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Rho/Rho激酶信号通路与缺氧性肺动脉高压
本文简要综述了近年来Rho/Rho激酶信号通路的研究进展，对缺氧性肺动脉高压( hypoxia induced pulmo?nary hypertension,HPH)的发病机制，对发病过程中肺血管收缩( HPV)和肺血管重建( HPSR)进行分析和总结，重点讨论了Rho/Rho激酶信号通路与HPH的关系并进行简要概述。
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Rho/Rho激酶信号通路与胰腺疾病
Rho/Rho激酶信号通路是真核细胞内广泛存在的一条信号通路,参与多种生物学行为.研究表明,Rho/Rho激酶在胰腺腺泡细胞、导管细胞及内分泌细胞均见表达,并与胰腺内、外分泌功能以及胰腺癌、胰腺炎和糖尿病的发生、发展密切相关.
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Rho/Rho激酶与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛
脑血管痉挛是蛛网膜下腔出血严重的并发症之一,其发病机制尚不十分清楚.近年来,Rho/Rho 激酶通路在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用受到越来越多的关注.Rho/Rho 激酶通路通过多种机制影响脑血管痉挛的发生和发展.选择性Rho 激酶抑制剂对脑血管痉挛的有益作用也已在动物实验和临床研究中得到证实.文章综述了Rho/Rho 激酶通路的作用机制及其在脑血管痉挛治疗方面的作用.
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大鼠脊髓损伤及N2a细胞株缺氧后Rho-ROCK通路的变化
目的 观察脊髓损伤(SCI)后RhoA活性变化和体外模拟脊髓缺血再灌注诱导的神经元损伤中Rho激酶(ROCK)下游底物肌动蛋白(F-actin)细胞骨架的重组,探讨ROCK通路对于SCI后轴突萎陷的作用机制.方法 成年SD大鼠Allen's制模,Western blot检测Rho A蛋白表达,GSTPull down assay RhoA活性变化;培养N2a细胞,置于含90%N2的37℃培养箱中模拟脊髓继发损伤中缺血缺氧和再灌注过程,MTT检测细胞活力,并用FITC标记的鬼笔毒环肽染色神经元F-actin,免疫荧光观察其重组.结果 SCI后RhoA总蛋白表达无明显变化(P>0.05),但活性逐步增高(P<0.05);正常N2a细胞F-actin主要分布于细胞周边,应力纤维少,缺氧后胞质周边肌动蛋白丝带模糊,轴突回缩,胞质内应力纤维增多;而加入Y-27632的N2a缺氧后无此过程,且缺氧后再加入Y-27632亦可明显逆转此过程;MTT显示Y-27632能显著提高N2a缺氧和再灌注24 h后的存活率(P<0.05),且保护作用在一定范围内和浓度成正比.结论 SCI后神经元轴突中RhoA的活性增高并过度激活ROCK,影响轴突内F-actin细胞骨架的重组,从而导致生长锥萎陷和轴突回缩;对ROCK进行抑制可以预防轴突塌陷和神经元死亡,促进轴突再生.
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Rho/Rho激酶与心血管疾病
Rho蛋白是一种三磷酸鸟苷(GTP)结合蛋白,Rho激酶(ROCK)是早发现的Rho效应物,在分子水平,ROCK表达上调促进氧化应激、炎症、血栓形成和纤维化的各种因子增加,下调内皮型一氧化氮合酶.在细胞水平,参与许多细胞功能如基因表达、胞质分裂、细胞黏附和迁移等的调节.研究发现,Rho/Rho激酶与心血管疾病有关,如冠状动脉粥样硬化性心脏病、高血压、心力衰竭等,其抑制剂fasudil可以治疗许多心血管疾病,目前已经在临床上应用.该文对Rho/Rho激酶与心血管疾病关系予以综述.
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内皮细胞Rho/Rho激酶介导纤维肉瘤细胞血管外游走的机制
目的 研究内皮细胞Rho/Rho激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制.方法 采用血管外游走体外模型观察纤维肉瘤细胞血管外游走状况;测定游走过程中血管内皮单细胞层电阻变化;进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平.结果 纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外.在游走过程中跨血管内皮细胞层电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平升高.内皮细胞Rho抑制剂(C3转移酶)、Rho激酶抑制剂(Y-27632)能够抑制上述变化.结论 内皮细胞Rho/Rho激酶可能是通过调节肌球蛋白轻链磷酸化水平诱导纤维肉瘤细胞向血管外游走.
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ROCK2在大鼠脊髓损伤后损伤区局部的表达规律研究
目的:研究脊髓损伤后不同时间点ROCK2在损伤局部的表达规律,为Rho激酶抑制剂治疗脊髓损伤提供理论依据.方法:成年健康雌性SD大鼠60只随机分为2组,每组30只,脊髓横断组:选取大鼠脊髓T10节段为损伤节段,剪断脊髓的后3/4深度损伤;假手术组:大鼠只行椎板切除术,不进行脊髓横断.于术前及术后3d、1w、2w、4w、6w采用BBB运动功能评分法对大鼠进行后肢运动功能评价,于术后8h、3d、1w、2w、4w、6w用免疫组化法检测大鼠脊髓组织ROCK2表达水平.结果:假手术组术后双后肢活动正常,BBB评分21分;术后3天～1周内横断组大鼠BBB评分均为0分,1周后BBB评分逐渐上升,至伤后4周可达9～10分左右,6周时评分无明显改变.脊髓横断组大鼠双后肢BBB评分于术后各时间点均较假手术组明显降低.横断组损伤后3天ROCK2的表达开始增加,1周达到高峰,且持续高表达4周,4周后表达开始下降,6周时恢复至低水平表达.横断组ROCK2的表达在损伤后3天～4周的各时间点均较假手术组明显增加,6周时ROCK2的表达与假手术组比较无显著性差异.结论:脊髓损伤后ROCK2可持续高表达4周,4周后ROCK2的表达恢复至假手术组水平,而运动功能不能再继续恢复.
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法舒地尔对压力负荷心力衰竭大鼠的作用
目的:探讨法舒地尔(fasudil)对升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭的作用.方法:将升主动脉缩窄术后Wistar雌性大鼠随机分为5组,每组10只.心力衰竭组,腹腔注射生理盐水0.1 ml,每日2次;1、5、20 mg/kg fa-sudil组,腹腔注射,每日2次;10 mg/kg硝苯地平组,每日3次灌胃.同时制备模型设置假手术组作为对照(n=10),腹腔注射生理盐水0.1 ml,每日2次.观察各组大鼠指标变化.结果:心力衰竭鼠心肌细胞RhoA、Rho激酶mRNA表达显著增高,fasudil药物治疗4周后,心肌细胞内RhoA、Rho激酶mRNA表达下降,且呈剂量依赖关系;应用硝苯地平治疗4周后,心肌细胞内RhoA、Rho激酶mRNA表达无明显变化.结论:心肌细胞内RhoA、Rho激酶mRNA表达与充血性心力衰竭密切相关,法舒地尔可降低RhoA、Rho激酶mRNA表达,缓解心力衰竭症状,可能为一种新的、有效的治疗心力衰竭的血管扩张剂.
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肿瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞调控机制的研究
目的:阐明肿瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及Rho/Rho激酶的调控作用.方法:利用肿瘤细胞向血管外游走的体外模型,观察肿瘤细胞的血管外游走状况,并测定肿瘤细胞游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化;通过Western blot评价肿瘤游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化水平.结果:肿瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外;并且肿瘤细胞向血管外游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降、内皮细胞MLC的磷酸化水平升高;而内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂(ML-7)及Rho抑制剂(C3转移酶)、Rho激酶抑制剂(Y-27632)能够抑制上述变化.结论:内皮细胞MLCK及Rho/Rho激酶可以通过控制MLC的磷酸化水平来引起内皮细胞骨架蛋白的改变,从而调控肿瘤细胞穿过内皮细胞间缝隙向血管外游走.
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养心颗粒对易损斑块Rho/Rho激酶信号通路血清LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量的影响
目的:观察养心颗粒对易损斑块Rho/Rho激酶信号通路血清LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量的影响.方法:随机将32只雄性家兔分为空白对照组、模型对照组、养心颗粒组、法舒地尔组.分别给予普通饲料及高脂饮食喂养8周,采用球囊损伤颈总动脉并注射P53基因转染建立易损斑块模型.药物治疗2周后采用ELISA法检测LDL-C、TC、ET-1、TNF-α水平.结果:与模型组比较,养心颗粒组和法舒地尔组血清中LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量下降(P<0.05);养心颗粒组与法舒地尔组比较,血清中LDL-C,TC、ET-1、TNF-α含量,差异无统计学意义(P>0.05).结论:养心颗粒可降低易损斑块Rho/Rho激酶信号通路血清中LDL-C、TC、ET-1、TNF-α的含量.
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Rho/Rho激酶信号转导通路与他汀类药物
他汀类药物的多效性与Rho/Rho激酶信号转导通路密切相关.他汀类药物通过抑制类异戊二烯的生成而影响Rho的膜定位功能及其对下游效应分子Rho激酶的激活作用,继而引起一系列细胞生物学效应的改变.Rho/Rho激酶信号转导通路与他汀类药物关系的阐明,至少可部分解释他汀类药物调脂作用以外的更广泛的药理活性,以指导其在临床的应用.
关键词： 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 药理作用 信号传导 他汀类 Rho/Rho激酶 -
法舒地尔对高糖培养人腹膜间皮细胞RhoA/Rock1、ROS、GSH-Px及TGF-β1表达的影响
目的:探讨法舒地尔(FAS)对高糖培养的人腹膜间皮细胞(HMrSV) RhoA/Rock1、活性氧(ROS)、GSH-Px及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响. 方法:将人腹膜间皮细胞株HMrSV分为对照组(葡萄糖浓度为0)、高糖组(葡萄糖浓度分别为1.5％、2.5％和4.25％)和FSA干预组(2.5％葡萄糖+FAS 12.5、25和50μmol/L).检测方法:Q-PCR法和Western印迹法检测RhoA和Rock1的表达;化学荧光法检测ROS的含量;EL1SA法检测GSH-Px和TGF-β1的含量. 结果:与对照组相比,高糖组可呈浓度依赖方式上调RhoA、Rock1、ROS及TGF-β1的表达,下调GSH-Px的表达;与2.5％高塘组相比,FAS干预可明显下调RhoA、Rock1、ROS及TGF-β1的表达,上调GSH-Px的表达. 结论:FAS可能通过抑制Rho激酶活性抑制高糖培养的人腹膜间皮细胞发生氧化应激反应.
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Rho/Rho激酶信号通路与缺血性脑血管病
Rho/Rho激酶信号通路是体内普遍存在的一条信号通路,它通过调节细胞内肌动蛋白骨架的聚合状态而扮演着"分子开关"角色,参与多种细胞功能.Rho/Rho激酶信号通路在缺血性脑血管病的危险因素、发病机制和病理生理学过程中发挥着重要作用,抑制Rho/Rho激酶信号通路能够取得显著的神经保护作用.
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Rock-1基因在缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及法舒地尔的预防作用
目的:观察小G蛋白Rho相关激酶(Rock-1)基因在大鼠缺氧性肺动脉高压(HPH)肺组织中的表达规律,探讨法舒地尔(fasudil)对HPH的预防作用.方法:72只SD大鼠随机分为缺氧模型组(H组)和缺氧+fasudil预防组(fasudil组),对照组(C组).采用常压间断缺氧法复制大鼠HPH模型,右心导管测平均肺动脉压力(mPAP),计算右心室(RV)/[左心室+室间隔(LV+S)]的重量比值作为右心肥厚指数,并用RT-PCR方法测定肺组织Rock-1及平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达水平.结果:mPAP在缺氧7天后明显增高(P＜0.01),并随缺氧时间的延长,进一步升高.右心肥厚指数在H组第7天开始升高,第14天与C组比较差异有显著性(P＜0.01).与H组比较,fasudil组mPAP及右心肥厚指数均明显降低(P＜0.01).Rock-1基因在HPH发生早期即明显上调,第7天达高峰后维持于较高水平.α-SMA基因表达第7天明显上调,第14天达高峰,至模型后期仍高于基础表达;Rock-1基因表达较α-SMA提前达到高峰,二者呈显著正相关(r=0.883,P＜0.05);fasudil组两基因表达水平均较H组明显降低(P＜0.01).结论:Rock-1基因在HPH大鼠肺组织中出现了明显表达异常,法舒地尔能显著降低mPAP,改善右心室肥厚,并可能通过抑制肺组织Rock-1基因表达发挥作用.
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通心络对糖尿病动脉粥样硬化大鼠Rho/Rho激酶底物影响的研究
目的:观察糖尿病合并动脉粥样硬化大鼠Rho/Rho激酶和血管内皮功能的变化及两者之间的关系,探讨通心络对此变化的影响及可能机制.方法:对Wistar大鼠采用链脲佐菌素诱导制成糖尿病模型,再予以高脂饮食制备糖尿病合并动脉粥样硬化模型,并随机分为模型组和通心络治疗组,普通饮食喂养大鼠作为对照组.药物干预6周后,行血脂、一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素(ET-1)及肌球蛋白亚基(MYPT)的检测.结果:模型组大鼠与对照组相比,eNOS降低,ET-1升高,MYPT的表达增加(均P＜0.05);血脂各项指标除HDL-C明显降低外均增高(均P＜0.05).通心络治疗组与模型组相比,eNOS升高,ET-1降低,MYPT表达降低(均P＜0.05);TG降低(均P＜0.05),TC、LDL-C降低及HDL-C升高(P＞0.05).结论:糖尿病合并动脉粥样硬化大鼠出现内皮功能异常,通心络可以改善血管内皮功能,其机制可能是通过Rho/Rho激酶信号通路抑制血管内皮损伤.
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Rho/Rho激酶与早产儿脑白质损伤的研究进展
随着新生儿重症监护治疗技术的进步,早产儿的存活率不断提高,早产儿脑白质损伤(WMD)的发病率也在逐年增加.WMD的基本始发致病因素为缺血和母亲宫内或新生儿感染和胎儿或新生儿全身炎症,这两个上游机制缺血和炎症可以共同发生和放大其效果,其发病特点主要包括反应性星形胶质化、髓鞘损害和轴突病变等,这些病变被认为是脑瘫发生的重要的危险因素.ROCK激活导致肌球蛋白轻链(MLC)磷酸酶的抑制,MLC磷酸化水平增加,使得血管紧张度增加,导致脑血管痉挛、脑缺血缺氧等发生;ROCK通过抑制一氧化合酶(eNOS)的活性参与内皮细胞功能的异常;此外,ROCK的致病机制尚包括促进炎性因子分泌、参加炎性因子损害过程、促进细胞凋亡、使神经突触崩解等作用参与多种疾病的病理生理过程.
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法舒地尔对压力超负荷性大鼠左室重构的影响
目的 分析压力负荷性大鼠心肌组织Rho/Rho激酶表达的改变,探讨Rho/Rock信号通路与左心室重构的关系及Rho/Rock信号通路选择性抑制剂法舒地尔对左室重构的影响.方法 34只SD雌性大鼠随机取8只大鼠作为假手术对照组,其余26只建立腹主动脉缩窄高血压模型:1周后随机分为法舒地尔组和模型组.法舒地尔组用法舒地尔5mg/kg每天2次腹腔注射,共4周;模型组和假手术组腹腔等量注射生理盐水,观察各组大鼠指标变化.结果 模型组心肌细胞内RhoA、Rho激酶mRNA表达和Ⅲ型胶原含量较假手术组明显增加(P<0.05);法舒地尔治疗4周后,RhoA、Rho激酶mRNA表达及Ⅲ型胶原含量显著下降,与模型组比较,差异显著(P<0.05).结论 心肌细胞内RhoA、Rho激酶mRNA表达与左心室重构密切相关,法舒地尔可降低RhoA、Rho激酶mRNA表达,改善心肌重构.
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Rho/Rho激酶信号通路与血管内皮通透性的研究
Rho/Rho激酶信号通路是体内普遍存在的一条信号通路,它通过调节细胞内肌动蛋白骨架的聚合状态而扮演着"分子开关"的角色,参与细胞形态维持、细胞粘附与迁移、细胞增殖与凋亡、基因转录、平滑肌收缩等多种生物学行为.Rho/Rho激酶信号通路在血管内皮通透性的病理生理过程中发挥了重要作用,抑制Rho/Rho激酶信号通路取得了显著的内皮保护作用.
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抑制Rho/Rho激酶信号对动脉粥样硬化大鼠心血管系统的保护作用
目的 探讨抑制Rho/Rho激酶信号对动脉粥样硬化(AS)过程中心血管系统的保护作用.方法 实验设置对照组、模型组、Y-27632低剂量组、Y-27632高剂量组,采用高脂饮食配合钙超载的方法建立大鼠AS模型,并给予Y-27632抑制Rho/Rho激酶信号通路.末次给药后颈动脉取血检测血清TC、HDL,HE染色检测心肌组织病理改变,Western blot法检测肌球蛋白磷酸酶抗体(MYPT-1)磷酸化情况,RT-PCR检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、I型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)的表达.结果 模型组大鼠血清HDL含量降低(P＜0.05),TC、AS指数升高(P均＜0.05),心肌松散、细胞排列紊乱；与模型组相比,Y-27632低、高剂量组TC含量以及AS指数降低(P均＜0.05),心肌组织状态得到明显恢复；模型组MYPT-1磷酸化水平以及PAI-1 mRNA的表达升高(P均＜0.05),而与模型组相比Y-27632低、高剂量组显著降低(p均＜0.05)；模型组eNOS mRNA表达显著降低(P＜0.05),与模型组相比Y-27632低、高剂量组显著升高(P均＜0.05).结论 采用Y-27632抑制Rho/Rho激酶信号通路,能够减缓AS进程从而保护心血管系统.
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压力负荷心力衰竭大鼠心肌细胞内Rho/Rho激酶的表达及药物干预
目的探讨升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠心肌细胞内Rho/Rho激酶的表达及法舒地尔(fasudil)--Rho/Rho激酶拮抗剂对心力衰竭的影响.方法制备升主动脉缩窄大鼠心力衰竭及假手术组(S组)模型.将升主动脉缩窄术后Wistar雌性大鼠随机分为2组,一组为心力衰竭组(H组),给予生理盐水0.1ml,腹腔注射,每日2次;一组为fasudil治疗组(F组),治疗组给予fasudil 5 mg/Kg,腹腔注射,每日2次;治疗4周.H组、F组及S组每组各10只大鼠.观察各组大鼠各项指标变化.结果H组鼠心肌细胞RhoA,Rho激酶mRNA表达显著增高,F组心肌细胞RhoA mRNA,Rho激酶mRNA表达下降.结论心肌细胞RhoA、Rho激酶表达与充血性心力衰竭密切相关,法舒地尔可有效降低心肌细胞内RhoA mRNA,Rho激酶mRNA表达,缓解心力衰竭症状,可能为一种新的、有效的治疗心力衰竭的血管扩张剂.
