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人精子膜离子通道和男性抗生育中草药避孕机制
离子通道在精子的成熟、获能和顶体反应过程中起关键作用.然后,由于难以直接使用膜片箝技术记录人的成熟精子的离子通道电流,长期以来一直缺乏有关人精子膜离子通道的类别和性质的基本资料.这种状况一直持续到将离子通道重组于脂双层的方法引入到精子离子通道的研究.我们在国家自然科学基金的支持下,将分离的人的精子膜离子通道蛋白重组于磷脂形成的脂双层膜,结合利用膜片箝单通道记录,首次记录出存在于人精子膜的离子通道电流,鉴定出数种通透Ca2+,Na+,K+和Cl-,具不同单位电导和动力学性质的离子通道.这包括两种具不同电导和动力学性质的Ca2+通道;对四乙胺敏感的K+通道;对河豚毒素敏感的Na+通道,其中有不具整流特性和具整流特性的数种;三种不同电导的Cl-通道等.这是目前对人的精子膜离子通道类别、性质的为系统、完备的记述.
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人精子膜抗原的制备及其在人精子抗体检测中的应用
精子表面的抗原与受精和胚胎的早期发育有密切关系,其中部分抗原能引起机体产生相应的抗体,从而影响到精子的受精功能和胚胎的发育,导致免疫性不育.因此对人类精子膜抗原的研究有助于从蛋白质水平来揭示受精的过程和不育的机制,为不育特别是免疫性不育的治疗及免疫避孕开辟一条新途径.因为精子膜比较坚固,难以破碎和溶解,不易得到较高浓度的精子膜抗原.而且即使精子膜被破碎溶解后,往往有许多种抗原成分混在一起,为了提取一种成分,常需反复分离.
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人精子膜抗原基因PH-20 DNA疫苗质粒的构建
精子膜抗原与受精和胚胎的早期发育有密切关系,其中部分抗原能引起机体产生相应的抗体,导致免疫性不育[1].PH-20(posterior head 20)在精子表面的特异性分布及其在受精过程中的作用,使其作为免疫避孕候选疫苗一直受到人们的关注[2].核酸疫苗在体内为真核天然表达,不需要体外表达、纯化,且具有免疫持续时间长,制备、携带方便,廉价等优点[3].PH-20是一种多功能蛋白[4],存在两个变体.本实验选择PH-20变体2,应用RT-PCR克隆出PH-20 2 cDNA,再以真核表达质粒pcDNA3.1为载体构建PH-20 DNA疫苗,为进一步研究免疫避孕疫苗奠定了实验基础.