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99Tcm-DTPA-生物素-亲和素预定位技术用于肿瘤放免显像
目的评价用99Tcm替代111In标记生物素-亲和素系统(BAS)在肿瘤放免显像预定位中的价值.方法 DTPA-生物素溶液中加入99Tcm淋洗液,室温放置10 min.荷LA-795肺癌鼠分成荷瘤7 d肺无转移组和荷瘤15 d肿瘤肺转移组.采用三步法预定位技术给药,先注射生物素化C50抗体,1 d后注射亲和素,再过2 d注射99Tcm-DTPA-生物素,设对照和空白组;并与常规99Tcm直接法标记C50抗体放免显像比较.结果 99Tcm-DTPA-生物素的标记率大于90%,亚锡量是影响标记率的重要因素.注射后2 h,三步法组肿瘤摄取量为(1.35±0.45)%ID/g,瘤/血比值(T/B)为5.86,瘤/肌肉比值(T/M)为8.43.而对照直接注射99Tcm-DTPA-生物素组的T/B为0.85,T/M为1.1.99Tcm直接法标记C50放免显像组在注射后8 h的T/B为1.65,T/M为2.0.注射后2 h平面显像,三步法组肿瘤显影清晰,余各组肿瘤均未显影.结论 99Tcm-DTPA-生物素可用于三步法肿瘤放射免疫显像,并优于直接标记法.
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基于双纳米金标记的侧流免疫层析法检测人骨钙素蛋白
传统的基于纳米金的侧流免疫层析法灵敏度不高.为了克服这个缺点并且不增加额外的步骤,该研究通过双纳米金标记技术结合生物素-链霉亲和素蛋白放大系统,并利用金标定量阅读仪达到快速定量检测骨代谢标志物(以骨钙素为例)的目的.该试纸条的第一结合垫包被链霉亲和素-纳米金探针,第二结合垫包被抗骨钙素单抗Ab14318-纳米金-生物素化单链核苷酸探针,硝酸纤维素膜上的检测线包被抗骨钙素单抗Ab14319,质控线上包被羊抗鼠IgG.通过对该侧流免疫层析试纸条与电化学免疫测定法(ECLIA)的相关性研究发现,两种方法有强相关性.该研究表明该试纸条拥有良好灵敏度、准确度和可靠性.与电化学免疫测定法相比,该方法更加简单、快速,并且不需要复杂的仪器设备,非常适合在检测现场或基层社区医院使用,应用前景非常广泛.
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脑转移瘤中突变型p53蛋白的表达及临床意义
转移是恶性肿瘤的重要生物学行为,也是恶性肿瘤治疗中的难点和患者病死率高的重要原因,国内统计脑转移瘤占颅内肿瘤的3.5%～10%,国外尸检资料报告脑转移瘤占原发肿瘤的21%～46%,近年来,脑转移瘤有增多趋势[1].肿瘤的转移涉及多种相关基因的调控,我们选用31例脑转移瘤标本,应用免疫组织化学卵白素-生物素复合物(ABC)法,测定突变型p53蛋白(mtp53)的表达,探讨mtp53的表达及与预后的关系.
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生物素化乙酰普鲁兰多糖耦联CD3纳米粒的制备及T细胞摄取效应
目的 细胞毒T淋巴细胞是抗肿瘤免疫的主要效应细胞,纳米粒表面经特异性抗体修饰可使其靶向并激活T细胞.文中探讨生物素化乙酰普鲁兰多糖纳米粒耦联CD3抗体(Bio-PA-CD3 NPs)对CD8+T细胞增殖及细胞因子分泌及摄取效应的影响.方法 超声透析法制备了3种生物素取代度Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs,CD3抗体耦联于纳米粒表面.比较3种纳米粒的粒径,Zeta电位;CCK-8法检测对CD8+T细胞增殖的影响,ELISA试剂盒测定纳米粒对CD8+T细胞分泌的3种细胞因子含量.流式细胞仪定量分析细胞摄取Bio-PA-CD3 NPs.结果 Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs表面CD3抗体浓度分别为(36.1±4.4)、(21.4±4.3)和(10.3±4.7)μg/mg.耦联CD3抗体的纳米粒与CD8+T细胞共孵育48 h,NPs浓度为50、100、200μg/mL时,与同一生物素取代度Bio-PA NPs比较,Bio-PA-CD3 NPs明显促进细胞增殖(P<0.05);共孵育96 h,NPs浓度为1、10、50、100、200μg/mL时,与同一生物素取代度Bio-PA NPs比较,Bio-PA-CD3 NPs明显促进细胞增殖(P<0.05).当NPs浓度为10μg/mL时,Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IL-2的分泌;当NPs浓度为50μg/mL时,Bio1.6-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IFN-γ的分泌;Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进TNF-β、IL-2的分泌;当NPs浓度为100、200μg/mL时,Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IFN-γ、TNF-β、IL-2的分泌(P<0.05).流式结果显示CD8+T细胞对Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs 3组纳米粒摄取率荧光强度峰值左移,即荧光强度逐渐降低.结论 制备的耦联抗体的普鲁兰多糖纳米粒有望作为一种提高T细胞免疫效应的制剂.
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维生素一家有“十二凤”
维生素家族中共有姊妹十二人,号称“十二凤”.不过维生素根据它的溶解性,把它们分为溶解在油中的脂溶性维生素和溶解在水中的水溶性维生素两大类.其中维生素A、D、E、K因其具备有可溶解在脂肪及油脂中的特性,所以属于脂溶性维生素,美其名日“脂凤”;而水溶性维生素则包括有维生素B1、B2、烟碱酸、泛酸、B6、叶酸、生物素、BI2(以上皆属于维生素B群)及维生素C,美其名日“水凤”.“脂凤”比“水凤”更能长久的储存在体内,且多存于人体的肝脏和脂肪组织中.至于“水凤”,因随排泄较快且在烹调或水洗时会溶解于水中,所以极易流失.
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介绍一种原位PCR检测方法
原位PCR就是将PCR的高效扩增与原位杂交的细胞定位相结合,在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定DNA或RNA序列[1].作者介绍一种原位PCR方法是利用卵白素与生物素间的极高亲和力,通过一段外源性DNA片段,来达到连接标记NTPs的目的,再通过原位杂交技术来检测目的DNA.具体方法如下.
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生物素——链霉亲和素放大免疫酶法在鼻咽癌血清学检测中的应用
[目的] 探讨生物素--链霉亲和素放大免疫酶法(BSA)应用于鼻咽癌(NPC)IgA/EA血清学早期筛查效果,提高鼻咽癌早期诊断效率.[方法] 免疫酶法(IE)检测广西鼻咽癌示范基地血清中IgA/VCA(针对EBV壳抗原VCA的IgA型抗体),IgAVCA阳性者再用IE法及生物素--链霉亲和素放大免疫酶法(BSA)分别检测血清IgA/EA(针对EBV早期抗原EA的IgA型抗体),以临床病理检查结果为确诊标准.t检验及X2检验统计分析改进前后两种方法在鼻咽癌血清学早期检测方面的差异.[结果] IE法检测IgA/VCA阳性血清388例,IE法检测IgA/EA阳性率3.6%(14例),BSA法检测IgA/EA阳性率12.9%(50例),BSA法检出阳性率显著高于IE法(X2=22.070,P<0.001).在两种方法检测的血清IgA/EA均阳性的样品中,IgA/EA检测滴度的几何平均值(GMT)分别为1:17.04和1:51.87,BSA法显著高于IE法(t=2.804,P<0.05).进一步的病理检测确诊鼻咽癌患者16例,BSA法提高了NPC检测灵敏度(X2=16_347,P<0.001).[结论] 用生物素--链霉亲和素放大免疫酶法(BSA)检测血清EBV相关抗体特异性较高,并且可以提高鼻咽癌血清学早期检测的灵敏度,为在基层开展更有效的流行病学筛查提供了可行的方法.
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顶空进样毛细管气相色谱法测定生物素中有机溶剂残留量
目的建立测定生物素中有机溶剂残留量的方法.方法采用顶空进样毛细管气相色谱法测定,色谱柱为HP-INNO-Wax毛细管柱;程序升温,初始温度为50℃,维持6min后,以20℃·min-1升温至180℃保持5min.结果在确定的色谱条件下各组分能基线分离,线性关系良好;加样回收率为96.7%～102.4%.低检测限为0.03～0.16ppm.结论该方法灵敏度和准确度均达到有机溶剂残留量检测的要求,可用于生物素中有机溶剂残留量的测定.
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HPLC法测定保健食品中生物素的含量
[目的]建立HPLC测定保健食品中生物素含量的方法.[方法]色谱条件:Merk Lichrocart C18色谱柱;乙腈:0.05 mol/L磷酸二氢钾=15:85,pH 3.5为流动相;检测波长200 nm进行测定.[结果]生物素的线性范围为1.17～11.7μg/ml,r=0.9996(n=6),平均回收率98.8%,RSD值为1.22%.[结论]该方法操作简便、快速,准确度较高,可用于保健食品中生物素的质量控制.
关键词： 保健食品 生物素 高效液相色谱(HPLC) -
应用PCR-反向斑点杂交法快速检测和鉴定医学重要真菌
目的建立一种以PCR为基础的的检测和鉴定医学重要真菌的方法.方法将白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、都柏林念珠菌和新型隐球菌的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上;用标记生物素的真菌通用引物扩增经提取的各真菌DNA,与固定在膜上的探针杂交.结果所用的真菌通用引物可扩增12种临床常见的真菌DNA,扩增片段长度在350bp左右.8种特异性探针分别与上述真菌PCR扩增产物杂交,结果表明8种探针具有高度的特异性.通过39例临床标本和25例临床分离菌株的检测,PCR-反向杂交法与真菌培养法的结果基本一致,且鉴定时间也由传统培养鉴定方法约需1周的时间缩短至2天.结论该方法可快速、正确地将8种临床常见真菌鉴定到种水平,如经大量临床标本的检测验证,可望在临床微生物实验室开展.
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生物素-亲和素-免疫印迹技术在癌胚抗原鉴定中的应用
目的建立CEA提取物纯度灵敏、可靠的免疫纯鉴定方法.方法使用生物素-亲和素-免疫印迹技术.用过碘酸钠偶联亲和素与辣根过氧化物酶;生物素与N-羟基琥珀亚胺反应生成N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯;再用生物素酯标记CEA单抗.结果 CEA提取物与标准分子量经SDS-PAGE电泳后,一半凝胶用考马思亮兰染色,另一半凝胶进行转移电泳.对硝酸纤维素膜进行BA-酶免疫染色.通过比较凝胶染色带和硝酸纤维素膜的染色带,判断CEA的提取物是否达到免疫纯.结论用建立的该方法可进行CEA提取物免疫纯的鉴定.
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滤纸采血测定新生儿促甲状腺素的影响因素探讨
目前,世界上多数国家主要采用滤纸采血测定促甲状腺素(TSH)筛查新生儿甲状腺功能低下症(CH).由于TSH在血液中含量甚微,加之滤纸为其取样载体,其测定结果容易受多种因素的影响,稍有疏忽就可能出现漏诊,使患儿丧失早期诊断和治疗的机会.为探讨滤纸采血测定TSH的影响因素,减少或避免CH的漏诊,1998年4月以来对影响滤纸血片测定TSH的生物素-亲和素酶联免疫吸附试验(BA-ELISA)测定结果的因素进行了探讨.
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BA-ELISA法测定干血斑促甲状腺素含量的影响因素探讨
目前,大多数国家主要采用酶标法、免疫荧光法利时间分辨法测定滤纸干血斑促甲状腺素(TSH),以筛查新生儿甲状腺功能低下症(CH).由于TSH在血液中含量甚微,加之滤纸为其取样载体,其测定结果受多种因素影响,稍有疏忽就可能出现漏诊,使患儿丧失早期诊断和治疗的机会.为探讨滤纸采血-测定TSH的影响因素,减少或避免CH的漏诊,我们对滤纸血片TSH的生物素-亲和素酶联免疫56吸附实验(BA-ELISH)测定结果的影响因索进行了探讨.
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预定位技术在肿瘤治疗中的应用
预定位技术是在放射免疫治疗基础上发展起来的一种新的肿瘤治疗方法,具有与靶抗原亲和力高、毒性低、血清清除快等优点,对于实体瘤有很好的疗效.目前的预定位技术主要有生物素和亲合素的预定位模式和双特异性抗体的预定位模式两种.现综述预定位技术的产生、现状及展望.
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炒鸡蛋加点料
鸡蛋含有符合人体营养需求的优质蛋白,吸收率高达95％以上;蛋白中含有不容小觑的核黄素、尼克酸、生物素;蛋黄中卵磷脂、蛋黄素及钙、铁、磷,维生素A、D与B族维生素也很丰富.传统的炒鸡蛋是非常好的烹调方式,如果再搭配一些食材,营养会更均衡.
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营养强化剂类保健食品中生物素含量的测定
目的:采用HPLC测定营养强化剂类保健食品中生物素的含量.方法.样品采用水溶剂超声波提取方法,以Symmetry Shield RPC18柱为固定相,乙腈:0.05%三氟乙酸水溶液(pH=2.5)为流动相、检测波长为201 nm.结果:生物素与其它杂质均能达到基线分离,其色谱峰形好.生物素的浓度在2.0μg/ml-40.0μg/ml时与峰面积成良好的线性关系(Y= -666+1.02 ×105X,r =0.9999),平均回收率为94.5%-105%,方法精密度RSD为1.93%、和1.47%(n=6).结论:所用方法简便,准确,重复性好,适用于营养强化剂类保健食品中生物素的测定.
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微生物法测定食品中生物素含量的研究
目的:研究利用微生物法测定食品中生物素含量.方法:利用植物乳杆菌(ATCC 8014)的生长与溶液中生物素含量成一定的线性关系,通过测定培养一定时间后细菌溶液吸光度的变化得出食品样品中生物素含量.结果:测得的标准曲线在0 ng～1 ng范围内线性关系良好,所测样品RSD分别为1.1%、4.1%、2.5%(n=6),平均回收率分别为84.2%、92.4%、99.7%.结论:该方法稳定可靠,适用食品中生物素含量的测定.
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多羧酶缺乏患儿的临床与生化特点研究
目的了解多羧酶缺乏患儿的临床与生化特点及治疗情况.方法对5例多羧酶缺乏惠儿进行临床观察,血生化、影像学和视听诱发电位检查及治疗反应的随访.结果1例为婴儿型多羧酶缺乏,表现为反复发作呼吸困难,嗜睡、昏迷,严重尿布疹.伴严重酸中毒,乳酸、血氨增高.4例为晚发型,其中脊髓受累2例,阵发性肌张力不全1例,惊厥和智力、运动倒退1例.部分患儿伴视力异常,智力、运动发育落后,皮疹、秃发和轻度酸中毒和乳酸升高.MRI示脊髓、脑白质、丘脑和桥脑均受累.视听诱发电位有传导延迟.治疗后表现均迅速改善或消失.结论多羧酶缺乏患儿临床多样,伴不同程度酸中毒、乳酸血症,经生物素治疗效果显著.
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多种羧化酶缺陷症1例
患儿,男,8个月,因反复间断性深大呼吸、嗜睡2.5个月,昏迷2 d入院.2.5个月前无诱因出现喘息,深大呼吸,微咳,且逐渐加重,出现嗜睡,无呕吐、腹泻、抽搐等.
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多种羧化酶缺乏症15例临床分析及长期随访
目的 探讨多种羧化酶缺乏症(MCD)2种类型的临床特点、诊断与治疗方法.方法 应用气相色谱质谱(GC/MS)联用尿液有机酸分析、外周血生物素酶(BT)活性测定、BT及全羧化酶合成酶(HLCS)基因突变分析进行诊断与分型,对15例MCD患儿的临床资料进行总结分析并随诊.结果 1.MCD 15例患儿尿GC/MS分析见乳酸、3-羟基丁酸、3-羟基异戊酸,3-甲基巴豆酰甘氨酸、甲基枸橼酸及3-羟基丙酸.其中14例确诊为HLCS缺乏症,1例为BT缺乏症.2.HLCS缺乏症起病早,大多数出生后5个月内发病,14例均以反复皮疹为首发症状,伴反复气促9例,精神运动发育迟缓8例,反复呕吐5例,喂养困难3例,运动倒退、抽搐各1例.血气分析示持续性代谢性酸中毒,大部分患儿有酮尿、高乳酸血症、高尿酸血症、高氨血症、低血糖.除1例死亡外,13例给予生物素治疗,48 h内代谢紊乱纠正,随诊至今3～11(6.47 ±2.70)年,未再发,体格、智力发育正常.3.BT缺乏症1例患儿于1岁4个月起病,表现为神志改变、肢体颤抖,呼吸不规则,头颅磁共振检查提示胼胝体脱髓鞘样损害,起病第2天开始生物素治疗,随访1年,右侧肢体肌力仍未能完全恢复.结论 反复皮疹、气促、代谢紊乱是HLCS缺乏症的主要临床特征;BT缺乏症以神经系统损害更明显,常以神经系统急性脱髓鞘改变起病.GC/MS尿有机酸分析是早期诊断的重要依据.2种类型MCD早期开始生物素治疗疗效显著,长期随诊,预后良好,部分BT缺乏症治疗不及时可遗留神经系统后遗症.
