食品安全:未来不是梦

"清明时节雨纷纷,路上行人欲断魂",在今年的清明节,对于从多的食品企业来说正如诗中所写的一样,充满了凄凉和悲伤的气氛.

主动脉腔内修复术中垃圾足的处理

自从1991年Parodi等[1]首次运用支架型人工血管完成第1例腹主动脉瘤腔内修复以来,包括腹主动脉瘤和主动脉夹层的腔内支架型人工血管修复手术(endovascular aortic repair, EVAR),已走过十几年的历史.随着这一新技术的开展,相关的临床研究,如新近发表的EVAR1和2以及DREAM临床试验结果[2],不但证实了其在降低死亡率方面的优越性之外,也在提醒人们EVAR也存在着特有缺陷,如一些不同于传统开放手术的并发症.现将我科EVAR术中下肢动脉急性栓塞2例探讨如下.

为美梦选个好枕

携带DREAM基因小分子干扰RNA重组质粒的构建

背景:DREAM是一种多功能蛋白,在细胞中不同位置与不同靶蛋白结合,体外细胞培养和动物实验均证明DREAM参与了许多疾病的发病机制.目的:构建携带DREAM基因的小分子干扰RNA重组质粒.方法:设计并合成shRNA对应的两条互补的寡核苷酸链,pDC316-EGFP-U6质粒经BamHⅠ和HindⅢ双酶切与退火后的寡核苷酸连接,转化感受态E.coli DH5α,获得阳性克隆进行PCR和测序鉴定.结果与结论:经PCR、酶切及测序证实,重组质粒pDC316-EGFP-DREAM-shRNA-U6片段大小为473 bp,其中插入的片断序列和位点与预期完全一致,说明pDC316-EGFP-DREAM-shRNA-U6重组质粒构建成功.

染料木素磺酸钠对脑缺血再灌注损伤的保护作用及DREAM和PSD95的表达变化

目的 研究染料木素磺酸钠(GSS)对脑缺血再灌注损伤的保护作用,并初步探讨转录抑制子DREAM及突触后致密区蛋白95(PSD95)表达的变化.方法 以大鼠大脑中动脉栓塞制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血后10min于舌下静脉给不同剂量的GSS.再灌注24h,行神经功能学评分.麻醉后,腹腔静脉取血并分离血清.取脑,一组前脑做TTC染色,测定脑梗死体积；另一组取损伤侧脑组织制成10％的脑组织匀浆,比色法测血清及脑组织匀浆LDH活性；另取半暗带区脑组织,Western blot方法检测脑组织DREAM蛋白的表达.结果 模型组大鼠出现明显的脑梗死区及神经功能缺损,血清LDH活性升高(P＜0.01),缺血侧脑组织LDH活性降低(P＜0.05),皮层半暗带区脑组织DREAM蛋白表达降低(P＜0.05),PSD95蛋白表达升高(P＜0.001).与模型组相比,1mg/kg及2mg/kg GSS治疗组脑梗死体积减小；神经功能评分降低(P＜0.01,P＜0.05),血清LDH活性降低(P＜0.05),缺血侧脑组织LDH活性升高(P＜0.05)；2mg/kg GSS治疗组皮层半暗带区DREAM蛋白表达升高(P＜0.01),PSD95蛋白表达降低(P＜0.05).结论 GSS对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其保护机制与GSS提高转录抑制子DREAM的表达,从而抑制NMDA受体介导的兴奋性毒性损伤有关.

针对DREAM基因序列外显子的siRNA设计

目的:针对DREAM基因中外显子序列,设计并筛选出起作用的siRNA,为进一步研究以DREAM为靶标的基因治疗提供依据.方法:通过利用生物信息学的方法设计出66条潜在的针对DREAM基因中外显子序列的siRNA序列.潜在的序列根据G+C含量分析及Genbank BLAST检测,我们筛选了三条较理想的DREAM基因siRNA靶标,并将其构建到pENTR/H1/TO载体中,转染细胞后提取总蛋白并用Western blot方法检测DREAM蛋白的表达水平.结果:示外显子9中5’末端位置为1253的序列能够抑制80％的DREAM的蛋白表达.结论:这一研究结果为进一步siRNA类药物的实验研究提供了理论基础.

一个功能丰富的转录调控分子——下游调控元件拮抗分子

下游调控元件拮抗分子(downstream regulatory element antagonist modulator,DREAM)与钙衰蛋白(Calsenilin)和钾通道辅助亚基(potassium channel interacting protein 3,KChIP3),三者同属于神经钙感受器蛋白(neuronal calcium sensor,NCS)家族,由同一基因编码,但亚细胞定位不同且执行不同功能,其中DREAM定位于细胞核,有4个EF手型结构域(EF-hand-like motifs)能与钙离子可逆结合,诱导蛋白空间结构变化,结合到多种基因的下游调控元件(downstream regulatory element,DRE)位点发挥基因转录调节作用.DREAM在中枢神经系统(central nervous system,CNS)尤其是小脑皮层中高表达,通过调控N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)影响学习和记忆,也参与阿尔兹海默症发病、炎症反应、血栓形成.随着更多DREAM新功能的发现,其在CNS中的生物功能受到更多关注.本文回顾DREAM的发现历史,分析该蛋白的结构功能特点、组织分布,讨论了近些年来在DREAM入核的调控、以及特有的钙依赖的基因调控机理方面研究进展,重点关注了DREAM-强啡肽原(prodynorphin,PDYN)-强啡肽(dynorphin,DYN)通路调节慢性疼痛的可能机制.

下游调控元件拮抗性调节子在疼痛信号调控中的作用研究进展

作为一种新型的结合Ca2+的转录抑制子,下游调控元件拮抗性调节子(downstream regulatory element antagonist modulator,DREAM)/钾离子通道相互作用蛋白3(Kv channel interactingprotein 3,KChIP3)/calsenilin因其功能多样,近年来受到关注.结合DREAM结构、功能的近期研究结果,现就疼痛信号调控中DREAM的Ca2+依赖性和非依赖性转录抑制机制作一综述.

前强啡肽基因及其转录调控子研究进展

疼痛研究的近进展表明激活内源性阿片受体成为治疗慢性疼痛的重要方法.在内源性阿片系统领域的许多发现提供了疼痛调制的新策略,已经证实下游调控元件拮抗剂调节子(DREAM)通过调节前强啡肽基因的转录而成为脊髓水平疼痛信号转导过程的重要分子.现就前强啡肽基因及其转录调控子的研究进展进行了综述.

下游调控元件拮抗调节子基因在人肝癌组织中的表达及其意义

目的 观察人肝癌组织下游调控元件拮抗调节子(DREAM)的表达.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中DREAMmRNA基因的相对表达量,并采用免疫组织化学法检测DREAM在上述组织中的表达情况.结果 80%(8/10)的肝癌组织中DREAM表达缺失,而癌旁组织中仅30%(3/10)该基因表达缺失,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 中晚期肝癌中DREAM表达处于失活状态,可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.

DREAM信号通路调控疼痛敏感化的研究进展

近年来通过对下游调控元件拮抗剂调节子(downstream regulatory elementantagonistic modulator,DREAM)基因剔除小鼠的研究发现,在急性疼痛或慢性病理性疼痛等动物模型中,DREAM对疼痛行为的敏感化具有调控作用.存在于脊髓神经细胞中的DREAM是一种新型的Ca2+结合蛋白,是调控前强啡肽基凶表达的转录抑制物[1-3].通过药理学及生物化学分析可知,由于内源性K阿片系统的激活,导致DREAM基因剔除小鼠对疼痛的反应明显减少,同时DREAM的缺乏也可减少机体对炎症性疼痛的反应[4-5].因此,DREAM及其通路的研究成为治疗慢性疼痛的新亮点.

DREAM A和B在原代培养的小鼠神经细胞中的表达

目的:研究DREAM蛋白的2个主要亚型DREAM A和DREAM B在原代培养的小鼠大脑皮层星形胶质细胞、小鼠大脑皮层γ-氨基丁酸能神经元以及小鼠小脑谷氨酸能神经元中的表达水平的差异.方法:提取原代培养的小鼠大脑皮层星形胶质细胞、小鼠大脑皮层γ-氨基丁酸能神经元以及小鼠小脑谷氨酸能神经元的RNA,采用普通PCR及real time PCR的方法检测上述各种细胞中DREAM蛋白2个亚型A和B的mRNA的表达水平.结果:DREAM的两个亚型A和B在上述三种神经细胞都存在.在发育成熟的原代培养细胞中,DREAMA的mRNA水平要远高于DREAM B.在三种不同的细胞中,谷氨酸能神经元表达DREAM A的水平高.结论:DREAM的两个亚型A和B在小鼠三种原代培养的神经细胞中的表达水平及其差异提示DREAM A是成年小鼠中DREAM的主要亚型,DREAM A和B在不同类型的神经细胞中发挥的作用及其机制有所不同.

DREAM的两个亚型A和B在小鼠神经和非神经组织中的表达

目的:研究并比较DREAM蛋白的2个主要亚型DREAM A和DREAM B在小鼠多种组织尤其是神经组织的表达水平的差异.方法:取不同年龄小鼠的各种组织匀浆后提取RNA,采用real time PCR的方法检测各种组织中DREAM蛋白2个亚型的mRNA的表达水平.结果:DREAM的两个亚型A和B在神经和非神经组织中广泛存在.在大脑皮层、小脑、海马及下丘等神经组织中DREAM A的表达水平要远高于DREAM B,并且在小鼠上述神经组织中DREAM A随着动物发育成熟,表达水平会逐渐升高,而DREAM B在神经组织发育初期呈较高水平表达.结论:DREAM A是成年小鼠中DREAM的主要亚型,而DREAM B可能在动物的发育早期发挥一定作用.