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化学发光法检测CYP1A1基因多态性
目的建立增强化学发光法(enhanced chemiluminescence, ECL)检测CYP1A1基因多态性的方法. 方法实验方法同ELISA法,鲁米诺过氧化氢增强化学发光体系加入酶标板的每一个孔中,用单光子计数器检测其发光强度,即可鉴定样本基因型. 结果 30个标本的检测结果与ELISA相同,其灵敏度比琼脂糖凝胶电泳高1000倍,比ELISA法高10倍,辣根过氧化物酶标记DIG抗体的量为0.2mU,比ASA-ELISA法少,1 h杂交便可以判断标本的基因型,佳杂交时间为1.5~2 h,杂交温度为40~55℃. 结论该方法是一种更加灵敏和简便,极具发展前景的检测基因多态性的方法.
关键词: 基因多态性 增强化学发光 地高辛 辣根过氧化物酶标记抗地高辛抗体 生物素 -
PCR结合寡核苷酸探针杂交检测临床常见真菌的实验研究
目的建立PCR结合生物素标记的寡核苷酸探针斑点杂交技术,鉴定临床常见的真菌。方法首先用真菌通用引物扩增白念珠菌、热带念珠菌、假热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、解脂念珠菌、克鲁斯念珠菌、季也蒙念珠菌、黄曲霉、烟曲霉的核糖体大亚单位基因的保守区序列,然后用生物素标记的种特异性寡核苷酸探针与扩增产物杂交。并将此方法用于临床标本和临床分离菌株的检测。结果通用引物可以扩增上述11种临床常见真菌的DNA,扩增片段长度在260bp左右。9种特异性探针分别与11种真菌标准菌株的PCR扩增产物杂交,结果表明每种探针都具有高度特异性。斑点杂交法和Southern杂交法检测敏感性相同,为100fg;琼脂糖凝胶电泳法检测敏感性为1pg。通过69例临床标本和31例临床分离菌株的检测,PCR-杂交法的结果和真菌培养法的结果基本一致。结论 PCR结合生物素标记的寡核苷酸探针杂交技术可将9种临床常见真菌鉴定到种,方法快速、敏感、特异。
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结核病患者外周血T细胞亚群、mIL-2R与sIL-2R的测定
采用生物素-链霉亲和素(BSA)系统检测85例结核病患者T细胞亚群及经PHA诱导前后其mIL-2R表达水平,用ELISA法测定其血清sIL-2R水平,同时选取健康献血员25名为正常对照,操作按说明书进行.资料分析采用t检验.
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靶向纳米脂质超声造影剂制备及其体外寻靶能力实验研究
目的 制备一种靶向乳腺癌的纳米脂质超声造影剂,并观察其体外寻靶能力.方法 制备生物素化抗人乳腺癌细胞单克隆抗体Neu(F-11),并检测其生物素化程度和活性;通过生物素-亲和素系统制备靶向纳米脂质超声造影剂,用免疫荧光染色定性检测造影剂与抗体的连接情况,通过靶向造影剂与不同细胞的结合实验检测其寻靶能力.结果 每分子抗体可结合的生物素数目平均为7个,生物素化抗体的活性与游离单抗相比未见明显降低;免疫荧光染色显示靶向纳米脂质超声造影剂表面可见明亮的红色环状荧光,细胞结合实验显示其可与乳腺癌细胞特异性牢固结合.结论 生物素-亲和素系统可使造影剂与抗体牢固结合,所制得的靶向纳米脂质超声造影剂在体外具有较强的寻靶能力.
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以脊髓损害起病的生物素酶缺乏症1例分析
生物素酶缺乏症是先天性生物素代谢异常中的主要疾患,可于各个年龄阶段发病,临床表现复杂,死亡率、致残率极高,生物素补充治疗常有戏剧性疗效,早期发现、合理治疗是挽救患儿、改善预后的关键[1-3].据国外文献报道,本症的发病率约为1/60000[3],我国尚未见确诊病例报告.本文拟就通过1例生物素酶缺乏症患者的回顾性分析对本症进行探讨.
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加热抗原修复对胃癌组织中内源性生物素样分子活性的影响
目的:探讨加热抗原修复对甲醛固定石蜡包埋胃癌组织中内源性生物素样分子活性的影响.方法:采用煮沸法、免疫组织化学SP染色法及抗生物素蛋白-生物素依次处理法,对10例甲醛固定石蜡包埋胃癌标本内的内源性生物素样分子的活性进行检测.结果:①经甲醛固定和石蜡包埋的胃癌组织中内源性生物素样分子被灭活;②加热抗原修复显著增强内源性生物素样分子的活性,同时,内源性生物素样分子仅见于癌细胞胞浆中而未见于间质细胞;③抗生物素蛋白-生物素依次处理法可封闭内源性生物素样分子.结论:加热抗原修复可显著增强甲醛固定石蜡包埋胃癌组织中内源性生物素样分子的活性,而为避免其对正常免疫组织化学染色的影响,可采用抗生物素蛋白-生物素依次处理法或运用非生物素检测系统.
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长臂光敏基因探针对结核性浆膜腔积液的诊断价值
目的 研究聚合酶链反应(PCR)联合长臂光敏生物基因探针对浆膜腔积液性质的诊断价值。方法 通过PCR特异扩增人型结核分枝杆菌(H37Rv)IS986基因序列245 bp片段,构建含该特异片段的重组质粒,以该重组质粒DNA为模板,用PCR扩增IS986产物制备长臂光敏生物素标记的基因探针,进行探针特异性检测。同时对65份胸腔积液标本进行基因扩增联合探针检测并与传统的病原学检测方法进行比较。结果 通过PCR联合探针检测结果显示:该探针除了与人型、牛型、田鼠及非洲分枝杆菌有特异杂交信号外,与其他的分枝杆菌没有杂交反应。故此探针具有良好的特异性。对65份临床胸腔积液标本进行结核分枝杆菌检测,其阳性检出率(46.66%)分别高于PCR(26.66%)、涂片(0%)及培养(13.33%)的检出率。结论 该基因探针特异性强、敏感性高,与目前涂片镜检、培养法、单纯PCR扩增相比均有明显优势,适用于临床检测,有推广价值。
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应用链霉亲和素-生物素偶联FITC法检测肠道病毒71型方法学实验探讨
手足口病是由多种肠道毒引起的传染病,多发生于婴幼儿.由于其主要临床表现是发热和手、足、口腔等部位出现疱疹,因此被称为手足口病.
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检测烟曲霉菌GM抗原生物素-亲和素-夹心酶联免疫吸附试验法的建立
本研究用重组烟曲霉半乳糖甘露聚糖(AFMP1),制备免疫血清,建立一种以生物素-亲和素(BA)系统为基础的夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法,快速检测烟曲霉GM抗原[1].
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生物素标记HBV、HEV DNA探针原位分子杂交技术
目的 探索适合肝穿标本石蜡切片核酸性原位杂交的方法.方法 利用本实验室摸索出一套原位杂交处理程序,以生物素标记的HBV、HEV DNA探针,检测肝穿组织内的HBV、HEV病毒核酸.结果 肝组织内HBV、HEV杂交阳性部位呈紫蓝色.结论 本方法既灵敏、特异、直观,又简便、安全,适合大多数实验室开展.
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聚合酶链反应直接检测粪便中志贺菌的临床意义
近年来志贺菌在众多的腹泻病致病菌中仍然具有较高的发病率[1].在基层部队常常引起急性细菌性痢疾(急性菌痢),并时呈集体暴发流行.应用聚合酶链反应(PCR)检测志贺菌已早有报道,但应用于临床实际诊断的研究报道不多.本文采用PCR和长臂光敏生物素探针杂交技术对2起急性菌痢,共17例进行了检测,进一步探讨PCR用于临床腹泻病诊断的实用性.
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如何补充维生素B族
维生素B族包括8个成员:维生素B1、维生素B1、烟酸、维生素B6、叶酸、维生素B12、生物素和泛酸,他们都有各自的功能.人们需要维生素B族来保证神经系统的正常工作,尤其维生素B6和B12还与红细胞的形成有关.有研究表明,维生素B族还可以降低糖尿病患者发生心脏病的风险.
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肉毒素注射致眉下垂一例
一、临床资料某患者,女,52岁,因行肉毒毒素注射除皱致右侧眉下垂1年,来我院要求行提眉术.患者于1年前因轻信“不开刀、不手术,快速无痛除皱术”的广告宣传,去某家美容院接受注射除皱术,注射的“生物素”为“A”型肉毒毒素.注射48h后发生额部皮肤麻木,双侧眉毛上抬费力,尤以右侧为甚.1个月后,两侧眉毛明显高低不一致,右侧偏低.患者曾按此家美容院提供的按摩、理疗、口服复合维生素B、烟酸等方法治疗近1年并无明显改善.经在我院行提眉术后,两侧眉毛在静态下高低恢复一致.
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BAS-TRFIA检测抗核抗体Ig(GAM)方法学评估
目的 评估BAS-TRFIA法检测患者血清中抗核抗体Ig(GAM),为临床早期诊断相关疾病提供良好的试验依据.方法 从检测范围、精密度、回收率、稳定性、相关性试验等方面对建立的BAS-TRFIA法检测抗核抗体Ig(GAM)进行分析.结果 BAS-TRFIA法测ANA的曲线良好线性范围在1.1~37 355 U/ml;ELISA法测ANA的曲线良好线性范围在18.2~1167 U/ml,BAS-TRFIA法与ELISA法相比,ANA可测量范围明显提高;BAS-TRFIA法检测ANA低、中、高3种浓度混合血清的批内精密度(CV)分别为5.79%、3.81%和3.16%,批间CV分别为7.48%、6.33%和5.32%;ELISA法低、中、高3个浓度批内CV分别为9.27%、7.35%和5.51%,批间CV分别为12.31%、9.36%和7.15%;高、中、低浓度回收率分别为98.5%、102.2%、104.7%,平均回收率为101.8%;该方法测定值与进口ELISA法所得结果高度相关(R2=0.989);试剂盒置于37℃水浴箱7d后,BAS-TRFIA法结合率仅下降15.9%,而ELISA法结合率下降58.4%,BAS-TRFIA法试剂盒稳定性较好.结论 BAS-TRFIA法检测人血清中的ANA抗体灵敏度高、检测范围宽、重复性和稳定性好,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义.
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生物素酶缺乏症一例
患儿,男,1岁1个月,因"喂养困难、频繁呕吐、智力倒退6个月"入院.患儿系第1胎第1产,母孕28+3周早产,无生后缺氧窒息史,否认父母近亲婚配及家族遗传病史.生后逐渐出现喂养困难、频繁呕吐.母乳喂养至6个月.生长发育落后,5个月会抬头,6个月时智力逐渐倒退,不会抬头,7个月时智能发育测评结果:大运动相当于1.5月龄,精细运动相当于3月龄,认知水平相当于4月龄,语言能力相当于4月龄,社交行为相当于4月龄.
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生物素酶缺乏症的诊断与治疗六例分析
目的探讨生物素酶缺乏症的临床特征、诊断与治疗方法.方法运用尿有机酸分析(气相色谱-质谱联用)及干燥滤纸血片生物素酶测定进行筛查与诊断,对6例生物素酶缺乏症患儿的临床经过进行分析.结果 (1)6例干燥滤纸血片生物素酶活性均小于0.1 pmol/(min*3 mm).尿有机酸分析显示例1、2、3、5乳酸、3-羟基丙酸、丙酮酸、丙酰甘氨酸、甲基巴豆酰甘氨酸、β-羟基异戊酸浓度明显增高,例4、6仅显示乳酸、丙酮酸、甲基巴豆酰甘氨酸增高.(2)6例各有不同程度的神经系统损害和皮肤粘膜异常.例1~3为婴儿期起病,因惊厥、智力运动倒退、呕吐、意识障碍来院,合并贫血、酮症酸中毒、低血糖.例2于7个月起出现顽固性湿疹,口角、肛门周围糜烂.例4以扭转痉挛及全身性脓疱型牛皮癣为主.例5、6分别于7岁、5岁起病,进行性肢体运动障碍,MRI显示颈髓炎性脱髓鞘病变.例6伴视神经萎缩、脱发.除例3未接受治疗外,5例经生物素补充治疗后疗效显著,皮肤损害均已控制,神经系统情况逐渐好转.例4、6仍存在明显的下肢运动障碍.结论生物素酶缺乏症患儿临床表现复杂,生物素补充治疗疗效显著,早期发现、合理治疗可有效地改善预后.对可疑患者应及早进行尿有机酸分析和血清生物素酶测定等有关检查.
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中颅窝底鞍旁硬膜外海绵状血管瘤性激素受体的测定
一、材料和方法14例(13女,1男,年龄16~63岁,平均39岁)中颅窝底鞍旁海绵状血管瘤,3例闭经,1例月经量少.取于标本,使用生物素-酶标免疫抗体,对其中5例的病理石蜡切片进行雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的测定.阳性标准:形态完整、结构清晰、棕黄色颗粒、特异的定位于胞浆及胞核内的细胞.阳性细胞的着色明显高于背景着色的平均水平.对照:(1)阳性对照:已知ER、PR阳性的脑膜瘤石蜡切片;(2)阴性对照:待测脑膜瘤切片不加第一抗体.
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血管内皮生长因子和血小板源生长因子在下咽癌中的表达与意义
实性肿瘤的生长属血管依赖性,而血管生长由一些促血管生成因子诱导.血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors,VEGF)、血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)是重要的血管生成因子,微血管密度(microvessel density, MVD)是衡量血管生长的定量指标,3者有一定的协同性[1,2].采用免疫组化标记链霉素生物素-生物素法(lbelled-streptavidin-biotin, LASB) 法检测下咽癌中VEGF,PDGF及MVD的表达情况,探讨与肿瘤的TNM分期、组织学类型、有无淋巴结转移及预后间的关系及应用价值.
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细胞周期素依赖激酶抑制剂P27Kip1在兔晶状体上皮细胞增殖过程中的作用
P27Kip1是Polyak等[1]于1994年发现的一种相对分子质量为27 000的重要细胞周期素依赖激酶抑制剂,其通过抑制细胞周期素依赖激酶的活性,可阻止细胞周期进程,抑制细胞增殖.目前尚未见有关P27Kip1在晶状体上皮细胞中的表达和在晶状体上皮细胞增殖过程中作用的研究报道.我们以增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)作为细胞增殖指标,采用免疫组化链霉亲合素生物素复合物(strept avidin biotin complex,SABC)法对家兔晶状体皮质吸除术后不同时间晶状体上皮细胞中的P27Kip1蛋白进行检测,探讨P27Kip1在晶状体上皮细胞增殖过程中的作用.
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蛋白质药物的入脑转运
治疗脑内疾病的有效途径是用载体向脑内运送蛋白质药物(如抗体、神经营养因子、生物活性酶等).合适的脑靶向载体通过化学方法或分子生物学方法与蛋白质连接,携带蛋白质进入脑内,发挥药理作用.目前随着药物-亲和素/生物素-载体连接方法的成熟,以及脑靶向TAT-PTD小肽载体的探索,将可能会使大分子蛋白质进入脑内治疗脑内疾病成为常规的治疗方法.此外,这种方法也为治疗体内的其他器官疾病提供了思路.