胞凋亡和多种恶性肿瘤的发生.本文从该基因的生物学特性及其作用机制与胃癌的发生发展及其影响因素作一综述.
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RASSF1A和肿瘤的研究新进展
RASSFIA是新近发现的一个位于3p染色体上的抑癌基因.该基因的失活可能在肺癌等多种肿瘤的发生发展中起重要作用.RASSF1A启动子异常甲基化作为肿瘤生物标志物可能应用于肿瘤的诊断、治疗及其它众多领域,有广阔的临床应用前景.
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RASSF1A基因在胃癌中的表达及临床意义
目的:研究RASSF1A蛋白在胃癌中的表达及临床病理学意义.方法:采用免疫组化SP法检测69例胃癌组织,慢性浅表性胃炎(CSG)和慢性萎缩性胃炎(CAG)各15例,伴肠化生(IM)15例和伴异型增生(DYS)19例胃粘膜组织中RASSF1A蛋白的表达.结果:胃癌组织中RASSF1A表达的阳性率为56.5%(39/69),低于其在CSG胃粘膜组织中的阳性表达率86.7%(13/15)(P＜0.05);从CSG→CAG→IM→DYS→GC这一演化模式过程中,RASSF1A蛋白的阳性率表达逐渐降低(P＜0.05);RASSF1A表达与肿瘤分化程度及有无淋巴转移相关(P＜0.005).结论:RASSF1A在胃癌中低表达可能参与肿瘤的发生、发展和预后有关系.
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5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷对乳腺癌细胞RASSF1 A甲基化的逆转作用
目的：通过甲基化抑制剂5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）作用于乳腺癌细胞株MCF-7，探索5-Aza-CdR逆转乳腺癌抑癌基因RASSF1A甲基化作用的机理。方法：体外培养乳腺癌细胞株MCF-7细胞，使用不同浓度5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷处理MCF-7细胞，对照组不加药。MSP及Western blot分别检测经5-Aza-CdR处理前、后RASSF1A DNA、蛋白的表达情况。结果：经去甲基化药5-Aza-CdR作用后，实验组恢复了RASSF1A的表达，明显高于对照组（ P<0.05）。结论：去甲基化药5-Aza-CdR可以逆转乳腺癌细胞RASSF1A的甲基化作用，恢复了RASSF1A蛋白的表达，为临床治疗乳腺癌提供了理论基础。
关键词： 5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷 MCF-7细胞 RASSF1A 甲基化 -
胶质瘤患者抑癌基因RASSF1A启动子区甲基化研究
目的 探讨RASSF1A抑癌基因在胶质瘤组织及脑正常组织中甲基化程度及与临床特征的关系.方法 46例脑胶质瘤组织及6例脑正常组织采自手术患者.用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)方法检测46例胶质瘤(其中包括星形细胞瘤19例,室管膜瘤16例,胶质母细胞瘤11例)及6例脑正常组织中RASSF1A基因甲基化状态.并对RASSF1甲基化发生率与临床各因素之间的关系进行分析.结果 [1]46例脑胶质瘤组织DNA标本中RASSF1A基因甲基化发生率为65.2%(30/46);6例脑正常组织中RASSF1A基因启动子未发生甲基化;RASSF1A在胶质瘤和脑正常组织之间发生甲基化率比较差异有显著性,(P=0.017,P<0.05).在46例脑胶质瘤中RASSF1A有30例发生甲基化,其中低级别组14例(14/26),高级别组16例(16/20),两组之间甲基化率比较无明显差异,(P>0.05).其中星形细胞瘤,室管膜瘤,胶质母细胞瘤甲基化发生频率分别为63.2%(12/19),68.8%(11/16),63.6%(7/11).在各组之间甲基化发生率比较均无统计学意义,(P>0.05).[2]RASSF1A基因甲基化程度与脑胶质瘤病理分型、肿瘤大小之间无显著相关性.结论 RASSF1A在胶质瘤中有甲基化发生,在脑正常组织中未发生甲基化,检测胶质瘤中RASSF1A基因启动子区甲基化情况对临床判断肿瘤发生发展有指导意义.
关键词： 胶质瘤 RASSF1A 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 -
RNA干扰靶向DNMT1基因对乳腺癌MCF-7细胞和RASFF1A基因的影响
目的:RASSF1A基因在乳腺癌MCF-7细胞的表达及其对乳腺癌MCF-7细胞周期和凋亡的影响.方法:DNA重组技术合成针对人乳腺癌MCF-7细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因3条siRNA(siRNA1,siRNA2,siRNA3),以脂质体2000做为载体将其转入人乳腺癌MCF-7细胞,采用RTPCR法检测DNMT1 mRNA的表达,选择特异性较高的siRNA并以此为标准建立10,30,50 nmol/L,3个浓度梯度,采用Western Blot检测RASSF1A基因的蛋白表达,选出低且有效浓度已达到基因抑制的适浓度.采用流式细胞仪检测siRNA抑制DNMTI前后细胞周期和凋亡率的变化.结果:siRNA成功转染了人乳腺癌MCF-7细胞,转染率达到80%;3对siRNA中siRNA2特异性较高;Western Blot检测终浓度为30 nmol/L的siRNA抑制效率较高;细胞周期大部分停滞在G0/G1期,抑制细胞增殖分裂,细胞凋亡率增加.结论:通过RNA 干扰可以抑制DNMTI的表达,从而逆转由于启动子高甲基化沉默的抑癌基因RASSF1A的表达,终抑制乳腺癌细胞的生长.为肿瘤基因治疗提供依据.
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RASSF1A基因启动子甲基化与肿瘤关系的研究进展
RASSF1A是一个位于3p21.3染色体上的抑癌基因.该基因在多种肿瘤的细胞系和原发肿瘤组织中的失活是很普遍的.RASSF1A基因启动子甲基化可能是肿瘤发生的早期事件并可能做为早期诊断的重要分子标志.
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RASSF1A基因在骨肉瘤中的表达及其临床意义
目的 探讨肿瘤抑制基因RASSF1A在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤的生物学行为之间的关系.方法 用RT-RCR方法 检测a)骨肉瘤MG-63细胞中RASSF1A基因的表达;b)30 例骨肉瘤组织、10 例骨软骨瘤组织及10 例正常骨组织中RASSF1A基因的表达.结果 a)骨肉瘤MG-63细胞中未发现RASSF1A基因表达;b)30 例骨肉瘤组织中RASSF1A基因缺失率为43.33%,对照组骨软骨瘤中表达率为100%,正常骨组织中表达率为100%.RASSF1A基因的表达与肿瘤的Enneking分期及是否发生远处转移相关(P＜0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤的部位及大小、Price组织学分级及是否侵犯软组织无关(P＞0.05).结论 RASSF1A基因可能在骨肉瘤的发生发展中起重要作用,有可能为骨肉瘤的基因治疗提供新的靶点.
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利用RASSF1A位点检测母体血浆中胎儿SNP分型
目的 探讨利用母体血浆中高甲基化RASSF1A位点进行胎儿SNP分型的应用价值.方法 随机收集10个未孕健康妇女和45例不同孕期(早期5例、中期20例、晚期20例)孕妇的血样本及相应胎儿组织(绒毛组织、羊水、胎盘组织);利用甲基化敏感限制性内切酶BstUI酶切后进行PCR,产物进行血细胞、血浆和胎儿组织(绒毛或胎盘)DNARASSF1A序列的甲基化模式检测,并采用直接测序法对SNP rs4688725位点进行分型.结果 经BstUI酶消化,RASSF1A序列在母体血细胞中均未检出,而在绒毛或胎盘组织中均能检出;在45名孕妇血浆中,RASSF1A序列均能被检出,且序列内的SNP分型与相应胎儿组织一致;在10名非孕妇女血浆中均未检出RASSF1A序列.结论 母体和胎儿DNA中RASSF1A基因启动子区域的甲基化模式存在差异,可用于对母体血浆中的游离胎儿DNA进行SNP分型.
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5氮杂脱氧胞苷对鼻咽癌细胞RASSF1A基因甲基化和mRNA表达的影响
目的:研究5氮杂脱氧胞苷对鼻咽癌CNE2细胞中RASSF1A基因甲基化和mRNA表达的影响.方法:用不同浓度(0、5、10、20μmol/L)5氮杂脱氧胞苷处理CNE2细胞,采用甲基化特异性PCR (MSP)法对处理后细胞中RASSF1A基因甲基化状态进行检测；并用SYBR Green qReal Time-PCR法检测RASSF1A mRNA的表达.结果:阴性对照组CNE2细胞中,RASSF1A基因呈完全甲基化状态,当用5μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,CNE2细胞出现非甲基化产物,20μmol/L5氮杂脱氧胞苷处理后,CNE2细胞甲基化状态完全被逆转,均为非甲基化产物.阴性对照组CNE2细胞RASSF1A基因呈低表达,经5～20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,RASSF1A mRNA的相对表达量逐渐增加,10和20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理组,RASSF1A mRNA表达水平均明显高于阴性对照组(P＜0.01)；且20μmol/L理组明显高于5μmol/L处理组(P＜0.01).结论:CNE2细胞ASSF1A基因甲基化可以被5氮杂脱氧胞苷逆转,且5氮杂脱氧胞苷可促进RASSF1A mRNA的表达.
