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肠毒素大肠杆菌耐热肠毒素与谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的制备和耐热肠毒素抗体测定
目的:弥补ST的弱抗原性,实现ST抗体测定.方法:采用生物工程技术,融合表达GST和带有前导序列的突变耐热肠毒素proSTm,制备ST融合蛋白,测定ST抗体.结果:测到了抗ST的血清IgG和黏膜IgA.结论:融合蛋白GST/proSTm能有效提高ST的抗原活性,可直接用于ST抗体测定.
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金黄色葡萄球菌食物中毒病原检测及方法比较
金黄色葡萄球菌是国内外常见的细菌性食物中毒病原之一.在我国,由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒约占细菌性食物中毒事件的25%,而在美国、加拿大等发达国家,更是高达50%.该菌引起中毒的主要原因是产生耐热肠毒素100℃加热1.5 h仍不失去其活性.因此,普通的烹饪方法不能将其破坏,因而食品一旦被金黄色葡萄球菌污染极易引起食源性疾病的爆发.
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一起由蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌引起食物中毒的调查报告
蜡样芽胞杆菌被发现已有一个多世纪,但其致病性长期认识不足,直至20世纪50年代才确认能引起食物中毒,直至70年代后国内外才有该菌导致食物中毒的报告.产生耐热肠毒素的金黄色葡萄球菌引起食物中毒近些年时有报道,但两者在一次食物中毒中同时被检出尚少见.本文报告一起由蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌共同污染袋装鲜牛奶,导致9名学生食物中毒的调查结果.
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大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立
目的 建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法.方法 参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素基因(estA、estB)和不耐热肠毒素基因(eltⅠ、elt-Ⅱ)的特异性引物,通过反应条件的优化,敏感性、特异性试验和临床样品检测,建立检测大肠杆菌肠毒素的多重PCR方法.结果 用所建立的多重PCR方法可特异性扩增出estA(229 bp)、estB(480 bp)、elt-Ⅰ (605 bp)和elt-Ⅱ(300 bp)基因片段,低检出量分别为2.55×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL和2.47× 103 CFU/μL.从22株大肠杆菌分离株中检测到estA基因(2/22),elt-Ⅱ基因(3/22),未检测到estB和elt-Ⅰ基因,检测结果与常规PCR检测结果一致.结论 建立了检测大肠杆菌肠毒素基因(estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ)的多重PCR方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能够满足对细菌培养物的检测要求.
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实时荧光PCR检测肠产毒性大肠埃希菌耐热肠毒素基因
目的:建立实时荧光PCR的方法检测肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)耐热肠毒素(ST Ia和ST Ib)基因.方法:设计引物和探针,优化实时荧光PCR检测ST Ia和ST Ib基因的反应条件.检测ST阳性或阴性的20株大肠埃希菌和2株霍乱弧菌以评估方法的特异性.对90份腹泻病人肛拭子标本,经BP增菌4 h后以煮沸法提取DNA模板,直接检测ST Ia和ST Ib基因,阳性标本以普通PCR检测ST基因进行复核,并从阳性的初始肛拭子标本中分离鉴定携带ST的菌株.结果:实时荧光PCR具有较高的特异性.90份腹泻病人标本中,9份标本ST Ib基因阳性(10.0%),2份标本为ST Ia基因阳性(2.2%);阳性标本以普通PCR复核,符合率为100%.在9份ST Ib基因阳性和2份ST Ia基因阳性的初始肛拭子标本中,分别有8份和2份分离到ST Ib基因阳性的ETEC和ST Ia阳性的ETEC.结论:建立的实时荧光PCR方法,可用于ETEC菌株ST毒力基因鉴定和临床腹泻粪便标本的直接快速筛检.
