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人精子58kD抗原与精子/滋养细胞交叉反应抗原
探讨人精子58kD抗原与人精子/滋养细胞交叉反应(STX)抗原的关系.收集人新鲜精液和非药物流产的早孕绒毛,用NP-40抽提法制备人精子膜抗原(SMAg)和人滋养细胞抗原(TCAg).采用SDS-PAGE和Western-blot、斑点印迹和免疫荧光法,以兔抗人滋养细胞多克隆抗体及免疫性不育病人的抗精子抗体(ASAb)阳性血清,对人SMAg、TCAg和人精子进行免疫识别和定位,以确定STX抗原的存在.斑点印迹结果显示:抗精子58kD不育血清与SMAg和TCAg均有较强的结合,抗滋养层细胞多抗亦与SMAg和TCAg有结合反应;Western-blot结果显示,抗滋养细胞多抗与SMAg和TCAg的58kD抗原有明显的识别,而ASAb阳性患者血清与这两种抗原的58kD亦有较明显的反应.免疫荧光定位证实,抗精子58kD病人血清与人精子头部有较强的荧光反应.本研究初步推测,人精子58kD抗原很可能是一种STX抗原,亦就是一种人精子和滋养细胞的共同抗原.并证实精子58kD抗原主要存在于人精子头部.
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人精子膜抗原的制备及其在人精子抗体检测中的应用
精子表面的抗原与受精和胚胎的早期发育有密切关系,其中部分抗原能引起机体产生相应的抗体,从而影响到精子的受精功能和胚胎的发育,导致免疫性不育.因此对人类精子膜抗原的研究有助于从蛋白质水平来揭示受精的过程和不育的机制,为不育特别是免疫性不育的治疗及免疫避孕开辟一条新途径.因为精子膜比较坚固,难以破碎和溶解,不易得到较高浓度的精子膜抗原.而且即使精子膜被破碎溶解后,往往有许多种抗原成分混在一起,为了提取一种成分,常需反复分离.
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人精子膜抗原基因PH-20 DNA疫苗质粒的构建
精子膜抗原与受精和胚胎的早期发育有密切关系,其中部分抗原能引起机体产生相应的抗体,导致免疫性不育[1].PH-20(posterior head 20)在精子表面的特异性分布及其在受精过程中的作用,使其作为免疫避孕候选疫苗一直受到人们的关注[2].核酸疫苗在体内为真核天然表达,不需要体外表达、纯化,且具有免疫持续时间长,制备、携带方便,廉价等优点[3].PH-20是一种多功能蛋白[4],存在两个变体.本实验选择PH-20变体2,应用RT-PCR克隆出PH-20 2 cDNA,再以真核表达质粒pcDNA3.1为载体构建PH-20 DNA疫苗,为进一步研究免疫避孕疫苗奠定了实验基础.
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亲和层析纯化精子膜抗原的方法及精子抗体的检测
采用超声波粉碎、NP-40提取与两种互补式免疫亲和层析柱相结合的新提纯方案.结果获得了高纯度精子膜抗原,对经两种市售试剂盒检测的阳性标本36份、阴性标本24份进行检测,结果一致,正常人血清标本A值≤0.08.初步临床应用显示不孕症患者中,血清阳性率23.52%,精浆阳性率7.57%,与郑州华美公司试剂盒的阳性符合率达100%.
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60KD的精子膜抗原对抗精子抗体阳性精子顶体酶活性的影响
目的观察60KD精子膜抗原对抗体阳性精子顶体酶活性的影响.方法用全胶电洗脱结合连续电洗脱的方法提取60KD精子膜抗原,使用60KD精子膜抗原体外处理抗精子抗体阳性精子.精子顶体酶活性的检测采用固定明胶底物薄膜法.结果抗精子抗体阳性精子经60KD抗原处理后,精子的凝集率由处理前的(35.1±15.1)%下降到了(13.0±3.3)%(P＜0.001).精子顶体酶阳性反应率由处理前的(30.3±7.3)%升高到(56.4±9.1)%(P＜0.001).结论60KD精子膜抗原可以有效去除精子结合的抗体,并提高精子的顶体酶活性.
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抗精子抗体相关精子膜抗原的免疫印迹分析
目的筛选抗精子抗体相关的精子膜抗原.方法使用ELISA试验检测不育病人血清的抗精子抗体,选取抗精子抗体阳性血清,通过免疫印迹的方法来筛选抗精子抗体相关精子膜抗原.结果通过ELISA试验共收集到抗精子抗体阳性男子血清标本18份、女子血清标本15份.有8种分子量的精子膜抗原被抗精子抗体阳性血清所识别,其中78KD、60KD、51KD、23KD的精子膜抗原的识别率较高,分别为71.43%、60.71%、14.29%和14.29%.结论 78KD、60KD、51KD、23KD的精子膜抗原与抗精子抗体的生成和免疫不育密切相关.
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精子膜避孕疫苗的研究进展
睾丸产生的精子是不成熟精子,缺乏运动和授谮精能力.附睾是精子成熟的场所,精子表面存在的大量蛋白必须在附睾中进一步修饰、折叠,发生必要的结构变化,才能使精子适应女性生殖道内复杂的生理变化,获得运动和受精能力,达到功能上的成熟.
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双向电泳结合免疫印迹法分析抗精子抗体相关精子膜抗原
为筛选精子抗体相关的精子膜抗原.本文使用ELISA试验检测不育病人血清的抗精子抗体,选取抗精子抗体阳性血清,通过双向电泳和免疫印迹的方法来筛选抗精子抗体相关精子膜抗原.
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男性免疫避孕的研究进展
男性免疫避孕的理想目标是研制出一种安全、有效、可逆、使用方便、易于接受的避孕疫苗.目前的研究主要是从生殖激素和精子功能蛋白中筛选为合适的靶抗原用于免疫避孕疫苗的开发.以生殖激素作为靶抗原的避孕疫苗由于其不同程度的不良反应和操作的繁琐性,并没有得到广泛推广.近年来的研究表明,以精子特异性抗原为靶抗原开发男性免疫避孕疫苗具有现实性和可行性.然而,该免疫避孕疫苗的开发也面临着很多挑战,如何筛选合适的靶抗原、提高疫苗的免疫原性、合适的免疫方式、降低疫苗的不良反应及成本等都是要解决的重要问题.
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精子膜抗原的研究新进展
精子表面的膜抗原是精子发生成熟过程中的重要标志分子,对其深入研究有助于揭示精子发生成熟及受精过程的生理机制和不育的病理改变.本文回顾了近年来随着分子生物学技术的广泛应用,传统的一些重要的精子膜抗原相继得到了克隆和测序,一些新的表达精子膜抗原的基因也陆续被发现,为从蛋白水平进一步深入研究其功能以及免疫避孕疫苗的筛选奠定了基础.
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人精子膜抗原的提取及分析
目的:用两种酶裂解法提取精子膜抗原并对其进行蛋白浓度测定和成分分析.方法:分别用尿素裂解液和表面活性剂Triton X-100﹑脱氧胆酸钠(DOC) 的TDOC裂解液裂解液提取精子膜抗原,借助BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,并通过SDS-PAGE法比较分析蛋白成分.结果:两种方法提取的精子膜抗原经SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色后均有条带显示,TDOC裂解液提取的样本中显示仅有一条蛋白带,分子质量集中在100 ku左右,尿素裂解液提取的样本中有多条蛋白条带,分子质量集中在130～35 ku.结论:尿素裂解液提取法提取精子膜抗原的效果优于TDOC裂解液提取法,为抗精子相关抗体的研究提供了条件.
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人精子顶体膜相关蛋白32真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达
目的:研究人精子顶体膜相关蛋白32(hSAMP32)mRNA在体外细胞NIH3T3中的表达.方法:利用RT-PCR及亚克隆技术构建pcDNA3.1(+)-hSAMP32质粒,实验组以脂质体介导基因转染法将pcDNA3.1(+)-hSAMP32真核表达载体导入NIH3T3细胞中,同时设置空白和阴性对照组(转染空载体pcDNA3.1(+)).原位杂交检测hSAMP32 mRNA在3组细胞中的表达.结果:①RT-PCR扩增产物与预期的目的基因hSAMP32长度一致.亚克隆酶切鉴定可见目的片段.②实验组阳性细胞胞浆中可见hSAMP32 mRNA的表达,镜下可见蓝紫色阳性颗粒,空白和阴性对照组未见蓝紫色阳性颗粒.结论:脂质体介导基因转染法能够将pcDNA3.1-hSAMP32真核表达载体高效导入NIH3T3细胞中,实现了hSAMP32基因的体外表达.
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用金标免疫斑点法检测抗精子抗体
抗精子抗体(AsAb)检测对免疫性不育的诊断具有重要意义,研究表明,在多种导致不育因素中,以抗精子抗体为密切.抗精子抗体是由精子或精子膜抗原诱发的特异性抗体,它具有凝集精子细胞,抑制精子通过宫颈粘液向宫腔内移动,抑制精子获能、顶体反应及受精,从而降低生育力.其在血清中的存在通常以IgG、IgM为主,精浆中通常以IgA、IgG为主.目前应用的AsAb检测方法有:精子制动试验(SIT)、精子凝集试验(SAT)、混合凝集试验(MAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光试验(1lF)等,由于其原理和实验条件不同,各家报道有一定差异.我们应用金标免疫斑点法对不明原因不孕夫妇血清中AsAb进行检测,现报道如下.
