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流感病毒研究进展
流感病毒分为甲型(国外称为A型)、乙型(国外称为B型)和丙型(国外称为C型).其中甲型流感病毒于1933年由Smith等[1 ]人通过雪貂培养分离,因其变异及进化速度快、抗原多变、感染性和致病性强、传播速度快而成为造成人类季节性流感和历史上大流感的主要病毒,也是病毒研究者的主要研究对象[2.3].20世纪至今先后多次暴发全球性大流感,其中以1918、1957、1968和2009年这4次大流感影响为深远[2,3].
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雪貂感染流感病毒H3N2动物模型的建立
目的 建立甲型流感病毒H3N2感染的雪貂动物模型.方法 按实验要求筛选出流感抗体反应阴性的雪貂,经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染H3N2流感病毒株A/Brisbane/10/07,设立两个稀释度106和107TCID50,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死.感染前采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量,每天记录雪貂一般临床变化.处死时取雪貂肺、肝、脾、小肠、脑组织作病毒滴度检测,肺组织做病理检查.结果 106和107TCID50的H3N2病毒分别感染雪貂,没有雪貂死亡.雪貂感染后都出现一过性的体温升高,体重的下降,流涕、打喷嚏等症状.在鼻甲骨活检物中可测到病毒载量,肠组织可分离到病毒.肺组织以轻度性间质性肺炎为主要病理变化.结论 雪貂感染H3N2病毒株A/Brisbane/10/07后,临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H3N2病毒动物模型已建立,其中106TCID50病毒滴度的是一个建立感染动物模型比较合适的剂量.
关键词： A/Brisbane/10/07 H3N2 雪貂 模型 动物 -
Trizol RNA提取法在雪貂组织的流感病毒H3N2定量PCR检测中优于RNeasy mini kit(Qiagen)柱子法
目的 比较RNeasy mini kit (Qiagen)柱子法和Trizol法提取RNA在雪貂肺和肠组织H3N2 SYBR Green PCR定量中的去干扰作用,从而找到适合该定量体系的RNA提取方法.方法 比较Trizol法,RNeasy mini kit柱子法,改良RNeasy mini kit柱子法1和改良RNeasy mini kit柱子法2提取肺肠组织RNA的质量,RNA逆转录成cDNA后,利用SYBR Green PCR方法检测样品中H3N2的载量,比较产物的特异性,综合评价RNA提取方法.结果 4种方法提取的肺和肠组织的RNA质量不相同,紫外分光光度仪测得RNeasy mini kit柱子法提取的RNA 的A260/280低于1.8,其余3种方法的A260/280在1.8～2.1之间,A260/230只有Trizol法能达到2.0左右,其余3种方法均远低于2.0.电泳可见Trizol法提取的RNA有3条带:28 s、18 s和5 s,而RNeasy mini kit柱子法的RNA除了有28 s、18 s外,还有基因组DNA,改良RNeasy mini kit柱子法1和2提取的RNA只有28 s和18s带.RNA逆转录后进行荧光定量PCR,从溶解曲线看,不论是鼻甲刮取物还是肺肠组织的样品模板,4种方法获得的样品与标准品均为单一峰溶解曲线峰,并且波峰位置重叠.而鼻甲刮取物定量的产物跑琼脂糖凝胶电泳均为单一的特异性条带,而肺肠组织的产物电泳发现:Trizol法获得的模板定量产物与标准品一致,为单一的特异性条带,而其它3种方法获得的模板则均有非特异性条带.结论 鼻甲刮取物的病毒定量选用RNeasy mini kit柱子法提取定量结果与Trizol法一样可靠,说明对于简单样品该体系及引物非常适用,结果可信.对于组织样品肺和肠,Trizol法获得的样品定量结果比其它3种方法可靠.
关键词： 雪貂 H3N2 RNA提取 SYBR Green荧光定量PCR -
唾液酸受体并非流感病毒各亚型在雪貂组织中播散分布的决定因子
目的 探讨流感病毒在雪貂组织中的分布与唾液酸受体的关系.方法 用病毒分离的方法分析流感病毒H5N1( SZA06H,A/VN/1203/04),SH1N1,H3N2(Brisbane/09,HK/09)在雪貂各组织中分布,用直接免疫荧光法分析雪貂各组织的唾液酸受体的分布,并通过体外实验证实活病毒与组织上受体的结合.结果 H5N1(SZ)和H5N1(A/VN/1203/04)在雪貂的肝、脾、肺、肠中有分布,H5N1(A/VN/1203/04)在脑组织中也有分布,而SH1N1、H3N2( Brisbane/09,HK/09)只分布于肠组织.而唾液酸受体SAα2,6Gal和SAα2,3Gal的Ⅰ型受体分布于脾、心、肺、肠、脑组织中,和SAα2,3GalⅡ型受体分布于肝、脾、心、肺、肠、脑组织.SH1N1病毒与SAα2,6Gal能结合,而H5N1与SAα2,3Gal结合.结论 H5N1能在雪貂的多器官组织组织中分布和繁殖,而H3N2和SH1N1仅能在肠组织中分布繁殖.SAα2,6Gal和SAα2,3Gal受体在雪貂多器官组织中均有表达,说明唾液酸受体是病毒进入的门户,但不是病毒分布的决定因子.
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雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型的建立
目的 建立雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型.方法 A/Anhui/1/2013 (H7N9)禽流感病毒经鼻吸入感染雪貂,观察动物临床症状和体征,上呼吸道排毒情况及组织病理学变化.结果 雪貂感染后出现体重下降、活动减少以及打喷嚏的临床表现,上呼吸道、心脏、肝脏及嗅球可检测到活病毒,上呼吸道排毒的峰值出现在感染后的第3～5天.血清抗体滴度高达到1280,外周血淋巴细胞数量减少、粒细胞数量增加.组织病理学显示动物肺脏呈局灶性间质性肺炎及肺泡炎改变,CT显示肺内片状阴影.结论 成功建立雪貂感染H7N9禽流感病毒的动物模型,模型的建立为H7N9禽流感发病机制研究、药物及疫苗的评价奠定了实验基础.
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雪貂微卫星DNA遗传多样性分析
目的 筛选、优化雪貂微卫星DNA引物,评估、分析雪貂种群的遗传多样性.方法 采用21个雪貂微卫星位点,对随机抽取的30只雪貂血液样本进行基因组DNA提取及PCR扩增,PCR产物经2%Agrose电泳和6%PAGE电泳鉴定后进行STR扫描检测,用Popgene1.32软件对STR扫描结果进行数据处理和分析.结果 21个微卫星标记均呈现出遗传多样性,共检测到49个等位基因,观测等位基因数1～4个,平均2.3个;有效等位基因数1.000～3.750个,平均1.6685个;观察杂合度0～0.7333,平均0.3216;期望杂合度0～0.6424,平均0.3394;香隆指数0～1.1773,平均1.0768;多态信息含量0～0.6100,平均0.5485.结论 本文筛选的21对雪貂微卫星引物,通过微卫星扫描分析验证,具有稳定的PCR扩增,微卫星标记均表现为多态性,并处于期望数值范围,没有显著地偏离Hardy-Weinberg平衡期望值.
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建立H5N1流感病毒感染雪貂动物模型
目的 建立甲型H5Nl流感病毒感染雪貂动物模型[1-3].方法 H5Nl流感病毒株A/Vietnam/1203/2004病毒以10(3)和10(4)TCID50滴度分别感染雪貂.对4～10月龄去势雪貂经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死.感染后每天记录雪貂一般临床变化.感染前0d采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量和病毒滴度.处死时取雪貂气管、肺、心、肝、脾、肾、小肠、脑组织作病毒滴度检测和病理检查.结果 H5N110(3)和10(4)TCID50的病毒分别感染雪貂,雪貂死亡都率在33%.10(3)TCID50和10(4)TCID50病毒分别感染雪貂,动物都出现持续3d体温升高,10(4)TCID50组出现超过20%的体重下降.上呼吸道排毒呈现上升趋势,并可在除呼吸系统以外的组织器官中分离到病毒.感染的雪貂病理表现为重度肺炎.结论 雪貂感染H5N1病毒株后在临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H5N1病毒动物模型已建立,10(4)TCID50病毒滴度是一个建立感染动物模型比较合适的剂量.
关键词： A/Vietnam/1203/2004 H5N1 雪貂 模型 -
幽门螺杆菌诱导蒙古沙土鼠肥大细胞瘤2例
据报道肥大细胞瘤可在人类和动物，诸如猫、马、牛、猪、雪貂身上自然发生［1-3］。研究发现某些化学物或放射辐射可导致小鼠发生肥大细胞瘤［4，5］。研究发现，肥大细胞瘤与遗传及环境因素密切相关。幽门螺杆菌是一种高致病能力的菌株，它在炎症启动及调节中发挥举足轻重的作用［6］。肥大细胞是一种可以清除细菌炎症细胞之一。研究发现幽门螺杆菌感染患者的粘膜肥大细胞数量明显增加，该菌被根除后，肥大细胞密度明显降低［7］。目前，关于蒙古沙土鼠幽门螺杆菌相关性肥大细胞瘤病例，尚未见报道。
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幽门螺杆菌动物感染模型的研究近况
动物感染模型对于幽门螺杆菌致病机制的研究、疫苗的研制和药物的筛选具有十分重要的作用.已报道的用于建立该菌动物感染模型的动物有小鼠、大鼠、蒙古沙鼠、豚鼠、猫、狗、悉生生物猪和灵长类动物等.此外也有人利用猫胃螺杆菌感染的小鼠、大鼠模型和鼬鼠螺杆菌感染的雪貂模型来研究幽门螺杆菌.本文就各种幽门螺杆菌动物感染模型的优缺点、适应范围及存在问题作一简要介绍.
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呕吐动物模型的研究进展及评价
该文介绍了目前国外应用较多的几种呕吐模型动物:雪貂,目前理想的呕吐模型动物.国内有人用水貂替代雪貂,证明切实可行;钱鼠(suncus murinus, house musk shrew),用于呕吐模型的小的哺乳动物;大鼠没有呕吐反射,但是其异食痞行为可视为呕吐指标.不同种属动物对不同催吐剂的敏感性不同.
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视力丧失对雪貂声源定位能力的影响
目的利用正常听力的雪貂作为动物模型，测试视力对水平方向绝对声音定位能力的影响。方法制造三种不同视力模型的成年雪貂，分别为正常视力、自幼无视力和成年后无视力，在特殊设计的声音定位测试环境中，比较三组动物的水平方向的绝对声音定位能力。结果自幼无视力成年雪貂定位声源的正确率明显好于成年后视力丧失的雪貂(P＜0.01)，与正常雪貂相比无明显差异。结论在听觉、视觉发育成熟前，视觉的丧失对动物声源定位没有影响；相反，听觉和视觉发育成熟后的视力缺失对声音定位的影响非常明显。
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自幼无耳廓的成年雪貂的水平和垂直方向相对声音定位
目的测试比较正常成年和无耳廓成年雪貂在水平面和正中矢状平面内对声音的定位能力. 方法在特殊设计的隔音测试仓内,连接有计算机控制的测听系统,雪貂事先训练建立声音与给水的条件反射后再用于具体的定位实验,在水平面和垂直面我们比较了围绕正中0°和离水平面45°两侧的声源定位. 分别用500, 100和40 ms时程的持续噪音,其强度是由强到弱. 结果在水平面正常成年雪貂和无耳廓雪貂的声音定位能力评分没有明显差别. 但是在正中矢状平面内两组动物的表现都要差,无耳廓雪貂的定位能力更要差于正常雪貂(P<0.05),对长时噪音的定位有适应改善能力. 说明自幼切除耳廓消弱了动物在垂直平面内依赖于频谱选择特性的部分声音定位能力. 结论外耳的频谱选择特性对水平面空间听觉定位精确率影响不大,但对于矢状垂直面空间听觉定位却非常重要.
