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五味子乙素抑制M146L细胞Aβ42生成的机制研究
目的 研究五味子乙素抑制M146L细胞Aβ42生成的机制.方法 体外培养高效表达Aβ42的M146L细胞株,分别加入不同浓度的五味子乙素(1.67,5.00和15.00 μg·mL-1)、β分泌酶抑制剂(S4562,100.00 μg·mL-1)和γ分泌酶抑制剂(S2188,13.68 μg·mL-1).用CCK-8(cell counting kit-8)比色法检测不同处理对M146L细胞活性的影响;用ELISA法测定M146L细胞所分泌的Aβ42的变化;用Western blotting检测APP的β分泌酶剪切产物C99蛋白的含量变化,结合用β和γ分泌酶活性试剂盒,检测五味子乙素对这两种酶活性的影响.结果 不同处理因素对M146L细胞的存活率均无影响,不具有细胞毒作用.中、高剂量的五味子乙素均不同程度地抑制M146L细胞分泌Aβ42及γ分泌酶的活性,但都不改变M146L细胞C99蛋白的含量及β分泌酶的活性.结论 五味子乙素可抑制γ分泌酶活性,其降低Aβ42生成是通过抑制γ分泌酶的活性来实现的.
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广东海风藤多糖对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白生成的抑制作用
目的 探讨广东海风藤多糖对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白的影响.方法 体外培养稳定转染人类阿尔茨海默病(AD)β淀粉样前体蛋白(APP)基因及突变型早老素1(PS1)基因的CHO细胞系M146L,使之高效产生β淀粉样蛋白42(Aβ_42),建立Aβ_42过度表达的细胞模型.加入待筛选的药物广东海风藤多糖,用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的广东海风藤多糖(0.312 5、0.625、1.25 μg/ml)对M146L细胞的毒性作用,应用酶联免疫法(ELISA)观察细胞分泌的Aβ_42的变化.结果 不同浓度的广东海风藤多糖对M146L存活率没有影响,不具有细胞毒作用.0.625、1.25 μg/ml的广东海风藤多糖对M146L细胞分泌Aβ_42有抑制作用,呈剂量依赖性.结论 一定剂量的广东海风藤多糖对M146L细胞分泌的Aβ_42有明显的抑制作用,其机制有待进一步研究.
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医学生物化学的复兴——肝脏病学和内分泌学关系的升级
转录因子叉头转录因子(FoxO1)可以促进肝内葡萄糖生成.抑制FoxO1基因可以防止实验动物模型糖尿病的发生,这为确定药理学方法来调节此功能提供了动力.在肿瘤的发生中可见Notch信号转导途径的改变,并且Notch的拮抗剂用于癌症治疗方面正在进行临床试验.亚特兰大埃默里大学医学院的Anania报道FoxO1和Notch可以协调调节肝脏葡萄糖代谢.FoxO1和Notch1结合的单倍剂量可以在饮食诱导的胰岛素抵抗中显著提高胰岛素敏感性,肝脏特异性敲除Notch的转录效应器Rbp-J(κ)也可以达到同样的效果.相反,Notch1的功能获得可通过FoxO1依赖途径来促进胰岛素抵抗,并导致葡萄糖-6-磷酸酶的表达.通过γ-分泌酶抑制剂分别在瘦小鼠和肥胖、胰岛素抵抗小鼠进行活体给药,证实γ-分泌酶抑制剂进行Notch信号通路的药理封堵可以增加胰岛素敏感性.数据证实了Notch一个迄今未知的代谢功能,因为Notch抑制剂可以抵消FoxO1介导的过多的肝脏糖异生,表明其对糖尿病的治疗是有益的.
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Notch信号对内耳毛细胞发育的调控机制
近研究认为,Notch信号途径调节的侧抑制参与哺乳动物内耳感觉前体细胞定向分化为毛细胞和支持细胞的过程及其嵌合体的形成~([1]),在该信号途径中,使用γ-分泌酶抑制剂后,Notcb信号途径中级联反应效应被抑制,其下游转录因子Hesl和Hes5的表达减少,间接增加了Math1的表达,因而可能促进内耳毛细胞的发育.本文就Notch信号途径参与毛细胞发育的调控机制作一综述,以期对耳蜗毛细胞再生机理有更深认识.
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Neprilysin--老年性痴呆治疗的新线索
Alzheimer's病(AD)的治疗一直是研究的热点和难点,迄今为止没有找到有效地治疗方法.大多数AD的研究者主要注意在APP裂解形成游离Aβ的酶方面,如果酶活性过强,释放过多的Aβ导致异常的Aβ在脑内沉积.然而,近来一些研究者正从不同方面解决这个问题,寻找一种肽降解酶.假如此酶活性下降也可能导致Aβ堆积,比起Aβ分泌途径,Aβ降解途径的确是一个重要发现.2001年5月25日出版的292(5521)
上发表了Nobuhisa Iwata, Jean Marx and Saido等的文章,描述了在小鼠脑中发现一种叫Neprilysin的蛋白酶--自然降解Aβ的酶直接证据,它在清除脑内Aβ过程中可能起着重要作用.在此之前Saido小组证实Neprilysin可能是一个Aβ降解酶,他们发现一个中性的内肽酶--是Aβ的降解主要限速酶.用3H/14C放射标记人型Aβ1-42注入8周的Neprilysin纯合组,杂合组和缺失组小鼠海马内,并分别同时用Neprilysin阻断剂Thiorphan对照观察,然后用HPLC、液闪分析和ELISA等分析了Aβ1-42和降解产物,发现Neprilysin基因与Aβ水平之间的剂量效应.Neprilysin有强的降解Aβ活性,为了观察小鼠降解Aβ肽的能力,敲除了小鼠的Neprilysin基因,发现降解Aβ肽的能力非常低,用正常小鼠与基因敲除小鼠交配,产生的小鼠刚好有一个Neprilysin基因拷贝,这些动物出现的结果介于二者之间.这意味着Neprilysin的活性即使是部分减少(可以随老化引起)也可以使Aβ的升高,其结果是产生AD.Saido还发现,天然Aβ水平在Neprilysin基因敲除小鼠脑中有明显的区域性,由高到低依次是海马,皮层,丘脑/纹状体和小脑,这与人类AD的Aβ在脑中沉积形成老年斑的高低高度相关联.这与Patrick McGeer的发现Neprilysin水平与导致AD的可能性是一致的,他们分析了死于AD病人脑中Neprilysin水平,发现高老年斑区Neprilysin水平低.McGeer总结说:假如你有适当的Neprilysin,你将永远不会有Aβ的聚集.尽管生物化学的证据提示:Neprilysin的缺乏可能导致Aβ,临床病例的研究要解决二个问题:一是Saido称之为首要是建立Neprilysin基因缺失,产生老年斑,终导致AD病的小鼠模型;另一个是找到人类Aβ基因相关的遗传学依据.第二个问题现在有了新的进展,Tanzi小组发现了Neprilysin与人类AD相关的遗传学依据:Neprilysin基因定位在3号染色体上,有5个编码区.Neprilysin脑Aβ水平的基因剂量效应,促使我们考虑它临床应用的可能性.用Aβ降解酶活性上调和Aβ分泌酶活性的下调(如分泌酶抑制剂)的治疗策略,这二种策略可以结合在一起达到大治疗效果.这些研究无疑将给AD的治疗提供了重要的和新的线索,以至于人类终能够驯服AD这个灾难性疾病. -
Notch信号可调节人脐带间充质干细胞CD105表达、成骨分化和免疫活性
间充质干细胞（ MSCs）是一种具有多向分化特性的多能干细胞，有一整套相对特异的膜表面标志物，且具备独特免疫调节功能。 IDO1，一种色氨酸分解酶，是介导MSCs免疫调节功能的关键分子。为探讨MSCs关键特性的调节作用涉及Notch信号及其它潜在信号通路，Na等使用γ-分泌酶抑制剂I（ GSI-I；不仅能够抑制Notch信号，同时可降低泛素蛋白酶的活性）对人脐带间充质干细胞（ hUC-MSCs）进行处理，结果表明，GSI-I可引起细胞凋亡，减少膜表面标志物CD73、CD90和CD105的表达，抑制成骨细胞分化，减弱人脐带间充质干细胞对Th1淋巴细胞增殖的抑制作用和IFN-γ对IDO1表达的抑制作用。通过对GSI-I在Notch信号及蛋白酶体的抑制作用所致结果进行辨识，可以进一步观察到CD105表达下降及成骨细胞分化抑制导致Notch信号及蛋白酶体受到抑制，却不会因此诱发细胞凋亡。然而，Notch信号的抑制（而不是蛋白酶体的抑制）使得GSI-I在Th1淋巴细胞增殖中发挥重要作用，这可能是通过降低IDO1启动子活性来实现的。综上所述，Notch信号可以代表一种十分重要的细胞信号，它能够对MSCs的多项关键特性，尤其是免疫调节活性进行调节。
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阿尔茨海默病的药物治疗进展
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是发生在老年期及老年前期的一种原发行退行性脑病.由于其发病原因和机制尚未阐明,治疗方案及治疗药物缺乏特异性.目前AD的治疗主要应用胆碱脂酶(AchE)抑制剂,同时辅以抗免疫、抗炎、抗氧化剂、激素替代疗法以暂时缓解患者的认知功能.近年来,随着分子生物学、神经生物学及行为科学等学科知识和研究手段的迅速发展,AD病变机制的研究取得了很大进展,一些针对AD病因的治疗药物如分泌酶抑制剂,防止tau蛋白过度磷酸化,Aβ抗体及Aβ疫苗为AD病人带来了新的希望.现就AD的治疗现状综述如下.
