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蛋白激酶A和蛋白激酶C对豚鼠心肌细胞延迟整流钾电流的作用
目的:研究蛋白激酶A和蛋白激酶C对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(Ik)的影响.方法:采用电极内液浓度差扩散法进行细胞内给药,利用全细胞膜片箝技术测定单细胞Ik.结果:cAMP150 μmol/L 使Ik及Ik,tail(pA/pF) 从13.7±2.1和6.1±0.3增至18.5±3.3和6.4±2.1(P<0.01,n=6);8-CPT-cAMP150 μmol/L使电流(pA/pF) 从11.4±1.8及5.3±0.6增至17.9±4.0和6.2±1.3,PKA的选择性抑制剂6-22 1.0 μmol/L的可逆转二者的作用.cAMP使Ik的激活曲线左移,半激活电压(V1/2)从+23.3 mV移至+18.7 mV,激活曲线斜率(k)在用药前后变化较小.10 μmol/L PMA可以分别使Ik 和Ik,tial (pA/pF) 从12.9±1.8和5.0±1.7升至23.7 ±2.8和7.5±1.1.PMA使I-V曲线幅值增加,并随去极化电压的升高其作用加强,同时PMA使通道的激活曲线k从+15.3 mV升到 +25.6 mV,但对V1/2 基本无影响.结论:蛋白激酶A和蛋白激酶C均可增加豚鼠心肌细胞Ik,但二者作用特点有所不同.
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苯二氮类药物对鼠中枢杏仁核神经元电活动的影响
苯二氮草类(Benzodiazepines,BZ)药物是临床普遍应用的静脉麻醉药,随着新型制剂咪唑安定及其拮抗剂氟马泽尼的推出,使其应用更为广泛,但目前对该类药物的作用机理尚未完全明了,本研究应用全细胞膜片箝技术观察BZ药物对杏仁核神经元电活动的影响,为探讨其中枢作用机理提供进一步理论依据.
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甲状旁腺素增加心率的机制研究
目的研究甲状旁腺素(PTH)增加心率的机制.方法运用微电极、膜片箝技术,记录PTH对家兔自律性动作电位和兔起搏离子流的影响.结果2×10-7 mol/L nifedipine使窦房结细胞动作电位的幅值减小及自律性减慢(P＜0.05).PTH 20 nmol/L增加窦房结动作电位的自律性及动作电位幅值的作用可被nifedipine减弱(P＜0.05).PTH 10 nmol/L使酶解游离窦房结细胞起搏离子流(If)明显增加.结论甲状旁腺素通过增强窦房结细胞起搏离子流If及钙内流来增加窦房结的自律活动.
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重组人白细胞介素-1β对小鼠骨髓基质细胞K+通道的影响
本文用细胞贴附式和内面向外式的膜片箝单通道记录方式研究了小鼠骨髓基质细胞K+通道的动力学特性以及重组人白细胞介素-1β(IL-1β)对通道的影响, 发现了骨髓基质细胞膜上存在一类性质类似于延迟整流的K+通道的电压依赖性K+通道, 单通道电导为16.7±1.4 pS, 通道的动力学特性具显著的电压依赖性.1000 U/ml IL-1β使单通道电导增加到26.1±3.6 pS, 显著增加通道的开放概率, 延长开放时间τo2, 缩短关闭时间τc2, 并诱导通道出现多级开放.研究表明K+通道的激活参与了细胞因子IL-1的生物信号转导.
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Cs对兔窦房结细胞起搏离子流If和IK及自律活动的影响
运用微电极记录窦房结细胞动作电位及穿孔膜片箝技术(perforated patch)记录酶解游离的窦房结细胞电流,研究兔心窦房结的起搏原理.实验结果显示,Cs对自律性动作电位的频率及4期自动除极速率仅有轻度抑制作用.在同一细胞、同一时间、同一测试电位范围内,Cs能基本阻断If及它的电导变化而对Ik电流无明显抑制作用.上述结果表明在兔心窦房结细胞的起搏活动初期,If不是起搏的主要因素.
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粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导的巨噬细胞外向K+电流的特性
以粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,16 ng/ml)长期(0.5～6 d)刺激小鼠腹腔渗出的巨噬细胞,采用全细胞膜片箝技术研究在GM-CSF刺激过程中细胞膜电流的变化,观察到一种GM-CSF诱导的瞬间失活的外向K+电流(记作IA),该电流在生理电压范围内可发生稳态失活,且当施加0.5 Hz的去极化脉冲刺激时其失活具有频率依赖性.该电流对胞外4-AP(3 mmol/L)高度敏感,胞内Ca2+浓度[Ca2+]i升高可抑制其幅度,环己酮亚胺(0.3μg/ml)作用细胞12 h可抑制其表达.值得注意的是这种K+电流的表达和相应电导的激活行为及动力学均随GM-CSF刺激时间长短而异.GM-CSF作用2 d,表达该电流的细胞数增至大(大约55%),通道蛋白的密度亦达高峰,该电流激活的半值电导电位V1/2低,为-27.55 mV,电流激活和失活迅速.随着GM-CSF作用时间的继续延长,表达该电流的细胞数下降,通道蛋白不断下调,电流激活曲线向正电位方向移动,电流激活和失活的时间过程减慢.这些结果表明,GM-CSF可诱导一种瞬间失活的外向K+电流(IA)的表达,提示该电流可能与GM-CSF激活的巨噬细胞的功能活性状态密切相关.
关键词： 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 外向K+电流 巨噬细胞 膜片箝 -
游离心肌细胞晚钠通道爆发型开放模式的电位依赖性
应用膜片箝技术记录豚鼠游离心室肌细胞钠通道电流,发现除极可引起晚钠电流爆发型开放,而复极可终止爆发型活动.爆发型模式的通道电流不仅有浓度依赖性和电位依赖性,其开放时间常数也随箝制电位变正而增大.多步阶梯式除极和斜线除极的实验结果首次表明电位变化愈迅速、除极步数愈多,爆发型出现的机率也就愈高.
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17β-雌二醇对大鼠海马神经元延迟整流型钾离子通道活动的影响
用膜片箝技术的细胞贴附式和内面向外式,研究17β-雌二醇(E2)对大鼠海马神经元延迟整流型K+通道的影响.结果表明,1.0和10.0 nmol/L E2可分别使42 pS K+通道开放概率由(67.4±18.2)%下降到(41.2±12.5)%和由(56.3±15.8)%下降到(13.2±12.6)%,通道开放频率由(43.40±6.7)Hz下降到(27.68±9.1)Hz和由(38.19±10.1)Hz下降到(15.79±3.5)Hz,通道平均开放时间缩短,平均关闭时间延长,但通道电流幅度元显著改变,提示E2对海马神经元42 pS K+通道的活动具有抑制作用,这种作用可能是激素直接作用于细胞膜的结果.
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膜片箝pClamp采样软件中的P/N漏减分析
本文采用大鼠海马脑片盲法的全细胞记录技术, 研究了Axon公司pClamp采样软件Clampex中P/N漏减的功能意义和作用机制, 对P/N漏减脉冲电流的采集以及漏减脉冲的时间、极性、箝位电压、数目、位置等参数的设置进行了详细分析.结果表明, 在采集电压门控性离子通道电流时, 合理地利用P/N漏减会使离子电流记录更为准确可靠.
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东亚钳蝎毒素多肽纯化组份BmK AS-1对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感型钠通道电流的作用
目的研究国产东亚钳蝎(Buthus martensi Karsch, BmK)毒素多肽的纯化单体组份BmK AS-1对大鼠背根神经节(DRG)神经元河豚毒素不敏感(TTX-R)钠电流的作用.方法采用膜片箝全细胞记录方法,观察BmK AS-1对单个DRG细胞TTX-R钠电流幅值的影响.结果 BmK AS-1剂量依赖地抑制TTX-R钠电流,且高剂量(10 μg/ml)BmK AS-1几乎完全抑制TTX-R钠电流,其抑制作用不可逆.结论 BmK AS-1显著抑制TTX-R钠电流,这种抑制作用可能是其镇痛作用的机理之一.
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六肽FRCRSFa对大鼠心室肌Na+/C-a2+交换的抑制
目的:研究六肽FRCRSFa对大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换的作用及其特异性.方法:用膜片箝全细胞记录法测定Na+/Ca2+交换电流(INaCa2+)及其它离子通道电流.结果:六肽FRCRSFa对大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换呈剂量依赖性抑制,内向和外向INa+/Ca2+的IC50分别是2μmol/L和4 μmol/L.FRCRSFa 5 μmol/L对L型钙电流,门控钠电流、瞬时外向钾电流和内向整流钾电流均无显著抑制作用.结论:FRCRSFa是一个对Na+/Ca2+交换选择性较高的抑制剂,对研究心肌细胞Na+/Ca2+交换具有较高价值.
关键词： FRCRSFa 膜片箝 Na+/Ca2+交换 心肌
