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非小细胞肺癌RASSF1A基因甲基化及下游基因表达
目的:研究非小细胞肺癌RASSF1A基因启动子甲基化及下游基因表达情况.方法:留取58例非小细胞肺癌患者手术标本及正常肺组织,甲基化特异性PCR分析RASSF1A基因启动子甲基化情况,同时Northern blot分析SM22、SPARC、SDHB和CCND3等4种RASSF1A下游基因的表达情况.结果:58例非小细胞肺癌中RASSFlA基因启动子甲基化阳性率为34.5%,甲基化与各临床参数之间无显著相关性,SM22和SPARC在RASSF1A甲基化组表达明显下调.结论:原发性非小细胞肺癌中存在着较高比例的RASSF1A启动子过度甲基化,并与下游基因SM22和SPARC的表达下调密切相关,提示RASSF1A在非小细胞肺癌的发生中起着多种作用.
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抑癌基因RASSF1A与乳腺癌发生发展关系的研究
目的 探讨RASSF1A基因在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌发生发展的作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测51例乳腺癌组织、30例癌旁正常组织、12例乳腺良性肿瘤组织中RASSF1A基因mRNA的表达情况.结果 (1)RASSF1A mRNA在癌旁正常组织、良性肿瘤组织中均有表达,其表达量分别为0.46303±0.15069、0.48064±0.13569,二者之间的表达无明显差别(P＞0.05).而该基因在乳腺癌组织中的表达缺失率为51.0%(26/51),其表达量为0.09550±0.13569,明显低于癌旁正常组织、良性肿瘤组织(P＜0.01);(2)乳腺癌组织中RASSF1A mRNA的表达低下或缺失与淋巴结转移相关(P＜0.05);(3)RASSF1A mRNA的表达低下或缺失与年龄、肿瘤大小、病理分型、组织学分级、激素受体和HER-2表达情况无显著相关(P＞0.05).结论 RASSF1A基因表达缺失可能在乳腺癌的发生和发展过程中起重要作用,并影响其预后.
关键词： 乳腺癌 抑癌基因 RASSF1A 逆转录-聚合酶链反应 -
改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用
目的 改进聚合酶链反应(PCR),并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性.方法 培养人乳腺癌细胞株MCF-7,提取基因组DNA,利用亚硫酸氢盐测序法,用常规、降落及改进PCR分别扩增,比较扩增效果,PCR产物纯化回收后,TA克隆入载体pGEM-T,转化大肠杆菌(E.coli DH5α),筛选阳性克隆,经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒,测序比对.结果 改进后PCR与常规、降落PCR相比,扩增效率增高,二聚体及非特异性扩增减少;测序结果显示,MCF-7细胞基因组DNA中,RASSFlA基因启动子CpG岛是高甲基化的,E-cadherin基因启动子CpG岛未呈现高甲基化状态.结论 改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性,更适用于基因甲基化状态的检测,并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考.
关键词： 甲基化 聚合酶链反应 E-cadherin RASSF1A -
RASSF1A与消化系肿瘤的关系
目前已有不少与肿瘤发生发展相关的基因被发现与报道,并逐渐为人们所了解.新近发现位于3p21.3的RASSF1A基因在多种肿瘤中失活,包括小细胞肺癌、乳腺癌、胃癌及肾细胞癌等.研究表明RASSF1 A作为一种候选肿瘤抑制基因参与肿瘤的发生发展,该基因的失活与其启动子区甲基化有关,另外亦发现某些病毒的感染可影响其甲基化状态.本文就RASSF1A基因与消化系肿瘤间的关系作一综述.
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RASSF1A、MINT31启动子区高甲基化与食管上皮内瘤变和食管鳞癌的关系
背景:食管上皮内瘤变(EIN)是食管正常或慢性炎症组织向鳞癌转变过程中必经的病理阶段,目前对EIN的发生、发展尚缺乏临床实用的早期评估指标.目的:探讨肿瘤相关基因RASSF1A、MINT31启动子区高甲基化和DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达与EIN和食管鳞癌发生、发展的关系.方法:以甲基化特异性PCR(MSP)检测30例食管鳞癌、80例EIN和20例正常食管组织中的RASSF1A、MINT31甲基化状态,以亚硫酸氢盐修饰后测序(BSP)验证MSP结果.以免疫组化方法检测EIN和食管鳞癌组织中的DNMT1蛋白表达.结果:正常食管组织、EIN、食管鳞癌组织中的RASSF1A和MINT31甲基化率分别为5.0%和5.O%、32.5%和26.2%、60.0%和46.7%,组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).BSP方法证实,MSP示RASSF1A甲基化阳性的EIN和食管鳞癌组织,RASSF1A启动子区存在甲基化位点.低级别、高级别EIN和食管鳞癌组织中的DNMT1蛋白表达阳性率分别为32.5%、55.0%和76.7%.组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).DNMT1高表达与RASSF1A甲基化相关,与MINT31甲基化无关.结论:RASSF1A、MINT31启动子区高甲基化和DNMT1表达上调在EIN和食管鳞癌的发生、发展中起重要作用,其检测或许有助于EIN的评估.
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新型抑癌基因RASSF1与胃癌的关系
新近发现的RASSF1A基因位于染色体3p21.3区,是一种新型侯选肿瘤抑制基因,多项研究表明它可参与细胞凋亡和多种恶性肿瘤的发生.在多种肿瘤中失活.该基因的失活与其启动子区甲基化和杂合子缺失有关.另外发现一些病毒的感染可影响其甲基化状态.
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贲门腺癌中RASSF1A基因甲基化与cyclin D1表达的关系
目的:探讨贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中RASSF1A基因的甲基化状态及其与cyclin D1蛋白表达之间的相关性.方法:分别应用甲基化特异性PCR(mothylation-specific PCR,MSP)方法和免疫组织化学SP法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织的RASSF1A基因甲基化情况和cyclin D1蛋白表达情况.结果:92例贲门腺癌组织中有54例RASSF1A发生了甲基化,甲基化率为58.7%,显著高于癌旁正常组织(P<0.001).Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中RASSF1A基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05).92例贲门腺癌组织中有72例(78.3%)cyclin D1蛋白表达阳性,与相应癌旁正常组织比较,cyclin D1在贲门癌组织中的表达显著升高(P<0.001);且随肿瘤分化程度的降低,cyclin D1的阳性表达率明显升高(P<0.05).RASSF1A基因在贲门腺癌中的高甲基化与cyclin D1蛋白表达之间有明显的相关性(P<0.05).结论:RASSF1A基因启动子区的高甲基化以及cyclin D1蛋白的过表达可能参与了贲门腺癌的发生发展过程.
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RASSF1A和p16基因甲基化在子宫颈癌组织中的表达及意义
目的:探讨p16和RASSF1A基因异常甲基化在子宫颈癌组织中的表达及意义.方法:用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation-specific PCR,MSP)对40例宫颈癌组织,80例宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial Beoplasia,CIN)组织、20例正常官颈组织作为对照组进行p16和RASSF1A基因异常甲基化检测.结果:p16和RASSF1A甲基化在正常组未见表达.宫颈癌组p16基因甲基化阳性率为40.0%,明显高于CIN组的12.5%,差异有统计学意义(X2=11.88,P＜0.05).宫颈癌组RASSF1A基因甲基化阳性率为20.0%,高于CIN组的7.5%,差异有统计学意义(,=4.04,P＜0.05).宫颈癌组p16和RASSF1A基因甲基化阳性率为55.0%,明显高于宫颈CIN组的17.5%,差异有统计学意义(X2=17.12,P＜0.05).结论:p16和RASSF1A基因启动子区异常甲基化与宫颈癌的生物学行为相关,可能为宫颈癌的早期辅助诊断和治疗提供帮助.
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RAS相关家族1A基因在胃癌中的表达和启动子甲基化
目的分析散发性胃癌中RAS相关家族1A基因(RASSF1A基因)的表达、突变和启动子甲基化状况,探讨RASSF1A基因在胃癌发生、发展中的意义.方法采用定量PCR、RT-PCR和SSCP的检测90例胃癌组织和30例相应癌旁正常组织中RASSF1A基因表达水平以及基因突变的情况;采用甲基化特异性PCR (MSP)方法检测RASSF1A基因启动子甲基化情况.结果 90例胃癌中有52例(57.8%)RASSF1A无表达或表达低下.RASSF1A无表达或表达低下和肿瘤细胞的分化(P<0.05)以及分期(P<0.001)相关,但是和肿瘤的浸润深度以及淋巴结转移不相关(P>0.05).90例胃癌中52例启动子发生甲基化(57.8%),其中90.3%(47/52)的RASSF1A无表达或表达低下组织中检测到RASSF1A基因启动子的甲基化,然而癌旁正常组织未发现有RASSF1A基因启动子的甲基化,SSCP没有发现任何突变.结论胃癌中存在较多的启动子异常甲基化造成RASSF1A基因失活,这可能是胃癌发生发展的因素之一.
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唾液腺腺样囊性癌中RASSF1A表达及与启动子甲基化之间的关系
目的:研究唾液腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)中RASSF1A表达及其与启动子区甲基化之间的关系.方法:收集167例原发性唾液腺ACC,亚硫酸盐测序聚合酶链反应(bisulfite sequencing polymerase chain reaction,BSP)和甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测RASSF1A基因启动子区甲基化状况,免疫组织化学方法检测RASSF1A蛋白表达情况.去甲基化药物decitabine处理ACC细胞系SACC-83后,检测处理前、后RASSF1A基因甲基化及表达情况.应用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析.结果:59/167(35.3％)例病例中检测到RASSF1A基因启动子区甲基化.101/167(60.5％)例病例中RASSF1A蛋白呈低或不表达,66/167(39.5)病例中RASSF1A蛋白呈高表达.存在RASSF1A基因甲基化组,RASSF1A蛋白表达显著低于不存在甲基化组(P=0.012).去甲基化药物decitabine处理ACC细胞系后,RASSF1A mRNA及蛋白水平表达均升高.结论:唾液腺ACC中,启动子区甲基化是RASSF1A基因失活的主要原因,可作为该肿瘤的潜在治疗靶点.
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唾液腺腺样囊性癌中RASSF1A基因的表达
目的:研究唾液腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)中RASSF1A基因的蛋白表达,并分析其与ACC临床病理参数之间的关系.方法:免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法分析57例唾液腺ACC和9例瘤旁腺体中RASSF1A基因的蛋白表达,根据染色强度和染色面积对每例病例进行评分,分为0(无)、1(弱)、2(中)、3(强)4个级别.应用SPSS13.0软件包分析RASSF1A蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、组织学分级、分期、复发、转移及患者预后之间的关系.结果:在ACC肿瘤组织的肌上皮和导管上皮的细胞质和细胞核中均见RASSF1A基因的蛋白表达.57例肿瘤组织中,21％(12/57)的病例中无RASSF1A基因的蛋白表达,47％(27/57)的病例中呈弱表达,23％( 13/57)呈中度表达,9％(5/57)呈强表达.在瘤旁腺体中,RASSF1A均为强表达.统计学分析显示,RASSF1A基因的蛋白表达与肿瘤的TNM分期呈负相关(P=0.012).RASSF1A蛋白表达低的患者,生存期显著低于表达高的患者(P=0.035).结论:RASSF1A基因蛋白表达水平在ACC中下调,并与肿瘤分期及患者的生存期相关,提示RASSF1A基因可作为ACC患者肿瘤发展及预后判断的一个生物学标志物.
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GSTP1和RASSF1A基因多态性和环境因素与前列腺癌的相关性分析
目的 探讨GSTP1和RASSF1A基因多态性及环境因素和前列腺癌易感性之间的关系.方法 采用TaqMan/MGB探针基因分型方法对103例前列腺癌患者和103例正常对照的中国汉族人群基因组DNA进行GSTP1和RASSF1A基因多态性检测,并结合环境因素应用多因素Logistic回归分析吸烟、饮酒、饮茶、猪肉和牛肉每周实际摄入量及各位点基因型与前列腺癌易感性之间的关系. 结果 GSTP1基因型AA、AG、GG在前列腺癌和对照人群中的比例分别为66.02%、22.33%、11.65%和67.96%、29.13%、2.91%,有统计学差异(χ~2=6.35,P=0.04);RASSF1A基因型CC、CA、AA在前列腺癌和对照人群中的比例分别为88.34%,5.83%,5.83%和85.44%,12.62%,1.94%,无统计学差异(~χ2=4.63,P=0.10).多因素Logistic回归分析显示,饮茶者患前列腺癌的危险性是不饮茶者的0.40倍(95%CI,0.19～0.82),吸烟者患前列腺癌的危险性是不吸烟者的3.02倍(95%CI,1.44～6.32).结论 GSTP1和RASSF1A的基因多态性和中国汉族人群前列腺癌的发生无相关性;吸烟是前列腺癌的危险因素,饮茶是保护因素.
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肾癌组织中RASSF1A和BLU基因的异常甲基化
目的:观察肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,探讨二者在肾癌发生中的可能作用.方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测26例肾癌组织和相应癌旁组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,分析二者检测结果.结果:肾癌组织中17例(65.4%)RASSF1A基因异常甲基化表达,相应癌旁组织中无RASSF1A基因异常甲基化表达;11例(42.3%)肾癌组织中BLU基因高甲基化,相应癌周组织中未发现BLU基因高甲基化.结论:肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子高度甲基化,表明RASSF1A和BLU基因甲基化可能与肾癌的发生相关.
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抑癌基因RASSF1A在胃癌中的表达及意义
目的 研究胃癌组织中抑癌基因RASSF1A的表达并探讨其临床意义.方法 应用免疫组化法分别检测39例胃癌组织标本和18例正常对照胃组织标本RASSF1A蛋白表达; RT-PCR法检测4株胃癌细胞株、正常胃黏膜细胞株GES-1以及阳性对照Hela细胞中RASSF1A mRNA的表达;结合病理学特征进行分析.结果 胃癌组织RASSF1A表达阳性细胞明显少于正常对照胃组织(P＜0.01);不同分化程度、临床分期及浸润深度的胃癌组织,其RASSF1A表达存在显著性差异(P＜0.05).4株胃癌细胞株中仅MKN45细胞有RASSF1A mRNA表达;而正常胃黏膜细胞株GES-1和阳性对照Hela细胞均表达RASSF1A mRNA.结论 胃癌组织中RASSF1A基因表达明显减少,其可作为评估胃癌恶性程度和预后的一项有意义的指标.
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实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化
目的 建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法.方法 以肺癌细胞株NCI-H460作为RAssF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200 μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆.用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测.以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量.结果 实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆).15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%).5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml.结论 实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强.
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Ras相关区域家族1A基因异常甲基化在前列腺癌中的研究进展
Ras相关区域家族1A(RASSF1A)是从3p21.3区域克隆出来的新型候选抑癌基因.启动子区域CpG岛的异常甲基化可以导致RASSF1A失活,对包括前列腺癌在内多种实体瘤的发生、发展中起着重要作用.对大量临床标本中RASSF1A基因异常甲基化及其与相应病例临床特点之间的关系分析表明,RASSF1A甲基化检测有望成为前列腺癌早期诊断和预后判断的重要辅助手段,而丰富的实验研究则提示甲基化抑制剂有望成为前列腺癌治疗的新手段.
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RASSF1A基因与肺癌关系的研究进展
肺癌是严重危害人类生命和健康的常见疾病,近年来其发病率和死亡率逐步上升,已经成为全世界发病率和死亡率高的癌症之一.Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1 A,RASSF1A)是2000年发现的新型候选抑癌基因(tumor suppressor gene,TSG).近年来,国内外学者对其在肺癌中的表达情况、抑癌机制、失活原因及临床应用前景等方面进行了广泛研究,现综述如下:
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RASSF1A抑癌基因在肿瘤中的研究进展
肿瘤发生与不同的细胞机制有关,包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活.RAS相关区域家族1A(RAS association domain family 1A,RASSF1A)是近年来新发现的一个候选肿瘤抑制基因(tumor suppressor gene,TSG),该基因的失活在多种人类肿瘤的发生发展过程中起重要作用.虽然基因缺失和点突变可引起基因的失活,但大量研究表明,该基因的失活与其启动子的高甲基化有关,此表观遗传学机制可使多种抑癌基因失活,并被证实为肿瘤发生发展的主要原因.论文就RASSF1A基因与肿瘤的研究进展予以综述.
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RASSF1A、p16基因甲基化与肺癌关系及据此诊疗研究进展
抑癌基因RASSF1A、p16发生甲基化,可能与肺癌的发生发展有关.该两基因和其甲基化可以从肺癌组织、呼出气冷凝液、血液、痰液、肺泡灌洗液中检测到.目前可使用去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷等进行治疗.
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改良多重实时荧光定量PCR法测定抑癌基因MGMT、p16、CDH13和RASSF1A甲基化 在肺癌早期诊断中的作用
目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用.方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组.建立改良实时荧光定量PCR体系.检测受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,对比两组基因甲基化阳性率,计算四项基因甲基化单独及联合用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度.结果:肺癌组受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A显著高于对照组(P<0.05);MGMT、p16、CDH13和RASSF1A四项基因甲基化联合检测用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度显著高于单项指标检测(P<0.05).结论:建立了多重实时荧光定量PCR法用于MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化检测,联合检测用于肺癌早期诊断具有较高的敏感度和特异度.
