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一起由3C.2a1分支甲型H3N2亚型流感病毒引起的医院暴发疫情分析
目的 通过对某医院一起甲型H3N2亚型流感暴发疫情进行调查和分析,为有效防控医院内发生的流感暴发疫情提供科学依据和经验借鉴.方法 采用现场流行病学调查方法,对某医院流感暴发疫情中病例进行个案调查,采集发热病例咽拭子标本,采用实时荧光PCR方法检测流感病毒核酸,应用MDCK细胞分离流感病毒,并采用全基因组测序方法对分离到的流感病毒进行序列分析.结果 2017年8月1日至7日,某医院呼吸科病区共报告发热病例30例,罹患率为28.58%.现场采集15例发热病例的咽拭子标本,经检测14例(94.3%)病例的标本为甲型H3N2亚型流感病毒核酸阳性;其中3例成功分离到甲型H3N2亚型流感病毒;对分离到的3株毒株进行基因测序分析,HA序列均属于3C.2a1分支,存在N171K、N121K突变.结论 此次疫情为北京市首起由3C.2a1分支甲型H3N2亚型流感病毒引起的医院内流感暴发疫情,提示医院也是流感疫情发生的重点场所.
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广州市2003年流行性感冒监测分析
目的通过对本市建立的流感监测网络所取得的2003年流感监测结果对流感的流行趋势、病原学变化特点进行分析、总结.方法流行病学监测,哨点医院每周填写流感样病例报表并上报;各区、县级疾控中心(防疫站)的流行病学医师对流感样暴发疫点进行个案调查并上报;病原学监测,监测点医院每周采集流感样病人漱口液5-10份进行流感病毒分离;血清学监测,在3、9月对一般人群血清作抗体水平监测,9月份对职业暴露人群进行人禽流感血清监测.结果流行病学监测,全年报告暴发疫情91起,罹患率在0.35%-40.14%之间.病原学监测,全年以H3N2为优势流行株,B型流感病毒只引起散发病例或小暴发.血清学监测,3月和9月两次监测结果表明在流感高峰前后,H1N1、H3N2、B(维多利亚系)亚型阳性率均较一致(x2分别为0.82、2.01、1.34,P值均＞0.05),但B(巴拿马系)抗体9月高于3月(x2=0.022,P＜0.05).9月份职业人员血清学结果为:H1N1、H3N2、B(维多利亚系)阳性率分别为42.97%、88.21%和59.09%.禽H5N1检测均为阴性,H9N2检出5份阳性,阳性率为1.89%.结论本市2003年流感高发于春夏之交,全年以H3N2为优势流行株.
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H3N2亚型人甲型流感病毒HA1序列进化正向选择位点研究
目的 筛选H3N2亚型人甲型流感病毒红细胞凝聚素(HA1)序列中的正向选择位点,为进一步揭示流感病毒的变异规律.方法 从NCBI GenBank和流感数据库中下载甲型流感病毒H3亚型RNA4节段序列,用两步聚类法将全部序列分为6个年代类别,使用固定效应似然比检验模型分别筛选每一类中的正向选择位点,并使用两步聚类法归纳所筛选出位点的正向选择压力变化模式.结果 各年代类别筛选出的正向选择位点不完全相同,共有50个位点在进化过程中经历过正向选择,其中有42个位点属于5个抗原决定簇之一,A、B抗原决定簇在各年代均有较多的位点入选,且承受较大的免疫选择压力.50个位点可被归纳为7种变化模式,前6种模式的位点依次在某一个时间段存在正向选择,第7种模式则在多个年代中均存在正向选择.结论 分析结果提示流感病毒HA1序列在进化过程中的正向选择位点并非恒定,而是在不同年代中存在更替趋势.抗原决定簇A、B的变异在流感进化过程中起关键作用,8个位于非抗原决定簇正向选择位点有可能是未被识别的抗原决定簇位点.
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甲型H3N2亚型流感的中医传变规律及病名探析——基于北京地区934例甲型H3N2亚型流感临床资料
目的:通过观察北京地区2015年及2016年冬季934例甲型H3N2流感阳性病例的症状变化规律,探讨甲型H3N2流感的中医病名.方法:通过回顾2015年11月至2016年3月、2016年11月至2017年2月于首都医科大学附属北京朝阳医院、首都医科大学附属友谊医院、潞河医院、北京中医药大学附属东方医院,北京中医药大学附属东直门医院收集的934例甲型H3N2流感阳性病例,分析于发病第1天、第2天、第3天、第4天前来就诊患者的症状学表现,研究甲型H3N2流感的中医传变规律,从而对甲型H3N2流感的中医病名进行分析总结.结果:934例甲型H3N2流感病例起病第1天、第2天、第3天、第4天样本量分别为349例、414例、154例、17例,其中男399例,女531例;年龄14~89岁,平均年龄(41.22 ±16.63)岁;BMI<18.535例,18.5~23.9385例,24~27184例,27~3271例,>3214例.甲型H3N2流感优势症状比较:其中第1天症状主要表现为发热、恶寒、咳嗽、咽痛、清涕、肌肉酸痛为主要表现;第2天在第1天症状的基础上,出现头痛;第3天与第2天比较,咽痛比例下降,不再为优势症状;起病第4天口干口渴,头晕头重的症状明显,其中发热、恶寒、咳嗽、口渴、头痛的变化具有统计学意义(P<0.05).934例甲型H3N2流感病例的其他症状如寒战、肢体困重、咳痰、鼻塞、咽痒、心悸、纳差、乏力、尿黄等变化具有统计学意义.舌质表现为红舌向暗红舌的演变,舌苔由薄白逐渐转为黄腻,脉象上以浮脉为主,随着疾病的演变,紧脉逐渐减少,滑脉及数脉逐渐增加.结论:甲型H3N2属太阳伤寒,寒邪束表日久容易化热产生里热证候.
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毒热平注射液对甲型流感病毒H3N2体外感染细胞中TLR7信号通路的影响
目的:观察甲型流感病毒H3N2感染人胚肾上皮细胞(HEK-293T)细胞及人肺腺癌上皮细胞(A549)细胞后,对NF-κB转录活性以及TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-β mRNA的影响,探讨H3N2对体外感染细胞中TLR7信号通路的影响及清热解毒中药毒热平注射液的干预作用.方法:采用MTT法体外检测各组药物对293T、A549细胞增殖的影响;H3N2感染293T细胞后,利用双荧光素酶报告系统,以利巴韦林、清开灵注射液为药物对照,检测毒热平注射液各浓度组细胞中NF-κB相对荧光素酶活性;H3N2感染A549细胞后,RT-PCR方法检测各组细胞中TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-β mRNA水平.结果:MTT结果显示,毒热平、利巴韦林、清开灵注射液各浓度不影响细胞正常增殖(P＞0.05).报告基因结果显示,与细胞对照组相比,H3N2感染组细胞NF-κB转录活性显著增高(P＜0.01);与H3N2感染组相比,利巴韦林0.5μg/mL,清开灵1/128稀释组,毒热平1μg/mL,10μg/mL,100μg/mL组均可不同程度下调NF-κB的转录活性(P＜0.01).RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H3N2病毒组的TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-β mRNA表达明显增高(P＜0.01);与H3N2感染组相比,一定浓度的药物组TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-β mRNA表达量明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:流感病毒H3N2攻击细胞可以显著上调TLR7受体的表达和核因子NF-κB转录活性,并引起下游相关靶基因的表达增多.毒热平注射液可以下调H3N2引起的TLR7信号通路的激活,抑制NF-κB的转录活性,减少下游炎性因子TNF-α、IL-8、IFN-β的表达.
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浙江省宁波市2014～2015年H3N2流行性感冒病毒HA1基因与NA基因特性分析
目的 分析2014 ～2015年宁波市H3N2流行性感冒(流感)的流行特征和流行株血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因的变异情况.方法 选择宁波市2014 ～2015年流感流行期间分离的H3 N2代表株17株,进行HA1基因和NA基因扩增、测定,用DNAstar的MegAlign序列分析软件进行分析处理.结果 宁波市2014 ～ 2015年H3 N2流感毒株HA1基因的核苷酸长度均为987 bp,编码329个氨基酸;NA基因的核苷酸长度均为1 410 bp,编码469个氨基酸.2014年H3N2流感病毒HA1基因与2015年相比该区域有10 ～12个氨基酸位点存在差异,其中有5个氨基酸位点涉及HA1区3个抗原决定簇,在158 ～ 160位氨基酸上增加了一个糖基化位点;NA基因发生了6～8个氨基酸位点的替换,2015年与2014年相比在245 ～247位增加了一个糖基化位点.在基因进化树上2014年与2015年的流行株也都形成了独立的分支.结论 宁波市2014 ～2015年间H3N2流感病毒无论是HA1基因还是NA基因均产生了较大的变异,流感病毒的流行应与病毒的抗原性漂移有关.
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犬流感研究新进展
目前已发现多种亚型流感病毒可感染犬,包括H1、H3、H5和H9亚型.其中H3N8和H3N2亚型流感病毒可在犬群中流行,主要引起呼吸道症状.犬流感出现不仅威胁犬的健康,也给公共卫生带来了威胁.本文从生态学特征、病原性、诊断及预防控制等方面对犬流感的新研究进展进行了综述.
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重症甲型流感病毒(H3N2)感染一例
根据血凝素和神经氨酸酶的不同可将甲型流感病毒分为16个亚型[1],其中感染人类并能引起一定范围流行的甲型流感病毒包括H1N1(甲1)和H3N2(甲3)亚型.2009年全球很多国家和地区出现了甲型H1N1流感流行,主要临床表现为流感样症状,可出现病毒性肺炎导致呼吸衰竭、多脏器功能损伤,严重者可以导致死亡[2].本院于2010年11月3日收治1例患者,其咽拭子标本在北京市CDC进行实时PCR检测(RT-PCR),结果显示甲型H3N2病毒核酸阳性,诊断为甲型流感病毒(H3N2)感染重症.虽然患者发病6天内辗转两地三家医院资料欠全,但其临床表现符合甲型流感重症,现报道如下.
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甲型流感病毒(H3N2)对心肌损害的临床观察--附426例临床报告
目的探讨型由甲型流感病毒H3N2亚型引起的流行性感冒(流感)患者的心脏改变及可能的影响因素.方法:单纯上感的258例,重型合并有肺炎的168例,入院后第1日检测心肌酶和心电图,部分病人动态观察心肌酶和心电图变化.结果重型合并有肺炎组心肌酶异常发生率为75%,明显高于单纯上感组的49%,两组肌酸激酶值比较差异无统计学意义,但重型合并有肺炎组的乳酸脱氢酶显著升高.两组心肌酶绝大多数在2周内恢复正常,而部分重型合并有肺炎组心肌酶进行性升高.心电图异常率22%、38%(P＞0.05),但重型合并有肺炎心电图异常表现复杂,病情严重.结论:甲型流感病毒(H3N2)所致流感患者发生心脏损害的机会较大,程度较轻,可能与疾病本身有关,重型合并有肺炎病人的心脏损害程度加重,并可能与年龄和基础疾病有关.
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雪貂感染流感病毒H3N2动物模型的建立
目的 建立甲型流感病毒H3N2感染的雪貂动物模型.方法 按实验要求筛选出流感抗体反应阴性的雪貂,经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染H3N2流感病毒株A/Brisbane/10/07,设立两个稀释度106和107TCID50,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死.感染前采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量,每天记录雪貂一般临床变化.处死时取雪貂肺、肝、脾、小肠、脑组织作病毒滴度检测,肺组织做病理检查.结果 106和107TCID50的H3N2病毒分别感染雪貂,没有雪貂死亡.雪貂感染后都出现一过性的体温升高,体重的下降,流涕、打喷嚏等症状.在鼻甲骨活检物中可测到病毒载量,肠组织可分离到病毒.肺组织以轻度性间质性肺炎为主要病理变化.结论 雪貂感染H3N2病毒株A/Brisbane/10/07后,临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H3N2病毒动物模型已建立,其中106TCID50病毒滴度的是一个建立感染动物模型比较合适的剂量.
关键词： A/Brisbane/10/07 H3N2 雪貂 模型 动物 -
Trizol RNA提取法在雪貂组织的流感病毒H3N2定量PCR检测中优于RNeasy mini kit(Qiagen)柱子法
目的 比较RNeasy mini kit (Qiagen)柱子法和Trizol法提取RNA在雪貂肺和肠组织H3N2 SYBR Green PCR定量中的去干扰作用,从而找到适合该定量体系的RNA提取方法.方法 比较Trizol法,RNeasy mini kit柱子法,改良RNeasy mini kit柱子法1和改良RNeasy mini kit柱子法2提取肺肠组织RNA的质量,RNA逆转录成cDNA后,利用SYBR Green PCR方法检测样品中H3N2的载量,比较产物的特异性,综合评价RNA提取方法.结果 4种方法提取的肺和肠组织的RNA质量不相同,紫外分光光度仪测得RNeasy mini kit柱子法提取的RNA 的A260/280低于1.8,其余3种方法的A260/280在1.8～2.1之间,A260/230只有Trizol法能达到2.0左右,其余3种方法均远低于2.0.电泳可见Trizol法提取的RNA有3条带:28 s、18 s和5 s,而RNeasy mini kit柱子法的RNA除了有28 s、18 s外,还有基因组DNA,改良RNeasy mini kit柱子法1和2提取的RNA只有28 s和18s带.RNA逆转录后进行荧光定量PCR,从溶解曲线看,不论是鼻甲刮取物还是肺肠组织的样品模板,4种方法获得的样品与标准品均为单一峰溶解曲线峰,并且波峰位置重叠.而鼻甲刮取物定量的产物跑琼脂糖凝胶电泳均为单一的特异性条带,而肺肠组织的产物电泳发现:Trizol法获得的模板定量产物与标准品一致,为单一的特异性条带,而其它3种方法获得的模板则均有非特异性条带.结论 鼻甲刮取物的病毒定量选用RNeasy mini kit柱子法提取定量结果与Trizol法一样可靠,说明对于简单样品该体系及引物非常适用,结果可信.对于组织样品肺和肠,Trizol法获得的样品定量结果比其它3种方法可靠.
关键词： 雪貂 H3N2 RNA提取 SYBR Green荧光定量PCR -
不同品系小鼠感染甲型流感病毒肺小血管内血栓形成
目的 本实验旨在观察不同品系小鼠感染甲型流感病毒后肺组织内血栓形成的情况.方法 使用H1N1病毒A/California/7/2009( CA7)株和H3N2病毒A/Brisbane/10/07株,对BALB/C小鼠、Scid小鼠、NOD/LTJ小鼠、BALB/C-nu小鼠、NOD-Scid小鼠和icosl-KO小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒.检测小鼠感染后肺组织病毒拷贝数并观察肺组织病理学改变.结果 H1N1和H3N2滴鼻攻毒的各组小鼠均染毒,病理表现为程度略有差异的间质性肺炎.13只H1N1病毒感染小鼠和6只H3N2感染小鼠在肺组织中观察到多个小血管内有血栓形成,血栓成分主要为纤维素和血小板.结论 各品系小鼠感染H1N1和H3N2流感病毒后均可能出现肺组织内血栓形成.
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甲型H1N1流感流行前美国散发病例的临床特征
20世纪90年代后期,包含禽、人和猪流感病毒基因的三源重配株A型(H1)猪流感病毒的多个菌株和亚型(H1N1、H3N2和H1N2)在北美洲猪群中出现并占优势.
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Vero细胞培养H3N2流感病毒冷适应株条件的优化
目的 对Vero细胞培养H3N2流感病毒条件进行优化.方法 使用Vero细胞培养H3N2流感病毒,对病毒感染复数(MOI)、吸附时间、维持液中NaHC03含量、TPCK-胰酶终浓度和细胞病变效应(CPE)等培养条件进行优化.结果 在MOI为0.05,病毒吸附1.5h,病毒维持液中6.6％ NaHCO3溶液加入量为2％,TPCK-胰酶终浓度为1 mg/L,40％～50％细胞出现CPE情况下收获病毒,血凝(hemagglutination,HA)效价高.结论 优化后的培养条件可用于大规模流感疫苗的生产.
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姜黄素体外抗流感病毒H1N1、H3N2实验研究
目的:观察姜黄素提取物体外对流感病毒H1N1、H3N2的抑制作用.方法:用狗肾细胞(MDCK)观察姜黄素体外对A型流感病毒H1N1亚型、A型流感病毒H3N2亚型病毒的直接杀灭作用.结果:姜黄素大无毒浓度为12.5g/L,对H1N1有效抑制浓度为6.25g/L,对H3N2有效抑制浓度为1.56g/L.结论:姜黄素提取物确有明显的抗H1N1、H3N2复制作用.
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武汉市儿童甲型H3N2亚型流感病毒基因特性分析
目的 研究甲型H3N2亚型流感病毒(简称A(H3N2)流感病毒)的血凝素(hemagglutinin,HA)基因序列,与流感疫苗株基因序列进行对比分析,了解武汉市2017年儿童中A(H3N2)流感病毒基因变异及3C.2a1次分支病毒的流行状况.方法 采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对30株A(H3N2)流感病毒HA基因全长进行扩增,测序后进行基因序列和进化分析.结果 2017年,武汉市1 041份儿童流感样病例标本中,流感病毒阳性标本219份,其中A(H3N2)流感病毒阳性106份(占阳性标本的48.4％),高峰主要集中在7～9月.HA基因进化分析显示,30株A(H3N2)流感病毒均属于3C.2a分支,其中14株属于3C.2a1次分支.与A/Hong Kong/4801/2014(2017-2018年度北半球流感疫苗推荐H3N2组分)HA氨基酸序列比较,出现K92R、N121K、T131K、T135K/N、R142K/G、N171K、B261Q、H311Q、I406V、G484E等氨基酸位点变异,其中出现在3C.2a1次分支内的变异位点包括K92R、T135N、N171K、H311Q、I406V和G484E.结论 与当季的流感病毒疫苗内组分序列比较,2017年武汉市儿童中流行的A(H3N2)流感病毒HA抗原决定簇内出现多个位点变异,属于3C.2a1次分支的病毒接近50％.
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南京市2007-2013年H3N2流感HA分子进化特征分析
目的 分析2007-2013年南京市H3N2亚型流感HA基因分子学特征.方法 选择2007-2013年59株H3N2亚型流感分离株,自行设计HA片段引物扩增分离毒株HA片段并测序,利用DNAStar、MEGA等软件对HA分子学特征进行分析;结果 发病时间存在明显的季节性;进化树分析2007-2013年分离株按年代分成3个分支;分离株较疫苗株及不同年份之间,发生多个抗原位点及受体结合位点氨基酸的替换;2007-2013年,我市H3N2亚型流感流行情况出现两次波动,可能同基因的突变、重组有关.结论 抗原位点及受体结合位点氨基酸的突变,对流感的防控及疫苗的保护效果产生极大的挑战.
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H5N1亚型和H3N2亚型禽流感病毒广西株NS基因的克隆和序列分析
目的 对3株分离自广西的禽流感病毒的NS基因进行序列分析,试图从分子水平分析和了解广西地区禽流感病毒NS基因的变异特点和进化规律.方法 根据GenBank上登录的已知禽流感病毒的NS基因全序列设计引物,对3株2004-2005年分离自广西的禽流感病毒株A/DK/GX/1566/04(H3N2)、A/Goose/GX/737/05(H5N1)、A/Goose/GX/2775/05(H5N1)的cDNA进行PCR扩增NS基因,并将其克隆到pMD-18T载体上,分别获得全长为855bp、834bp、837bp的NS基因全序列.结果 2株H5N1亚型禽流感病毒广西株间NS基因序列的同源性为95.3%,而2株H5N1亚型禽流感病毒株与H3N2亚型禽流感病毒株之间NS基因序列的同源性为94.0%~94.1%.H5N1亚型禽流感病毒广西株的NS基因在第238-253位核苷酸处均发生了15个核苷酸缺失,与我国广东、香港、云南、湖南、湖北及东南亚等不同地区的毒株比较,NS基因的核苷酸同源性为70.2%~97.6%.在NS基因系统进化树中,3株禽流感病毒广西株都属于A亚群,但处在不同的分支上,其中A/DK/GX/1566/04(H3N2)与广东、香港2001-2003年分离株处于同一分支;A/Goose/GX/737/05(H5N1)、A/Goose/GX/2775/05(H5N1)与我国华南地区以及韩国、越南、泰国等亚洲东南部国家的2003年以后的分离株有共同起源.结论 3株2004-2005年分离自广西的禽流感病毒株NS基因之间的同源性均高于94%,都属于A亚群.
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增强免疫力预防甲型H1N1流感的保健饮食
1918年的流感大流行虽已过去90多年,但现仍不时地滋扰着人类.甲型H3N2流感病毒是流行循环中季节性流感主要的类型[1].2009年3～4月美国和墨西哥发现了流感病毒变异的新型流感,世界卫生组织(WHO)定名为甲型H1N1流感[2],6月中旬WHO将流感警戒从5级升至高级6级,宣布甲型H1N1流感大流行.入冬以来,全球甲型H1N1流感暴发第2波,防控流感形势严峻.
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日照市流感病毒流行及H3N2亚型血凝素和神经氨酸酶变异情况研究
目的:分析近年来日照市流感病毒流行以及H3N2亚型流感病毒血凝素HA和神经氨酸酶NA编码基因变异情况.方法:PCR扩增甲型流感病毒HA和NA编码基因特异性片段,PCR结合核酸序列分析检测11例流感病毒分离毒株HA和NA编码基因变异,所获序列采用MAGA软件与WHO推荐的流感疫苗株序列进行比对分析.结果:日照市自2009年开展流感网络监测以来,每年流行的流感病毒毒株有一定变化,新甲型H1N1流感病毒一直为流行毒株,之后依次为甲型H3N2流感病毒毒株和B型Yamagata系毒株;根据2013-2015年度的11株甲型H3N2流感毒株基因序列分析结果显示,流感病毒存在一定的序列差异,但与流感疫苗推荐的序列仍有较高的吻合度.结论:流感病毒在流行过程中每年的优势流行毒株存在着交替的现象,且流感病毒在流行过程HA和NA编码基因易发生变异,因此加强流感病毒变异的检测对了解其变异规律、筛选疫苗株具有重要意义.
