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苦杏仁苷联合羟基红花黄色素A对IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞的影响
本文探讨了中药单体苦杏仁苷(amygdalin)联合羟基红花黄色素A(HSYA)对IL-1β诱导退变的大鼠椎间盘软骨终板细胞的影响,寻找可能的作用机制.从1月龄SD大鼠椎间盘中分离软骨终板并培养软骨终板细胞,经鉴定后选择第3代软骨终板细胞用于实验,随机分为正常组、诱导组、苦杏仁苷组、羟基红花黄色素A组和联合用药组.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,Real-time PCR (RT-PCR)检测Aggrecan、Col2 α1、Col10 α1、MMP-13、IL-1βmRNA的表达,细胞免疫荧光检测Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原的表达.结果表明,与正常组比较,IL-1β诱导组软骨终板细胞增殖降低,细胞凋亡增加(P＜0.05),下调Aggrecan、Co1 2α1 mRNA的表达,上调CoⅠ 10 α1、MMP-13、IL-1β mRNA的表达(P＜0.05);同时Ⅱ型胶原蛋白的表达降低、Ⅹ型胶原蛋白的表达升高.与IL-1β诱导组比较,苦杏仁苷组、羟基红花黄色素A组和联合用药组均能在抑制软骨终板细胞凋亡的同时促进软骨终板细胞的增殖(P＜0.05),上调Aggrecan、Col 2 α1 mRNA的表达的同时下调Col 10 α1、MMP-13、IL-1β mRNA的表达(P＜0.05);促进Ⅱ型胶原蛋白的表达增强、Ⅹ型胶原蛋白的表达降低.联合用药组作用的效果明显优于苦杏仁苷组、羟基红花黄色素A组(P＜0.05).苦杏仁苷联合羟基红花黄色素A可抑制IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞发生退变,优于苦杏仁苷、羟基红花黄色素A单独用药.
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LC-MS/MS法同时测定人尿液中苦杏仁苷和芍药苷及其尿药排泄研究
建立苦杏仁苷和芍药苷尿药浓度的LC-MS/MS同时测定方法,研究健康中国受试者静脉滴注活血通络粉针剂后其体内苦杏仁苷和芍药苷的人体尿药排泄特征.尿液样品经甲醇沉淀蛋白并稀释后,采用HederaODS-2色谱柱分离,流动相为乙腈-5 mmol·L-1醋酸铵水溶液(含0.05％甲酸)(20:80);质谱采用Turbo-Ionspray电喷雾离子源和正离子多反应监测方式.尿液中杂质不干扰样品的测定,苦杏仁苷和芍药苷的标准曲线线性范围为0.03～40 μg·mL-1,线性关系良好;高、中、低三种浓度的日间和日内精密度均小于15.0％;无介质效应、残留效应;稳定性良好.9名健康受试者单次静脉输注活血通络粉针6 g后,苦杏仁苷和芍药苷主要以原形经尿液排出体外,平均累计排泄率分别为79.6％和48.4％.建立的LC-MS/MS分析方法适用于健康中国受试者体内苦杏仁苷和芍药苷的尿药排泄研究.
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HPLC法测银拗合剂中苦杏仁苷的含量
目的 建立银拗合剂中苦杏仁苷的含量测定方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-乙腈-水(25:5:70),流速为0.50 ml/min,检测波长225 nm.结果 苦杏仁苷在0.10～2.00μg范围内呈良好的线性关系,r=0.999 4;平均回收率为97.1%、RSD=3.05%.结论 本方法准确、重现性好、操作简便,适用于该药物的质量控制.
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高效液相色谱-质谱法同时测定天山花楸枝叶及果实中苦杏仁苷和金丝桃苷的含量
目的:建立同时测定天山花楸枝叶及果实中苦杏仁苷和金丝桃苷含量的高效液相色谱-质谱分析方法.方法:样品经乙醚回流脱脂、甲醇回流提取后,经Hypersil BDS C18(150mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1％甲酸为流动相,在流速为0.8 mL·min-条件下分离,采用电喷雾离子源(ESI),负离子扫描,选择性离子(SIM)检测.结果:苦杏仁苷在1.26～ 37.8 μg·mL-,金丝桃苷在1.216～36.48 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系,相关系数分别为0.999 6和0.999 8；苦杏仁苷和金丝桃苷的检出限分别为0.01和0.004 μg· mL-,定量限分别为0.033和0.015 μg·mL-1；回收率分别为98.0％～102.8％和98.9％ ～102.0％；相对标准偏差(RSD)均小于2％.结论:本方法灵敏、快速、专属性强,可以用于天山花楸中苦杏仁苷和金丝桃苷的检测.
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新疆桃仁中苦杏仁苷含量测定新方法研究
目的:建立桃仁中苦杏仁苷灵敏度高、适用性强的高效液相色谱测定新方法,并对收集于新疆地区的41批代表性药材进行含量测定.方法:样品采用索氏提取器脱脂、加入70%甲醇回流的方法灭酶和提取,色谱柱为Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5 μm),以水-乙腈为流动相梯度洗脱,流量1 mL·min-1,柱温35 ℃,检测波长210 nm.结果:方法学验证各项指标均符合要求,41批新疆桃仁中苦杏仁苷含量在2.05%~3.62%范围内,平均含量为3.04%±0.29%.结论:所建立测定方法简便、稳定、易行,可用于新疆桃仁中苦杏仁苷含量测定和质量控制.
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HPLC-MS/MS法测定桑菊感冒片中5种成分的含量
目的:建立高效液相色谱-串联质谱法同时测定桑菊感冒片中芦丁、绿原酸、连翘苷、桔梗皂苷D和苦杏仁苷的含量.方法:采用Waters Atlantis C18色谱柱(2.1 mm×150mm,5μm),以乙腈(A)-0.1％甲酸(B)为流动相,梯度洗脱(0 ～3 min,20％A;3～ 15 min,20％ A→60％A;15～23 min,60％A;23～24 min,60％ A→20％A;24～30 min,20％ A),流速0.2 mL·min-1,柱温35℃,采用电喷雾离子源(ESI),以多反应监测(MRM)方式进行正离子扫描.结果:芦丁、绿原酸、连翘苷和桔梗苷D分别在浓度0.01 ～2 μg·mL-1的线性范围内线性关系良好(r ＞0.999),苦杏仁苷在浓度0.25 ～ 50μg·mL-的线性范围内线性关系良好(r＞0.999),平均回收率(n=6)分别为98.89％、99.80％、100.61％、99.35％、99.51％,RSD％分别为0.84％、0.90％、1.19％、1.28％、0.86％.测定样品3批,5个成分的测定结果分别为:批号S154601:0.2605、0.2721、0.1848、0.1693、4.8203 mg·g-;批号S154602:0.2440、0.2573、0.1709、0.1712、4.7639 mg·g-1;批号S154603:0.2679、0.2788、0.1900、0.1778、4.8725 mg·g-1.结论:所建立的方法准确、可靠、重复性好,灵敏度高,为桑菊感冒片的全面质量控制提供科学依据.
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HPLC梯度洗脱法同时测定金嗓散结胶囊中6种主要成分的含量
目的:建立同时测定金嗓散结胶囊中6种主要成分的HPLC梯度洗脱方法.方法:选用Venusil MP C18色谱柱;流动相:乙腈(A)和0.03%磷酸溶液(B),梯度洗脱:0~9 min 15.0%A,9~16 min 15.0%→21.0%A,16~22 min 21.0%→36.0%A,22~30 min 36.0%→55.0%A,30~37 min 55.0%→75.0%A,37~45 min 75.0%→15.0%A;流速:0.8 mL·min-1;柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:210 nm(苦杏仁苷、哈巴苷)、280 nm(安格洛苷C、哈巴俄苷)和208 nm(24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B).结果:苦杏仁苷、哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷、24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B分别在一定的线性范围内线性关系良好(r≥0.9992);平均回收率96.77%~100.05%,RSD值0.60%~1.55%;精密度和重复性良好;室温下金嗓散结胶囊供试品溶液在12 h内稳定.结论:该方法操作简便,结果准确,可用于金嗓散结胶囊中6种主要成分含量的同时测定.
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RP-HPLC同时测定十味活血丸中苦杏仁苷和羟基红花黄色素A的含量
目的 建立同时测定十味活血丸中苦杏仁苷和羟基红花黄色素A含量的RP-HPLC法.方法 以十味活血丸为研究对象,采用Diamonsil C18柱(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.05%酸(26:74),流速1.0 mL·min-1,检测波长210nm,柱温35℃.结果 苦杏仁苷和羟基红花黄色素A质量浓度分别在2.40～24.0g·L-1(r=0.999 8,n=6),1.76～17.6g·L-(r=0.999 7,n=6)内与峰面积呈良好线性关系;精密度实验RSD分别为1.1%,0.59%;重复性实验RSD分别为0.74%,0.89%;平均加样回收率(n=9)分别为99.9%(RSD=1.2%)和99.1%(RSD=1.5%).结论 本测定方法简便、快捷、准确,为十味活血丸质量评价提供依据.
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橘红丸中苦杏仁苷的定性、定量分析方法的研究
目的建立橘红丸中苦杏仁苷的定性、定量分析方法.方法采用薄层色谱法对橘红丸中苦杏仁苷进行定性鉴别;并用高效液相色谱法测定苦杏仁苷的含量.结果在橘红丸薄层色谱中,展开剂:为氯仿-甲醇-冰醋酸-水(20∶10∶3∶1),可清晰检出苦杏仁苷斑点;HPLC测定橘红丸中苦杏仁苷含量,苦杏仁苷线性范围1.1～18.0 μg (r=0.999 8),平均回收率为97.3%(RSD=2.8%),灵敏度高,结果准确,重现性好.结论方法简便可行,可用于该制剂的质量控制.
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桃仁药材质量评价法的研究
目的建立桃仁药材综合质量评价方法.方法用HPLC测定了市售桃仁药材13个样品、不同自制炮制品及不同贮藏年度苦杏仁中苦杏仁苷含量,并考察了市售药材的脂肪油、醇浸出物含量、灰分及酸不溶性灰分、干燥失重等常规理化试验项目.结果市售生品药材苦杏仁苷含量与炮制药材间差异明显;而不同自制炮制品的苦杏仁苷含量差异不明显;不同贮藏年度的市售桃仁药材生品带皮妥善保存,苦杏仁苷含量至少13年内无明显变化;对市售药材的常规试验项目测定结果表明各种炮制品间的差异较大.结论炮制加工过程是影响桃仁药材质量的关键因素,同时有必要制订桃仁药材的常规理化试验项目,加强药材综合质量控制.
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RP-HPLC法测定复方百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量
目的 建立复方百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量测定方法.方法 采用RP-HPLC法,色谱柱为Phenomenex Prodigy ODS3,流动相为甲醇-水(14∶86),流速1.0mL·min-1,检测波长215nm.结果 苦杏仁苷在0.100～1.305μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.79%,RSD为1.16%.结论 本法简便、快速、灵敏、准确,可作为复方百部止咳糖浆的质量控制标准.
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HPLC测定益肺胶囊中苦杏仁苷的含量
建立益肺胶囊中苦杏仁苷的含量测定方法.采用HPLC法,DiamonsilTM C18色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶8∶82);流速为0.8mL·min-1;检测波长为210nm.进样量在0.43～4.26μg范围内苦杏仁苷与峰面积响应值呈良好的线性关系,r=0.9999;平均回收率为99.6%,RSD为1.0%(n=6).本方法操作简便,结果准确,灵敏度高,重现性好,能有效控制益肺胶囊的质量.
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HPLC法测定苦杏仁中苦杏仁苷含量的方法研究
目的 建立苦杏仁中苦杏仁苷的HPLC测定方法.方法 通过单因素考察确定样品处理方法,建立HPLC测定方法并进行方法学考察,与药典法进行比较试验.结果 用HPLC法测定苦杏仁中苦杏仁苷含量高于药典的滴定法,方法学考察各项指标均符合要求.结论用HPLC法测定苦杏仁中苦杏仁苷含量灵敏度高、重复性好,样品处理方法简便可行,可代替滴定法.
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桃仁定性鉴别与含量测定研究
目的 建立桃仁药材定性鉴别与含量测定方法.方法 采用薄层色谱法以苦杏仁苷为对照对桃仁进行定性鉴别;以HPLC法对其中的苦杏仁苷进行含量测定:色谱柱:Kromasil C18;流动相:甲醇-水(20:80);柱温:30℃;流速:1.0mL·min-1;检测波长210nm.结果 桃仁供试品的薄层色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点.苦杏仁苷峰分离良好,苦杏仁苷浓度在0.033～2.116μg范围内线性关系良好,r=1.0000,平均回收率为96.11%,RSD为2.57%;结论本方法准确、可靠,可用于桃仁的定性鉴别和含量测定.
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麻黄-杏仁药对配比与有效成分含量变化规律研究
目的 探讨不同配比麻黄-杏仁药对中麻黄碱、伪麻黄碱与苦杏仁苷多组分含量的变化规律.方法 选用U6(64)均匀设计表安排配比,采用高效液相色谱法测定麻黄-杏仁药对不同配伍比例中麻黄碱、伪麻黄碱与苦杏仁苷的含量.结果 经方法学考察,麻黄碱回归方程为y=212.36x+0.6658,R2=0.9995;伪麻黄碱回归方程为y=184.95x+0.7268,R2=0.9990;苦杏仁苷回归方程为y=153.5x+2.4961,R2=0.9990;麻黄与杏仁配伍后,随着配伍比例的变化,麻黄碱、伪麻黄碱的含量与麻黄用量、苦杏仁苷与杏仁用量之间均呈现良好的线性关系.结论 该方法简便、准确、重现性好;麻黄-杏仁药对中有效成分的含量与用药量成正相关,而与配伍比例无明显的相关性.
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HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量
目的 测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量,为止咳定喘丸的质量研究提供依据.方法 采用高相液相色谱(HPLC)法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量;使用Agilent SB-C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1％磷酸(8:92)为流动相,流量1.0 ml/min.结果 建立了HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量,苦杏仁苷进样量在0.0824～2.0600 μg范围内,线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为99.03％,RSD=2.25％(n=6).结论 该方法准确、重复性好,可用于止咳平喘丸的质量控制.
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苦杏仁苷对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节滑膜ASIC3表达的影响
目的 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)病程中由于炎症导致关节局部组织酸化,酸敏感离子通道(acid-sensitive ion channels,ASICs)表达与大鼠关节软骨的破坏密切相关.本研究从多途径观察苦杏仁苷对胶原诱导性关节炎(typeⅡcollagen induced arthritis,CIA)大鼠关节滑膜的免疫应答调节,探讨苦杏仁苷抗RA的作用机制.方法 选取45只Wistar雌性大鼠,随机抽取8只为空白对照组.35只造模成功的CIA大鼠又随机分为模型组5只,雷公藤多甙组(即阳性对照药组)、苦杏仁苷高剂量组、苦杏仁苷低剂量组各10只.空白对照组和CIA模型组予以0.9％生理盐水,雷公藤多甙组予以雷公藤多甙1 mg/(kg·d),苦杏仁苷高剂量组予以120 mg/(kg·d),苦杏仁苷低剂量组予以60 mg/(kg·d),1次/d连续灌胃给药28 d.经腹腔麻醉,股动脉采血,常规分离血清用于IL-1β、sICAM-1检测;分离左膝关节滑膜组织用40 g/L多聚甲醛固定作为HE染色标本;分离右膝关节滑膜组织-80℃中保存用于Western blot ASIC3蛋白检测.同时提取脑组织于-80℃中保存作为阳性对照.结果 HE染色显示CIA模型组滑膜细胞排列疏散、紊乱、增生,大量的炎细胞浸润;苦杏仁苷高剂量组、低剂量组和雷公藤多甙组滑膜轻度增生,炎性细胞浸润明显减少,外周血中IL-1β、sICAM-1水平均有明显下降,滑膜中ASIC3蛋白表达也明显下降,与CIA模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与空白组比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 苦杏仁苷能有效通过抑制CIA大鼠外周血中炎性细胞因子IL-1β、sICAM-1的表达水平,以及下调滑膜ASIC3蛋白的表达,干扰对关节滑膜的损伤,起到抗炎和免疫抑制作用,可能是苦杏仁苷的抗炎镇痛和保护软骨作用的机制之一.
关键词： 苦杏仁苷 Ⅱ型胶原诱导性关节炎 关节滑膜 酸敏感离子通道3 -
不同贮藏条件对桃仁饮片酸败度及苦杏仁苷含量的影响
目的 考察不同贮藏条件对对桃仁饮片酸败度及苦杏仁苷含量的影响,为进一步开展桃仁贮藏养护方法的研究奠定基础.方法 以不同贮藏条件分组贮存桃仁药材2年,每隔4或6个月检查各组桃仁饮片酸败度,并测定苦杏仁苷含量.结果 在两年贮藏期间,随着贮藏时间的推移,各贮藏条件下,桃仁饮片的酸值和羰基值均呈现上升趋势,而苦杏仁苷含量呈现明显的下降趋势.以真空包装或低温条件下贮藏的桃仁饮片其酸败程度较轻,苦杏仁苷含量较为稳定.结论 根据酸败度及苦杏仁苷含量变化规律,桃仁饮片宜以真空包装,在低温条件下贮藏.
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十七味大活血胶囊的质量标准研究
目的 建立十七味大活血胶囊的质量标准.方法 显微法对延胡索进行鉴别;薄层色谱法对三七、大黄进行鉴别;HPLC法测定丹酚酸B、苦杏仁苷的含量.丹酚酸B色谱条件为:以C18为色谱柱,流动相为乙腈-0.1％甲酸溶液(22∶78);检测波长为286 nm;苦杏仁苷色谱条件为:以C18为色谱柱,流动相为甲醇-水(20∶80);检测波长为210 nm.结果 显微鉴别粉末特征明显;薄层鉴别斑点清晰,阴性无干扰;丹酚酸B在17.23～172.3 μg/mL范围内线性关系良好(r=1),平均回收率为97.9％,RSD为1.1％;苦杏仁苷在11.04～110.38 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为100.1％,RSD为1.5％.三批样品中两种成分的平均含量分别为1.57、0.41 m∥粒.结论 该法准确、简单,适用于十七味大活血胶囊的质量控制.
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尤脂平胶囊的工艺研究
目的 探讨尤脂平胶囊中茜草、山楂、桃仁、海藻、地龙、熊胆七味药材的提取工艺.方法 采用正交实验法,以大叶茜草素、苦杏仁苷的含量为提取工艺评价指标,分别以3个正交设计表考察醇提、水提、醇沉3个程序的各个因素对提取工艺的影响.结果 茜草、山楂以80%乙醇回流2次,溶剂倍数分别为7、6倍,回流时间依次为2、2 h.桃仁、海藻、地龙药材与上渣混合加水煎煮2次,加水倍数分别为8倍,煎煮时间依次为2、2 h,浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃),加入乙醇使得含醇量达60%,冷藏24 h,过滤得.结论 提取工艺条件合理可行.
