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AMPA受体和相关蛋白在束缚应激大鼠相关脑区的表达变化及逍遥散对其影响
目的:观察海马及杏仁核α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基和相关调节蛋白在束缚应激状态下蛋白表达变化及逍遥散的调节作用.方法:使用每天捆绑3 h的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21 d后用western blot方法检测各组大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)和杏仁核的AMPA受体亚基GluR2/3及N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)蛋白表达的情况.结果:7 d应激可使DG和杏仁核的GluR2/3、NSF表达显著降低(P均<0.1315),使PICK1在CA1区的表达量显著增多(P<0.05),逍遥散对PICK1变化显示出一定调节作用.21 d应激可使CA1区的GluR2/3、NSF表达升高,其中GluR2/3有显著性差异(P<0.01),而在杏仁核表达有降低趋势,逍遥散对其均有显著调节作用(均为P<0.05),21 d应激使杏仁核PICK1表达量出现升高趋势,逍遥散可显著降低其表达(P<0.05).结论:AMPA受体在短期重复应激和慢性应激状态下反应不同,海马和杏仁核反应相反,逍遥散对慢性应激状态下AMPA受体表达的调节作用较短期重复应激强.
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PICK1的结构与功能研究进展
PICK1蛋白是一个从线虫到人都高度保守膜周蛋白,在多种组织中表达,尤以脑和睾丸的表达高.在细胞内,PICK1定位于核周区和诸如神经突触的特化细胞结构中.PICK1蛋白含一个PDZ结构域和一个BAR结构域,PDZ结构域能和许多膜蛋白结合.而BAR结构域能与脂质分子(主要为磷酸肌醇)相结合,通过这种机制PICK1可调节相关蛋白的亚细胞定位和膜表达.由于各蛋白与PICK1相互作用的PDZ结合基序不同,可利用与特定蛋白结合基序相同的PDZ结合多肤竞争性地结合PDZ结构域,特异性地阻断该蛋白的作用,从而特异性地增强或减弱PICK1在某组织中的作用,为PICK1的临床应用提供了药理基础.
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PICK1抑制剂FSC231的镇痛作用研究
目的 研究蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(protein interacting with Cαkinase 1,PICK1)抑制剂FSC231的镇痛作用,为开发可用于临床疼痛治疗的PICK1抑制剂提供依据.方法 选用40只昆明种小鼠分别于右后掌皮下注射1.4％醋酸溶液、腹腔注射0.6％醋酸溶液制备醋酸致痛模型、左侧足趾注射20 μL完全弗氏佐剂(CFA)溶液制备炎症性疼痛模型,左后足趾注射辣椒素溶液制备神经源性疼痛模型.将以上实验动物随机分为4组:对照组和FSC231 3个剂量给药组,每组10只.FSC231 3个剂量给药组分别于造模成功后腹腔注射FSC231 7.83、39.20、78.40 μg/kg,给药1次.对照组动物注射等体积的生理盐水.给药1h后,分别测定小鼠后掌抬腿次数、抑制率、小鼠扭体反应次数、潜伏期、小鼠热痛阈值、脚爪肿胀体积,热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)和机械痛阈值.结果 与对照组比较,FSC231可剂量依赖性(7.83 ～78.40)μg/kg减少小鼠5 min内抬腿次数和6～ 10 min内抬腿次数,6～10 min内抑制率分别为18.74％、32.59％和45.52％;与对照组比,不同剂量FSC231均可一定程度延长小鼠的致痛潜伏期,但仅高剂量组小鼠的镇痛潜伏期有显著增加(P＜0.05);FSC231可剂量依赖性(7.83～78.40) μg/kg减少小鼠的扭体反应次数,其中以高剂量组的作用为显著(P＜0.01).左侧足趾注射完全弗氏佐剂(CFA)溶液后,小鼠出现舔患足,且患足出现红、肿等现象,表明成功制备了小鼠慢性炎性疼痛模型.给予不同剂量的FSC231后,给药组基础痛阈值较对照组显著升高(P＜0.05),但后肢足肿胀体积显著增加(P＜0.05).小鼠左后足趾注射辣椒素后其热缩足反射潜伏期(TWL)和机械痛阈值明显降低,表明成功制备神经病理性疼痛模型.FSC231可剂量依赖性(7.83～78.40μg/kg)升高TWL及机械痛阈值(P＜0.05,P＜0.01).结论 PICK1抑制剂FSC231对化学刺激性疼痛、炎症性疼痛以及神经源性疼痛均具有明显镇痛作用,表明PICK1可作为镇痛作用的新靶点,而PICK1抑制剂FSC231可作为镇痛作用的候选药物.
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PICK1蛋白83位点氨基酸对PDZ结构域的影响
目的:研究PICK1 (protein interacting with C kinase 1)蛋白PDZ结构域内83位点赖氨酸( K83)对PICK1和AMPA受体GluR2亚单位相互作用的影响.方法:利用计算机对PICK1 PDZ结构域和GluR2 C末端4个氨基酸残基进行对接模拟,然后将K83进行虚拟点突变,计算并观察突变后结构和键能的改变.利用实验室已有的野生型全长PICK1 cDNA质粒为模板,构建点突变质粒,与野生型GluR2共转到HEK293T细胞,观察两者在细胞内定位和分布的改变.结果:当野生型PICK1与GluR2共转染时,HEK293T细胞有大量PICK1和GluR2共定位的集簇(cluster).当我们把构建的PICK1突变体与GluR2共转染时,不同的突变体表现出不一样的改变.结论:改变K83位点的氨基酸结构,很可能会改变PICK1 PDZ结构域与GluR2 C末端结合所形成的疏水、氢键、静电相互作用,使得PDZ结构域与GluR2 C末端的结合能力发生不同程度的改变.
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PICK1在中枢神经系统疾病中的作用
PICK1(protein interacting with C kinase 1)是一种含PDZ(PSD-95/Dlg/ZO1)结构域和BAR (Bin/amphiphysin/Rvs)结构域的蛋白,它可通过PDZ结构域与多种蛋白发生相互作用,其中一些蛋白与中枢神经系统(CNS)疾病密切相关.文中综述了近年来关于PICK1在几种中枢神经系统疾病中的作用研究,以期对疾病研究和临床治疗提供参考.
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三七超临界CO2萃取物对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用
目的 研究三七超临界CO 2萃取物(SFE)对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用,并探讨其可能作用机制.方法 以谷氨酸损伤PC12细胞为模型,采用MTT法检测细胞存活率,LDH法检测乳酸脱氢酶的漏出率,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡,Fluo-3/AM荧光染色法检测细胞内钙离子浓度,Western blot法检测PICK1、GluR2蛋白的表达.结果 谷氨酸对PC12细胞具有兴奋性毒性作用,其半数抑制浓度(IC50)为25 mmol·L-1.不同浓度三七SFE(25、50、100 mg·L-1)、PICK1抑制剂FSC231(100μmol·L-1)、三七SFE(100 mg·L-1)+FSC231(100μmol·L-1)预处理可明显提高细胞存活率,减少LDH的释放,降低PC12细胞的凋亡率,减少钙离子内流,降低PICK1蛋白表达,增加GluR2蛋白表达.结论 三七超临界CO 2萃取物对谷氨酸损伤后的PC12细胞具有保护作用,机制可能与抑制PICK1、增加GluR2蛋白表达有关.
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PICK1蛋白生理功能及其作为药物新靶点研究进展
PICK1蛋白(protein interacting with C alpha kinase 1)是一种同时具有PDZ和BAR区域的支架蛋白,在哺乳动物体内与多种蛋白质相互作用,并被证明在多种生理过程中发挥重要的调节作用,同时参与了多种疾病病理过程.因此,PICK1蛋白可能成为极具前景的疾病治疗靶点.该文通过对近年来国内外发表的相关文献进行整理与分析,综述了PICK1蛋白的生理功能与其作为药物靶点的研究新进展,旨在为PICK1蛋白的深入研究提供理论支持.
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PICK1对人肝癌细胞HepG2增殖的影响
目的：检测蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(PICKl)在肝癌、癌旁组织中的表达,初步探讨 PICK1对人肝癌细胞HepG2增殖的作用及其可能机制。方法应用 qRT-PCR、Western blot、HE和免疫组织化学染色法分析比较人肝癌和癌旁组织中PICK1蛋白的表达；培养HepG2细胞,体外给予不同浓度的FSC-231(PICKl的PDZ结构域小分子抑制剂),通过MTT法检测HepG2细胞的活力；采用流式细胞术检测HepG2细胞周期变化；进一步采用Western blot法检测G1/S-特异性周期蛋白-D1( CyclinD1)、原癌基因C-myc和Notch信号通路蛋白表达。结果肝脏病理组织学检测提示肝癌组织病变明显。免疫组化结果显示,肝癌组织中相比癌旁组织中的PICKl抗原阳性细胞显著增多( P<0．05),且多分布在肝实质细胞质区域；qRT-PCR和Western blot结果显示肝癌组织中PICK1 mRNA及蛋白水平与癌旁组相比显著升高(P<0．05)；体外实验证明,与阴性对照组相比,FSC-231能够抑制HepG2细胞的增殖,并且明显抑制 CyclinD1、C-myc和Notch1同源蛋白1(Notch1)、Hes-1蛋白表达(P<0．05)。结论提示PICK1可能参与肝癌的发生发展,PICK1的PDZ结构域抑制剂可以抑制肝癌细胞的增殖,此作用可能与Notch信号通路相关。
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PICK1在肝纤维化中的表达变化及功能研究
目的：研究蛋白激酶 C 结合蛋白1（PICK1）在小鼠肝纤维及活化的肝星状细胞中的表达变化，并探讨其对人肝星状细胞株（LX-2）活化的影响。方法建立四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝纤维化模型，观察 PICK1在肝纤维化过程中的表达变化；转化生长因子β1（TGF-β1）刺激 LX-2活化，West-ern blot 测定 PICK1的蛋白表达情况；转染 PICK1过表达质粒至 LX-2中，再以 TGF-β1诱导活化，Western blot 检测PICK1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、I 型胶原（Col1a1）和Smad2、3及其磷酸化水平的蛋白表达情况。结果正常组小鼠肝脏中 PICK1表达较高，随着肝纤维化的加重，PICK1的表达逐渐递减。TGF-β1诱导活化的 LX-2细胞中 PICK1表达降低。转染 PICK1过表达质粒后，TGF-β1诱导的α-SMA、Colla1的表达明显减少，且 Smad2、3磷酸化水平显著下降。结论 PICK1在纤维化肝组织及活化的 HSC 中表达下调。过表达 PICK1可抑制 TGF-β1诱导的 LX-2活化，可能是通过抑制 TGF-β／Smad 通路而发挥作用，为肝纤维化的防治研究提供了新的思路和靶点。
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PICK1在伏隔核突触传递中的作用
目的 探讨PICK1蛋白在伏隔核突触传递中的作用.方法 大鼠分为正常组和PICK1抑制剂(FSC231)组.采用细胞外场电位方法记录在体大鼠伏隔核基础突触传递(fEPSP)、双波异化(PPF)和输入输出曲线.结果 正常组和PICK1抑制剂(FSC231)组相比,伏隔核fEPSP、PPF和输入输出曲线无显著性差异.结论 抑制PICK1活性对伏隔核突触传递无明显影响.
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PICK1在中枢神经系统中的研究进展
PICK1(蛋白激酶C结合蛋白1)是一个从线虫到人体都高度保守的膜周蛋白.PICK1在人体的很多器官中都有表达,在脑和睾丸的表达多,在肺中的表达量少.本文就关于PICK1和神经系统疾病相关文献进行整理.目的是探究中枢神经与PICK1相关性,从而成为研究药物的一个新的靶点.
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小鼠PICK1基因真核表达载体myc-PICK1的构建
目的 构建小鼠PICK1基因的真核表达载体myc-PICK1.方法 从小鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增PICK1序列,所得片段及真核表达载体pRK5-myc用Sal I和NotI双酶切,后连入pRK5-myc载体中.重组质粒经SalI和NotI双酶切鉴定后送公司测序.结果 PCR扩增得到预期1.2 kb大小的目的片段,经SalI和NotI双酶切鉴定正确重组质粒送公司测序,结果与预期一致.myc-PICK1重组质粒转染Hela细胞,进行免疫染色能看到定位于胞浆的蛋白表达.结论 成功构建了myc-PICK1载体,为后续研究奠定了基础.
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圆头精子症患者的遗传学检测与成功辅助育孕
[目的]分析圆头精子症患者的遗传学发病机制.[方法]回顾分析1例圆头精子症患者,对其进行多种遗传学方法的检测,包括染色体检查、Y染色体微缺失基因检测及通过array-CGH芯片技术和Sanger测序筛查候选基因DPY19L2、PICK1、SPATA 16.[结果]该患者在我中心行两个卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)周期后,其妻孕足月剖宫产一对异卵双胞胎女儿.患者染色体核型为46,XY、Y染色体微缺失基因检测未见异常,array-CGH芯片检测排除了DPY 19L2、SPATA 16和PICK1基因及其他该芯片所涵盖区域的100kb以上的片段重复或缺失.Sanger测序PICK1、SPATA 16基因也未发现点突变和小片段插入缺失等病理性改变.[结论]圆头精子症患者可通过ICSI方式获得健康后代,本研究排除了已知的候选基因DPY19L2、PICK1、SPA TA16与该圆头精子症患者的致病相关,可能存在其他致病基因.
关键词： 圆头精子 卵胞浆内单精子显微注射 DPY 19L2 PICK1 SPATA 16
