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生物素N-羟基丁二酰亚胺酯标记抗rhIFN-α单克隆抗体
目的探讨生物素N-羟基丁二酰亚胺酯标记单克隆抗体的方法.方法用硫酸铵纯化的抗rhIFN-α单克隆抗体,将2.0ml抗体(6.0 mg/ml)和18 μl BNHS(38 mg/ml)混合,室温反应4小时,加入48μl 1M NH4Cl,10分钟后将反应混合液装入透析袋对PBS透析,然后用生物素-亲和素ELISA法测定所制备的生物素化抗体活性.结果该法制备的生物素化抗体活性高,用于检测rhIFN-α敏感性好.结论该生物素化抗IFN-α单克隆抗体的制备方法具有制备简单,稳定性好等优点.
关键词： 生物素 BNHS 抗IFN-α单克隆抗体 ELISA -
IFP微孔板试剂盒测定保健食品中生物素的含量
采用IFP微孔板试剂盒检测保健食品中生物素的含量,结果表明,相比传统微生物法,方法操作简便、重复性高、结果准确.
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免疫磁珠法分离preS1结合蛋白
目的:用免疫磁珠分离人肝癌细胞(HepG2)细胞膜上与乙型肝炎病毒(HBV) preS1肽段结合的蛋白,建立快速分离膜受体蛋白的方法.方法:提取HepG2细胞膜蛋白,以生物素标记的preS1肽段为钓饵,与提取的膜蛋白4℃孵育过夜,加入链霉亲和素标记的磁珠,洗涤磁珠后收集结合蛋白,通过SDS-PAGE电泳分离结合蛋白.结果:用磁珠的方法所收集到的结合蛋白,通过SDS-PAGE电泳分离出了多条条带,比较明显的45～97 ku有9条,＞97 ku处有5条,＜20 ku处有2条.结论:通过免疫磁珠分离法可有效的获得HepG2细胞膜上preS1肽段的结合蛋白.
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优化制备生物素化超声微泡的实验研究
目的 优化制备粒径小、稳定性好的靶向微泡前体-生物素化微泡,并评价其理化性质及显影效果.方法 选用不同膜材料配比制备生物素化脂质微泡,进行分组(A-E组)对照研究,粒径分析仪、Malvern表面电位仪评价各组理化性质;选用不同溶酶液,分组(1～3组)评价对微泡稳定性的差异;超声诊断仪下观察各组生物素化微泡的显影效果.结果 在A-E组中,A、C、E3组有较明显的差异(P＜0.05):(1)西林瓶中可见脂质呈不同分层状态;(2)随DPPC的摩尔比不断增加,MPEG200、DPPA摩尔比不断减小,微泡的平均粒径逐渐减小,粒径分布逐渐均一,浓度逐渐增高,Zeta电位逐渐变小且更加稳定;(3)使用三羟甲基氨基甲烷,甘油,丙二醇复合溶酶液制备的微泡微相互融合慢、粒径变化小、破裂少、浓度降低少.结论 按DPPC∶MPEG200∶DPPA∶DSPE-PEG2000-Biotin 90∶5∶5∶10且选用复合溶酶液优化制备的生物素化脂质微泡是佳的淋巴系统靶向脂质微泡制作前体.
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人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立
[目的]建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法.[方法]亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体.将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA( BA-ELISA).对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度.[结果]线性检测范围为(0.42 ～ 50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好；灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0％.该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义.与化学发光法相比较,回归方程为y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义.[结论]建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测.
关键词： 癌胚抗原 乳腺癌 生物素-亲和素酶联免疫吸附法 生物素 亲和素 -
盐酸克伦特罗生物素化单链抗体在大肠埃希氏菌中的表达
目的 提取盐酸克伦特罗(CLB)生物素化抗体片段蛋白进行表达,为下一步纯化及农兽药品快速检测奠定基础.方法 确定一株生物素化CLB噬菌体抗体“pHEN1-BHNS-CLB1”对其进行蛋白表达,即从噬菌粒“PHEN1-BHNS-CLB1”切下seFv基因片段,亚克隆至能引导可溶性表达的载体pCANTAB5E上,完成了重组质粒的构建,将所构质粒转化大肠埃希氏菌感受态细胞BL21.命名“5E-BHNS-CLB1”,并对“5E-BHNS-CLB1”进行PCR及酶切鉴定后,测序分析.结果 ELISA结果证明其具有较好的亲和性,竞争抑制ELISA、与gp120蛋白及三聚氰胺的交叉反应ELISA结果均证明其具有很好的特异性,片段大小与预想目的片段大小一致,SDS-PAGE及Western blotting的结果显示,其分子量大小与目的一致,并能与抗E-tag标签抗体结合显色.结论 说明表达的蛋白能与表达载体5E后带有E-Tag标签的短肽作用,含有E-Tag标签,是我们要表达的目的蛋白,为下一步纯化蛋白创造了条件.
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大鼠发育过程中伏隔核神经元的电生理学和形态学特性
为探讨发育过程中伏膈核神经元的形态学和电生理学特性,运用脑片膜片钳全细胞记录技术结合细胞内标记技术对出生后3 d(P3)30 d(P30)的伏隔核神经元进行了研究.结果表明:出生后随着动物的不断成熟伏隔核神经元的树突野半径和树突总长度逐渐增长,树突分支逐渐增多;静息膜电位(RMP)和输入阻抗(IR)降低;动作电位的幅度升高,时程降低,突触后电流则无显著性变化.但在P7以前,57.9%的神经元对刺激无反应,这类神经元主要见于幼稚动物,其静息膜电位与输入阻抗较高.提示,发育过程中伏隔核神经元的形态和功能成熟密切相关,幼稚与成熟神经元在细胞形态学和电生理学以及突触功能上的显著差异表明幼稚和成熟神经元对信号的输入、输出整合不同.
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人生物素基因的原核表达及纯化
目的 构建生物素原核表达载体,获取同源性、可溶性、高纯度的重组生物素融合蛋白,为生物素的深入研究及肿瘤的早期诊断奠定基础.方法 从胃癌细胞中提取RNA,经RT-PCR扩增,克隆出生物素基因;用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ对生物素DNA和载体pET32进行双酶切,构建pET32-生物素重组质粒;将重组质粒转化BL21感受态细胞,通过氨苄青霉素抗性、PCR和重组质粒双酶切筛选重组子转化菌落,经DNA测序及BLAST比对,确认生物素基因序列正确性以及插入pET32质粒的位点和方向;用IPTG诱导表达,Western-Blotting鉴定,用Ni2+金属螯合层析柱纯化重组融合蛋白.结果 通过RT-PCR,经1%的琼脂糖凝胶电泳检测,扩增的生物素DNA片段与预期大小一致.经双酶切及DNA测序鉴定,生物素DNA定向插入了pET32质粒.用重组质粒转化大肠杆菌BL21、诱导表达和纯化目的蛋白.经Western-Blotting鉴定,所诱导的蛋白为重组生物素融合蛋白.结论 成功构建了生物素基因原核表达载体,表达和纯化了生物素融合蛋白.
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HPLC法测定复合维生素B片中的微量叶酸、维生素B12和生物素
目的:应用高效液相色谱(HPLC)技术,建立同时测定复合维生素B片中微量叶酸、维生素B12和生物素含量的方法.方法:采用Alltima C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以50 mmol·L-1磷酸二氢铵溶液(磷酸调至pH 3.0)-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长200 nm,柱温30℃.结果:在本方法中,3个成分的线性关系良好,线性相关系数(r)为1.000;精密度良好,RSD小于1.9％;回收率良好,叶酸、维生素B12和生物素的3个加样浓度的平均回收率(n=9)分别为100.6％、99.7％和99.7％;稳定性良好,3种成分在24 h内保持稳定,RSD小于1.0％.3批复合维生素B片中叶酸、维生素B12和生物素的含量测定结果分别为480.9～493.2、47.31～48.38、50.80～52.63μg·片-1.结论:该方可作为复合维生素B片中微量叶酸、维生素B12和生物素同时测定的方法.
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婴幼儿配方奶粉中生物素含量的快速微生物检测方法研究
建立了一种基于微生物法检测婴幼儿配方奶粉中生物素含量的快速检测方法。采用该方法检测生物素时其标准曲线相关系数为0.9997，平行测试的RSD为2.89%-4.92%，加标实验回收率在90.3%-97.3%之间。与传统国标方法相比，该方法操作简单，优化了样品前处理过程，缩短了实验周期，提高了效率。与试剂盒法相比，该方法的准确度和重现性良好，且经济实用，适合在实验室推广应用。
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生物素酶缺乏症的临床分析与基因诊断1例及文献复习
目的 探讨生物素酶缺乏症的临床特征、诊断与治疗方法 .方法 患儿男,2个月,于2016年4月因"间断抽搐1个月"收入陆军总医院附属八一儿童医院.通过血串联质谱分析、尿有机酸分析、生物素酶活性检测、全外显子芯片捕获及高通量测序等技术进行诊断,总结分析其临床表现和诊治过程.结果 视频脑电图显示多灶性放电,片断样高峰失律.口服丙戊酸钠后症状加重,托吡酯效果不佳.血串联质谱分析示游离肉碱、丙酰肉碱、羟基异戊酰肉碱浓度升高.尿有机酸分析示3羟基异戊酸排泄量显著增高,并伴有3羟基丙酸、甲基枸橼酸、焦谷氨酸的增高.生物素酶活性分析示0.076 pmol?(分钟·3 mm).全外显子测序显示BTD基因外显子区域c.637delC缺失突变,c.491dupG插入突变,导致氨基酸改变p.H213fs移码突变,p.R164fs移码突变,为复合杂合突变,父母验证结果 显示此双杂合突变分别来自于父母.口服生物素10 mg?d和左卡尼汀10 ml?d,患儿抽搐控制.出院后家长自行停用抗癫痫药物.4个月龄时复诊,无抽搐,视频脑电图正常,Gesell发育评估显示发育商85分.结论 婴儿期发病的难治性癫痫并伴有发育迟缓时需注意生物素酶缺乏症的可能,生物素治疗疗效显著,生物素酶活性测定及基因突变检测可协助确诊.
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免疫磁珠-ELISA法在人层粘连蛋白检测中的应用
目的以纳米免疫磁珠为载体,建立检测人层粘连蛋白的酶联免疫测定方法.方法以本室自制的带羧基的纳米免疫磁珠经碳化二亚胺偶联链酶亲和素为固相载体,以生物素化抗人LN单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的抗人LN单克隆抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测人层粘连蛋白,考察该法的的灵敏度、变异性、准确性及与传统板式酶联免疫测定法比较.结果该法检测人LN与统板式酶联免疫测定法灵敏度为分别2.5μg/L和10μg/L,批内变异系数分别为4.06%和7.0%,批间变异系数分别为4.47%和8.1%,回收率分别为98.2%和108.6%,同一标本两法检测两者结果无显著性差异(P＞0.05),相关性良好(r＞0.98).结论免疫磁珠-ELISA测人层粘连蛋白准确性和重复性好,灵敏度高、简单快捷,优于传统板式酶联免疫测定法.
关键词： 层粘连蛋白 免疫磁珠-酶联免疫吸附试验 生物素 -
吃水果≠补充维生素
维生素的种类很多根据维生素的溶解性可将其分为两大类,脂溶性维生素和水溶性维生素.脂溶性维生素:维生素A、维生素D、维生素E、维生素K;水溶性维生素:维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B6(吡哆醇)、维生素B12(氰钴胺素)、泛酸、叶酸、烟酸、胆碱、生物素和维生素C(抗坏血酸).
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HPLC测定注射用水溶性维生素中生物素、叶酸及对羟基苯甲酸甲酯
目的建立高效液相色谱法同时测定注射用水溶性维生素中的生物素(biotin)、叶酸(folic acid)及对羟基苯甲酸甲酯(methyl-p-hydroxybenzoate)含量的方法.方法采用Puritex C18(2.50m×4.6mm, 5μm);以3.5mmol·L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调到pH3.0):乙腈(90:10,V/V)为流动相;流速为1.0mL·min-1;检测波长为210nm;柱温为45℃.结果生物素(biotin)、叶酸(folic acid)及对羟基苯甲酸甲酯(methyl-p-hydroxybenzoate)的检测限分别为:0.5、0.2、0.2ng,线性范围分别为0.25-25.14μg·mL-1 1.56-156.16μg·mL-1,4.34-433.76μg·mL-1,平均回收率都在99.35%以上.结论该方法简单、快速、灵敏度高、重复性好.
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水溶性维生素的功能
水溶性维生素,主要是B族维生素和维生素C.由于属于B族维生素的品种多而称维生素B复合物,主要包括有维生素B1(也叫硫胺素、抗"脚气病"维生素)、维生素B2(也叫核黄素)、泛酸(也叫遍多酸)、维生素B6(也叫吡哆醇、吡哆胺)、维生素PP(也叫尼克酸、尼克酸胺、抗癞皮病维生素)、维生素H(也叫生物素),维生素B12(也叫钴维生素)是惟一含金属钴的维生素.
