非放射性杂交标记系统

非放射性杂交标记分子的出现极大地促进了杂交技术的推广应用，对整个分子生物学都有深远的影响。本文介绍非放标记系统种类(半抗原类、荧光色素类及酶类)各自的原理及优缺点，并比较对其在原位杂交中的应用。

应用自动浊度微生物分析仪测定维生素片剂中的生物素

目的 建立应用自动浊度微生物分析仪定量测定多种维生素营养片剂中生物素含量的方法.方法 应用自动浊度微生物分析仪对样品进行自动稀释,自动检测标准溶液和样品溶液中的菌体生长浊度,通过测定细菌生长和繁殖强度间接地测定出样品中的生物素含量.结果 方法的线性范围0.05～0.9 ng/ml,曲线相关系数r为0.9972,精密度为3.75%,回收率平均值为102.37%.结论 方法操作简单、灵敏度高、处理量大,适合生产企业的批量质量控制和检测.

载脑源性神经营养因子脂质体纳米微粒脂膜微泡超声造影剂的制备与初步评价

目的 制备一种新型的载脑源性神经营养因子(BDNF)脂质体纳米微粒脂膜微泡超声造影剂(BDNF-UMCA),并对其应用进行初步评价.方法 以冷冻干燥法在"脂氟显"制备的基础上加入与二棕榈酰磷脂酰胆碱等量的含生物素化棕榈酰磷脂酰甘油钠-聚乙二醇2000-生物素,制备含生物素化脂膜超声微泡造影剂,通过链亲和素耦连含生物素化聚乙二醇载BDNF脂质体纳米微粒制备BDNF-UMCA,检测其物理性质、载药量、包封率、稳定性及体内声学特性.结果 BDNF-UMCA平均粒径(4.20±0.79)μm,浓度1.02×109/ml,总药物含量(1.18±1.96)mg/ml,包封率(71.6±2.6)%.在4℃下,BDNF-UMCA平均粒径和包封率各时间点无明显变化;在(24±2)℃下,BDNF-UMCA的平均粒径随时间推移逐渐增大,第1、3、5、7天的粒径与初始粒径比较差异均有统计学意义(均P<0.05),包封率在(24±2)℃下各时间点比较差异无统计学意义.BDNF-UMCA能显著增强实验动物肝脏显影,平均峰值强度(21.5±3.5)dB,平均达峰时间(19.2±5.2)s.结论 应用生物素-亲和素耦连可成功制备BDNF-UMCA;BDNF-UMCA可为靶向显影及药物通过血脑屏障释放提供工具.

含生物素化脂膜超声造影剂的制备与初步评价

目的 制备一种含生物素化脂膜的超声造影剂,并对其功能进行初步评价.方法 以冷冻干燥法在自制"脂氟显"(对照微泡)的基础上制备含生物素化脂膜超声造影剂微泡,检测其理化性质和造影功能,同时应用激光共聚焦显微镜和平行板流动腔法观察含生物素化脂膜微泡与链亲和素的黏附性.结果 ①含生物素化脂膜微泡造影剂在理化性质与小鼠肝脏造影显像方面能力与对照微泡比较差异无统计学意义(P>0.05);②与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的链亲和素孵育后,含生物素化脂膜微泡荧光检测呈阳性,对照微泡为阴性;③含生物素化脂膜微泡可结合于链亲和素包被的培养皿上,且随着链亲和素包被浓度的增加其结合稳定性也相应提高.结论 应用冷冻干燥法在制备"脂氟显"微泡造影剂的基础上,可成功制备含生物素化脂膜超声微泡造影剂,为今后制备靶向显影及载药(基因)超声造影剂奠定了基础.

HPLC法测定注射用水溶性维生素中维生素B12和生物素的含量

目的:建立以高效液相色谱法同时测定注射用水溶性维生素中维生素B12和生物素含量的方法.方法:色谱柱为Phenomenex C18检测波长为210nm,流动相为0.1%磷酸-甲醇(81∶19),流速为1.0mL·min,柱温为35℃.结果:维生素B12和生物素线性范围分别为0.003 5～0.024 5 μg(r=0.999 7)和0.034 76～0.243 32 μg(r=0.999 2),平均回收率分别为99.75%、99.91%(RSD=1.40%、1.95%).结论:本方法较简便、快速,准确度较高,可用于控制该制剂的质量.

高效液相色谱法测定生物素的含量

目的 建立生物素的含量测定方法 .方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Discovery C18柱(150mm×4.6mm,5μm),以0.05%三氟乙酸-乙腈(75:25)为流动相,检测波长为210 nm.结果 生物素质量浓度在51～306μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为99.92%,RSD=0.70%(n=6).结论 高效液相色谱法准确、可靠、灵敏,可用于生物素的质量控制.

猪苓的药理作用及临床应用

猪苓pdyporus umbellatus(pers).Fr为多孔菌科植物猪苓的干燥菌核,化学成分主要含麦角甾醇(Ergosterol)、生物素(Biotin)、蛋白质、糖类等.从猪苓中提取出的主要有效成分是猪苓多糖(多溶性多聚糖聚6-支链β-1,3-葡萄聚糖)[1].现将其药理作用及临床运用综述如下.

β-地中海贫血与先天性软骨发育不全诊断性基因芯片的构建

目的 建立一种能同时快速、准确地检测β-地中海贫血与先天性软骨发育不全常见基因突变的技术.方法 将针对2种疾病常见突变的特异性氨基修饰寡核苷酸探针点样于醛基修饰的玻片上,制成基因芯片,对β-地中海贫血、先天性软骨发育不全的病例和正常样本进行基因诊断.结果 该基因芯片成功检测到相应的突变位点.结论 该芯片制作成本低,重复性好,特异性高,能满足临床标本检测的要求,具有良的临床应用前景.

生物素-亲和素偶联放大竞争酶联免疫吸附法测定甲氨蝶呤

目的 将生物素-亲和素偶联放大竞争酶联免疫吸附法(BA-cELISA)引入甲氨蝶呤血药浓度检测,建立一种快速、简便、敏感、特异的甲氨蝶呤检测 方法.方法将NH2活性生物素与MTX单抗IgG化学连接,采用亲和素-HRP酶标记系统,建立放大竞争酶联免疫吸附法,连续制备5批试剂盒,对试剂盒进行批内批间精密度、敏感性、特异性、准确性和稳定性进行验证,检测口服MTX的类风湿关节炎患者血清MTX浓度,并对其检测结果进行判定.结果 建立的生物素-亲和素偶联放大竞争酶联免疫吸附法测定甲氨蝶呤的方法具有很好的敏感性和特异性,检测MTX的灵敏度达到0.087 ng/mL,检测下限为0.137 ng/mL,检测线性范围为0.1 ～ 10 ng/mL;批内RSD为3.3％ ～8.7％,平均批内差异为6.5％,批间RSD为7.6％ ～9.9％,重复性教好,检测回收率为94.2％～112.8％.结论 生物素-亲和素偶联放大竞争酶联免疫吸附法检测MTX,操作简单,具有较好的灵敏度和特异性.

与视皮层脑片膜片钳全细胞记录相结合的生物素标记技术

目的在视皮层脑片膜片钳全细胞记录的同时,建立神经元的生物胞素标记技术.方法利用盲法获得视皮层脑片膜片钳全细胞记录,在电生理记录的同时,Biocytin通过记录电极尖端灌注到所记录的细胞内,标记成功后再进行组织学染色.结果能观察视皮层同一细胞的电生理和形态学特性及神经元之间的染色耦合.结论本法操作简便,细胞标记成功率高,易于推广使用.

高效液相色谱法同时测定乳制品中的泛酸和生物素

目的 建立乳制品中泛酸和生物素的高效液相色谱同时测定方法.方法 样品经硫酸钠沉淀蛋白后,采用C18柱分离,以0.005 mol/L己烷磺酸钠(用磷酸pH值2.3):乙腈为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为40℃,检测波长为200nm.以保留时间定性,峰面积定量.结果 所测2种物质的线性范围为0.10～2.0 μg/ml;相关系数均大于0.999;泛酸检出限为0.082 μg/kg(牛奶)和0.75 μg/kg(奶粉),生物素检出限为0.047 μg/kg(牛奶)和0.43 μg/kg(奶粉);泛酸测定限为0.27 mg/kg(牛奶)和2.5 mg/kg(奶粉),生物素测定限为0.16 mg/kg(牛奶)和1.4 mg/kg(奶粉).方法的日内精密度为1.86％ ～ 3.79％,日间精密度为2.01％ ～ 3.28％.回收率范围为70.9％～ 106％(奶粉)和72.8％ ～ 108％(牛奶).结论 建立的方法具有简便、快速、重现性好等特点,可用于牛奶和奶粉中泛酸和生物素的同时快速测定.

HCV抗原ABS-ELISA检测方法的建立及初步评价

目的 建立新的HCV抗原生物素-亲和素-酶联免疫检测方法(ABS-ELISA).方法 将生物素-亲和素系统与酶联免疫技术相结合,建立用于丙型肝炎病毒抗原检测的方法,分析检测方法的灵敏度、特异度、稳定性及精确度等主要技术指标,并对应用效果进行评价.结果 建立的检测方法,对40余种肠道病毒样品均无交叉反应,在第二代HCV-RNA国家标准品的10份阴性标准品中,未检出HCV-Ag阳性样品,在10份HCV-RNA阳性标准品中,检出6份HCV-Ag阳性的样品,表现出良好的特异性；检测试剂CV平均值为6.28％,精密性好；在90份HCV抗体阳性样品中检测出HCV-RNA样品67份(74.44％),检出HCV游离抗原阳性样品30份(33.33％)、HCV总抗原阳性样品68份(75.56％),HCV游离抗原与HCV-RNA两个指标检出率差异有统计学意义(x2=22.443,P＜0.01),但HCV总抗原与HCV-RNA检测结果之间差异无统计学意义(x2=0.037,P＞0.05)；以HCV-RNA检测试剂为金标准,所建立的ABS-HCV抗原检测试剂总抗原检测结果的一致性、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为98.03％、80.60％、98.93％、79.41％、99.00％.结论 新建立的HCV抗原ABS-ELISA检测方法特异性好,其灵敏度与荧光定量PCR相近.

酶标链霉亲合素--生物素法检测外周血T细胞亚群技术的改进

用酶标链霉亲合素-生物素技术(labelled streptavidn biotin methed,ISAB)[1]检测病人外周血T细胞亚群已被广泛采用.我室在该技术基础上为适应临床检测需要对其实验方法和技术加以改进,使得结果准确性明显提高.

夹心免疫PCR方法检测蓖麻毒素

目的建立了双抗夹心免疫PCR的检测技术,检测极微量的抗原.方法以亲和素作为连接分子连接生物素化抗体和生物素化DNA,应用于免疫PCR中,检测极微量的抗原.结果建立了双抗夹心免疫PCR的检测技术,检测蓖麻毒素的灵敏度达0.1 pg/mL,与夹心ELISA方法比较灵敏度高103倍.结论建立的免疫PCR系统灵敏度高,可用于各种微量抗原的检测.

人心肌肌钙蛋白T胶体金免疫层析法的建立

目的建立一种简便、快速、准确检测人心肌肌钙蛋白T(cTnT)的胶体金免疫层析法(GICA).方法制备的胶体金标记抗cTnT单克隆抗体3F7,生物素标记另一株抗体2H8,链霉亲和素结合于硝酸纤维素膜上,制成免疫层析试纸条.血清中cTnT与测试条两种抗体结合后,沿硝酸纤维素膜移动,与链霉亲和素交联形成肉眼可见的红色线条.结果测试条灵敏度可达o.5 ng/ml.检测30例急性心肌梗塞(AMI)患者血清cTnT水平,并与国外同类产品比较,符合率达92%.结论本方法特异性强、灵敏度高、简便快速,可广泛应用于急性心肌梗塞的早期诊断.

红细胞寿命检测方法及其应用的研究进展

红细胞寿命(RBCS)检测有助于了解各类型贫血及红细胞破坏的原因,更是溶血性贫血的诊断“金标准”.然而,迄今仍无一项技术手段可广泛应用于临床RBCS检测.本文在简要介绍红细胞清除机制的基础上,对51Cr标记法、15N-甘氨酸标记法和生物素标记法等几种常见RBCS检测方法的原理、检测步骤、临床应用及其利弊作一综述,并且重点介绍一种具有临床应用前景的RBCS检测方法——一氧化碳(CO)呼气试验.

063.以2种密度生物素标记红细胞可同时和重复测定循环红细胞容量

大鼠发育过程中视皮层神经元电生理与形态学特性的相关性——细胞内染色研究

目的研究大鼠不同发育阶段视皮层神经元电生理学与形态学特性的关系,观察电生理特性和形态变化的同步化程度,认识正常视觉发育的细胞内机制. 方法应用脑片膜片钳全细胞记录技术和细胞内标记相结合的方法, 获得4～28 d Sprague-Dawleg(SD)大鼠视皮层神经元的细胞内微电极记录,再进行细胞内标记和组织学染色. 结果成功标记23例细胞,其中锥体细胞与非锥体细胞在电生理特性上差异有显著性.不同发育阶段视皮层神经元形态学上的成熟度不同. 结论①视觉发育过程中,视皮层锥体细胞和非锥体细胞的电生理学特性反映其参与不同的视皮层神经元回路的整合功能.②视觉发育可塑性关键期内,视皮层神经元形态和电生理特性变化的同步化程度大于视皮层下结构.

生物素对高糖状态下大鼠胰岛β细胞功能的影响

目的 探讨生物素对高糖损伤胰岛β细胞功能的影响.方法 采用Dextran密度梯度离心法分离纯化大鼠胰岛,在含5.5 mmol·L~(-1)葡萄糖、5.5 mmol·L~(-1)葡萄糖+1 μmol·L~(-1)生物素、含27.0 mmol·L~(-1)葡萄糖及27.0 mmol·L~(-1)葡萄糖+1 μmol·L~(-1)生物素的RPMI 1640培养基中培养48 h,分析3.3、27.0 mmol·L~(-1)葡萄糖刺激的胰岛素分泌及胰岛细胞中胰岛素的含量;提取总mRNA,RT-PCR扩增前胰岛素源基因,电泳并进行灰度分析.结果 在5.5 mmol·L~(-1)葡萄糖培养条件下,生物素增加高糖诱导的胰岛素释放及胰岛细胞的胰岛素含量,前胰岛素源mRNA也增加;在27.0 mmol·L~(-1)葡萄糖培养铝h的胰岛中,胰岛细胞中的胰岛素浓度降低,高糖诱导的胰岛素释放及前胰岛素源mRNA显著减少;生物素的共培养,部分提高了高糖诱导的胰岛素释放及前胰岛素源mRNA含量.结论 生物素通过促进胰岛素的合成显著改善了高糖损伤胰岛β细胞的功能紊乱.

一种新型生物活性物分子探针的合成

环己烯类骨架化合物Ⅰ具有抗肿瘤生物活性,为探究其抗肿瘤作用靶点,进一步设计合成了相关化合物8a～8e和9,并通过MTT比色法实验考察了相关化合物的生物活性.本研究采用活性较好的化合物9为活性基团,通过Click反应成功实现与生物素标记偶联的分子探针20的合成,接着考察了分子探针20有否抗肿瘤活性,实验结果表明其对U937细胞株的IC50值为58.6μmol/L,为后续探索相关蛋白靶点的研究提供基础.