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靶向肿瘤坏死因子β小分子抑制剂的筛选及其功能鉴定
目的：通过计算机虚拟筛选和细胞活性筛选，获得能靶向抑制肿瘤坏死因子β（TNFβ）的细胞毒活性的小分子抑制剂。方法根据TNFβ与肿瘤坏死因子Ⅰ型受体（TNFR1）结合的复合晶体结构，采用计算机虚拟筛选方法初步选择对接结果较好的105个小分子化合物（C1~C105），并对其进行细胞活性筛选；MTT法检测小分子化合物抑制TNFβ对L929细胞的细胞毒性；流式细胞术测定小分子化合物对TNFβ引起的细胞凋亡的抑制作用；采用碘化丙啶（PI）单染和流式分析技术检测小分子化合物对L929细胞周期的影响；采用Western blot和双转盘激光共聚焦显微镜分析小分子化合物对TNFβ引起的下游Caspase 3活化的抑制作用。结果 C35能有效抑制TNFβ引起的细胞毒作用，且这种抑制作用呈现剂量依赖性（半数抑制浓度=8.19μmol/L)；C35具有较低的细胞毒性，且对L929细胞周期无影响；C35能阻断TNFβ与其受体结合后引起的细胞凋亡通路，显著抑制TNFβ引起的L929细胞凋亡。结论成功筛选到一个TNFβ小分子抑制剂C35，其能阻断TNFβ引起的细胞凋亡通路，高效抑制TNFβ的细胞毒活性。
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肿瘤坏死因子βNcoI位点多态性与胃癌易感性
目的 探讨江苏省南京市汉族人群肿瘤坏死因子β(TNF-β)等位基因多态性与癌易感性的关系,并分析与环境危险因素的交互作用.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对294例胃癌患者及对照进行(TNF-β)基因的单核苷酸多态性(SNP)检测,分析TNF-β基因多态性与胃癌易感性的关系.结合环境危险因素分析,了解TNF-β基因多态性与环境危险因素在胃癌发生中的交互作用.结果 TNF-βG/A杂合子是胃癌的危险因素,其在病例组与对照组中的频率分别为50.0%与44.2%,OR=1.661 5,95%CI=1.077 7～2.561 7,P=0.021 0),TNF-βA/A出现的频率在胃癌组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),未发现与环境因素存在交互作用.结论 TNF-βG/A杂合子与胃癌的易感性有关.
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肺癌患者血清TNF-β和外周血T淋巴细胞亚群变化的研究
目的 探讨肺癌患者血清肿瘤坏死因子β(TNF-β)及外周血T淋巴细胞亚群的变化.方法 应用ELISA法对肺癌患者血清TNF-β以及采用流式细胞仪(FCM)对肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群进行检测.结果 肺癌患者血清TNF-β水平均明显低于正常对照组;而作为TNF-β的产生细胞T淋巴细胞(CD3+CD19-),特别是活化性T淋巴细胞(CD8+CD28+)均明显低于正常对照组.结论 肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群及血清TNF-β的水平均下降,且两者变化呈正相关,提示其与肺癌患者机体的免疫功能下降有关.
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高胆血红素血症新生儿细胞因子表达水平的探讨
目的:探讨某些细胞因子在病理性高胆血红素血症新生儿中临床意义.方法:将病理性高胆血红素血症新生儿分为3组,无菌采集病理性高胆血红素血症新生儿股动脉血清,均采用双抗体夹心ABC-ELISA法,测定TNF-α、TNF-β、GM-CSF、sIL-2R的表达水平.结果:①高胆一组与高胆二组细胞因子比较,仅GM-CSF有显著性统计学意义(P＜0.01).②高胆一组与高胆三组细胞因子比较,仅TNF-α有显著统计学意义(P＜0.01).③高胆二组与高胆三组细胞因子比较,TNF-α、TNF-β、GM-CSF有显著统计学意义(P＜0.01).④高胆三个组与正常组比较,TBIL、DBIL、TNF-α、TNF-β、GM-CSF均有显著统计学意义(P＜0.01),仅sIL-2R无统计学意义(P＞0.05).结论:TNF-α、TNF-β、GM-CSF可做为病理性高胆血红素血症新生儿诊疗指标,为围产期病理性高胆血红素血症新生儿早期干预及其保健提供基础免疫学理论依据.
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肿瘤坏死因子β基因多态性在中国汉族SLE病人中的分布特点及与不同人种的比较研究
目的:探讨中国江苏地区汉族人群TNFβ基因多态性在SLE病人中分布特点,并与不同人种进行比较研究.方法:收集江苏地区168名无血缘关系健康个体及66例SLE病人的静脉血提取DNA,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP),分析TNFβ基因的多态性.结果:中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义;中国汉%,族健康个体TNFβ*1等位基因频率明显高于白种健康个体;SLE病人TNFβ*2基因频率较正常人明显升高(S比病人67.4正常人55.1%,P＜0.05,R=1.68);中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义.结论:TNFβ等位基因频率在正常人分布具有种族差异,但在SLE病人分布无种族差异.
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SLE患者TNF-β基因多态性分析
系统性红斑狼疮(SLE)是一种累及多系统、具有多种自身抗体的自身免疫性疾病,遗传因素在SLE发病机制中起重要作用.肿瘤坏死因子(TNF)是具有多种生物学功能的细胞因子,体内外实验证实,TNF水平与SLE的活性指标密切相关.鉴于TNF基因的特殊位置及TNF的重要生物学活性,TNF的基因多态性与SLE的发病、病程及预后之间的关系已引起普遍关注[1].
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肿瘤坏死因子β基因A80C多态与原发性高血压
目的:研究肿瘤坏死因子β(tumor necrosis factor-β,TNF-β)基因外显子1中的A80C多态与汉族人群原发性高血压的相关性.方法:采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测方法,在122例原发性高血压患者和202名健康对照者中,对TNF-β基因外显子1的A8DC多态进行基因分型.结果:A80C多态的基因型分布及其等位基因频率在2组间相比均无显著性差异(P＞0.05).但在女性高血压患者中,其CC、CA和AA基因型分布与对照组相比有明显差异(P＜0.05),女性CC基因型高血压的发病危险是A等位基因携带者的2.27倍[95%可信区间(CI):1.111～4.656],其等位基因频率在2亚组间相比则无显著性差异(P＞0.05).女性CC基因型高血压患者的血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆同醇浓度亦明显升高(P＜0.01).结论:TNF-β基因外显子1的A80C多态可能与女性原发性高血压的发生相关,尤其是携带CC基因型的女性.
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氯胺酮对兔全脑缺血-再灌注海马细胞凋亡及TNF-β和IL-10的影响
目的 研究氯胺酮对兔全脑缺血-再灌注损伤中海马细胞凋亡及肿瘤坏死因子β(TNF-β)、白细胞介素-10(IL-10)表达的影响.方法 新西兰大白兔45只,随机分为三组,每组15只.A组仅分离股动脉、股静脉和双侧颈总动脉.B组和C组采用股动脉放血,夹毕颈总动脉30min制作全脑缺血-再灌注模型.C组经股静脉推注氯胺酮4.5 mg/kg.取海马组织行HE染色、TUNEL、免疫组化染色,计数CA1区存活细胞、凋亡细胞、TNF-β和IL-10阳性细胞个数.结果 再灌注后12～72 h,C组存活细胞明显多于B组(P＜0.05),凋亡细胞明显少于B组(P＜0.01).再灌注后6～72 h,B、C组TNF-β明显高于A组(P＜0.05).再灌注后6h和72 h,C组TNF-β明显少于B组(P＜0.05).再灌注后6h,C组IL-10阳性细胞数明显多于A、B型,再灌注后72 h明显少于A、B组(P＜0.05).结论 氯胺酮可通过调节细胞免疫应答,减轻炎症反应,减少细胞坏死和凋亡,具有良好的脑保护作用.
关键词： 氯胺酮 全脑缺血-再灌注损伤 细胞凋亡 肿瘤坏死因子β 白细胞介素-10 -
肿瘤坏死因子β*2等位基因与狼疮性肾炎的相关性分析
目的:进一步探讨肿瘤坏死因子β(TNF β)基因在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用.方法:采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分型方法,检测98例SLE患者TNF β等位基因,分析了TNF β等位基因与SLE患者某些临床指标的相关性.结果:携带TNF β*2等位基因的SLE患者的肾炎发生率显著高于未携带TNF β*2等位基因的SLE患者(P＜0.05).结论:TNF β*2等位基因可能与狼疮性肾炎的发病相关.
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肾上腺髓质素对大鼠肾脏机械损伤早期TNF-β及其受体表达的影响
目的 探讨外源性肾上腺髓质素(ADM)对肾脏机械性损伤早期肿瘤坏死因子-β(TNF-β)及肿瘤坏死因子受体(TNFR)表达的影响.方法 选健康成年普通级Wistar大鼠104只,随机分为四组:对照组8只、单纯创伤组32只、创伤前注射ADM组32只、创伤后注射ADM组32只,后三组的动物分别于创伤后1h、6h、12 h和24h各处死8只.采用自由落体打击仪直接打击大鼠脊肋区制作肾机械性损伤模型.ADM分别于创伤前或创伤后10 min采用腹腔注射法给药.实验动物采用快速心脏采血法处死.迅速解剖动物提取肾脏标本,10％甲醛固定.免疫组化染色观察TNF-β、TNFR在组织中的表达.结果 单纯创伤组于创伤早期(1h和6h点)TNF-β表达低于对照组,外源性ADM早期(1h和6h点)可上调TNF-β(P＜0.05).单纯创伤组于创伤早期(1h和6h点)TNFR表达低于对照组,外源性ADM(创伤前给药)早期(1h和6h点)可上调TNFR(P ＜0.05).结论 TNF-β在肾脏损伤中主要参与的是抗损伤过程.TNFR对TNF-β具有动态调节作用.ADM在早期肾损伤过程中可以上调TNF-β、TNFR,并与其相互协调,共同发挥对损伤器官的保护作用.
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肿瘤坏死因子β基因多态性与脑梗死的相关性研究
目的 探讨脑梗死(CI)患者肿瘤坏死因子β的基因型和等位基因频率分布特点.探讨肿瘤坏死因子β等位基因多态性与CI易感性的关系.方法 采用PCR方法扩增TNFβ第一外显子到第二外显子包含G-A突变在内DNA片段,扩增产物用限制性内切酶Nco I酶切后电泳,分析TNFβ的基因型.对56例脑梗死患者(CI组)和108例健康者(对照组)的肿瘤坏死因子β基因多态性进行分析.结果 CI组TNFβ等位基因分布频率与对照组差异有显著性(P=0.002),其中TNFβ2/2基因型频率(46.4%)明显高于正常人(30.6%),但TNβ*1与TN地Fβ*2等位基因频率差异无显著性(P>0.05).结论 CI患者组TNFβ各基因型频率与健康对照组相比存在显著差异,说明TNFβ*2/2基因型可能与CI发病有关.
关键词： 肿瘤坏死因子β 多态性 脑梗死 限制性片段长度多态性 -
肿瘤坏死因子β基因多态性与江苏子宫内膜异位症患者的相关性研究
目的 探讨江苏子宫内膜异位症(内异症)患者肿瘤坏死因子β的基因型和等位基因频率分布特点.探讨肿瘤坏死因子β等位基因多态性与内异症易感性的关系.方法 采用PCR方法扩增TNFβ第一外显子到第二外显子包含G→A突变在内DNA片段,扩增产物用限制性内切酶Nco I酶切后电泳,分析TNFβ的基因型.对52例子宫内膜异位症患者(内异症组)和43例健康者(对照组)的肿瘤坏死因子β基因多态性进行分析.结果 内异症组TNFβ等住基因分布频率与对照组差异有显著性(P=0.002),其中TNFβ2/2基因型频率(46.4%)明显高于正常人(30.6%),但TNFβ*1与TNFβ*2等位基因频率差异无显著性(P>0.05).结论 内异症患者组TNFβ各基因型频率与健康对照组相比存在显著差异,说明TNFβ*2/2基因型可能与内异症发病有关.
关键词： 肿瘤坏死因子β 多态性 子宫内膜异位症 限制性片段长度多态性 -
湖北地区老年冠心病患者肿瘤坏死因子β基因的多态性
为探讨湖北地区老年冠心病患者肿瘤坏死因子β804C/A多态性分布、肿瘤坏死因子β血清水平与冠心病的相关性,应用套式聚合酶链反应结合等位基因特异性聚合酶链反应,对290例老年冠心病患者和239例健康对照者的肿瘤坏死因子β804C/A进行基因分型,用酶联免疫吸附法测定其血清水平.结果发现,CC、CA和AA型基因在冠心病组频率分别为25.9%、49.3%和24.8%,在对照组分别为37.2%、45.6%和17.2%,老年冠心病患者中的AA基因型显著高于对照组(P<0.05).基因型频率的相对风险分析发现,AA型和CA型患者冠心病的风险是CC型的1.701倍(OR=1.701,95%CI为1.173～2.466).冠心病组肿瘤坏死因子β血清水平(47±22ng/L)明显高于对照组(13±11ng/L)(P<0.05),两组中AA基因型者肿瘤坏死因子β血清水平均略高于CC型和CA型者,但差异无显著性(P>0.05).以上提示,肿瘤坏死因子β804C/A基因多态性与冠心病的发病有相关性,804A等位基因可能是冠心病发生的重要易感基因.
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广州地区汉族儿童白细胞介素-6基因174位点及肿瘤坏死因子β基因NcoI位点多态性分析
目的 探讨白细胞介素-6(IL-6)基因(-174)位点及肿瘤坏死因子β(TNF β)NcoI位点多态性在广州地区汉族儿童中的分布特征,为IL-6(-174)及TNFβ NcoI位点多态性与全身炎症反应综合征(SIRS)的相关性研究提供基础资料.方法 选取481名广州汉族儿童,采用等位基因特异性扩增多聚酶链(AS-PCR)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)对IL-6(-174)及TNF β NcoI位点进行基因水平多态性分析,并结合文献进行了不同种族间的分析比较.结果 广州地区汉族儿童群体IL-6(-174)位点基因型均为G/G,广州地区汉族人群该位点变异不属常见变异或不存在变异;TNFβ Nco1位点有TNFβ 1*1、TNFβ 1*2、TNFβ 2*2 3种基因型,频率分别为24.7％、49.7％和25.6％,样本分布符合Hardy-Weinberg平衡,TNFβ 1等位基因分布频率较欧美白种人高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 广州地区汉族人群TNFβ NcoI位点多态性普遍存在,基因型分布特征与白种人存在差异.样本为Hardy-Weinberg平衡群体,可进一步用于广州地区汉族儿童SIRS的关联性分析.广州地区汉族人群IL-6(-174)位点多态性罕见或不存在,不宜选取该基因位点单核苷酸多态性作疾病的关联性分析.
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肿瘤坏死因子α及β基因多态性与脑梗死关系的研究
目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)及β(TNF-β)基因多态性与脑梗死(CI) 的相关性.方法 用序列特性引异物和聚合酶链式反应(PCR)、限制性内切酶酶切技术, 对110例脑梗死患者(CI 组) 和110例健康者(对照组)的肿瘤坏死因子α及β基因多态性进行分析.结果 CI组TNF-α等位基因分布频率与对照组比较差异有显著性 ( P＜0.05 ) ,CI组 TNF-αA等位基因频率为0.0364, 对照组为0.1091, 两组比较有统计学差异(P＜0.05); CI组TNF-β等位基因分布频率与对照组差异有显著性 (P＜0.05), 其中TNF-βA/A基因型频率(41.82%)明显高于正常人(26.36%),但G与A的含量差异无显著性(P＞0.05).结论 肿瘤坏死因子α基因多态性与CI的发病有一定相关性,TNF-β等位基因分布频率与CI的发病有一定相关性.
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肿瘤坏死因子α及β基因多态性与多发性硬化关系的研究
目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)及β(TNFβ)基因多态性与多发性硬化(MS)的相关性.方法采用序列特异性引物和聚合酶链式反应(PCR)、限制性内切酶酶切技术对60例MS患者(MS组)和110例健康者(对照组)的TNFα及β基因多态性进行分析.结果MS组TNFα-308等位基因分布频率与对照组比较有显著性差异(P=0.04),且MS组等位基因A含量(3.3%)与对照组(11.8%)比较也有显著性差异(P=0.008);MS组TNFβ+252等位基因分布频率与对照组比较有显著性差异(P=0.014),且MS组等位基因A含量(69.2%)与对照组(55.5%)比较也有显著性差异(P=0.014).结论TNFα-308A等位基因的多态性与MS的发病有一定负相关,TNFβ+252A等位基因频率及TNFβ+252 A/A基因分布频率与MS的发病有一定正相关.
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广东地区汉族人群IL-1β、TNF-β及IL-10基因多态性与血脂的关系
目的 探讨汉族广东地区人群白细胞介索-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-β(TNFβ)及白细胞介素-10(IL-10)三种炎症细胞因子的基因多态性与血脂水平的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对428例中国广东地区汉族人群受检样本进行IL-1β+3953、TNF-β+252及IL-10-592位点的基因型检测.按常规法检测总胆固醇(TC)、甘油I酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、LDL和极低密度脂蛋白(VLDL)血清浓度.结果 IL-1β+3953位点各基因型间(CC、CT、TT),低密度脂蛋白(LDL)浓度的差异有显著性(F=3.628,P=0.028),CT基因型携带者LDL浓度高于CC型携带者(2.743±0.723 mmol/L vs 2.502±0.699 mmol/L,t=-2.639,P=0.009);TNFβ+252位点AG基因型携带者的总胆周醇(TC)、LDL浓度高于AA型(t=-2.406,P=0.017;t=-2.516,P=0.012);IL-10-592位点基因型间(AA、CA、CC)的血脂水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 炎症细胞因子基因多态性与血脂水平有关,1L-1β+3953位点T等位基因和TNFβ+252位点G等位基因与高脂血症易感性相关.
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汉族儿童肿瘤坏死因子多态性与全身炎症反应综合征易感性的关系
目的：探讨肿瘤坏死因子（ TNF）βNcoⅠ位点及TNFα－308位点多态性在花都地区汉族儿童中的分布特征，以及与全身炎症反应综合征（ SIRS）易感性的关系。方法选择481例花都地区汉族健康儿童（对照组）及230例SIRS患儿（病例组），分别采用PCR－RFLP及PCR－AMRS对TNFβNcoⅠ位点及TNFα－308位点进行基因水平多态性分析。结果花都地区汉族健康儿童群体TNFβNcoⅠ位点有3种基因型：TNFB1*1、TNFB1*2、TNFB2*2，频率分别为24.7％、49.7％和25.6％，TNFB1等位基因频率较欧美白种人高（P＜0.05）；病例组TNFβNcoⅠ位点基因型及等位基因频率与对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05），TNFB1等位基因不是SIRS的危险因子（OR＝0.76，95％CI 0.43～1.32）。 TNFα－308位点有3种基因型：GG、GA、AA，健康儿童群体频率分别为65.6％、33.6％、0.8％，G、A 2种等位基因的频率与美国白人和亚欧人群相似；病例组TNFα－308位点基因型及等位基因频率与对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05），A等位基因不是SIRS的危险因子（OR＝1.13，95％CI 0.71～1.26）。两群体样本分布均符合Hardy－Weinberg平衡。结论花都地区汉族人群TNFβNcoⅠ位点多态性普遍存在，其基因型分布特征与白种人存在差异；TNFα－308位点多态性以G等位基因为主，分布特征与美国白人、亚欧人群相似， AA基因型少见。样本为Hardy－Weinberg平衡群体，两等位基因多态位点均不是SIRS的危险因子，与SIRS的易感性无关。
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TNF-β基因多态性与类风湿性关节炎相关性分析
目的 研究广州地区汉族类风湿性关节炎患者TNF-β基因第一内含子+252等位基因的单核苷酸替代(G→A)产生的基因多态性,是否与类风湿性关节炎发病的易感性相关.方法 用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术鉴定120例类风湿性关节炎患者和120例健康对照的基因及基因型,计算其频率,用卡方检验统计显著性.结果 TNF-β+252A等位基因在RA患者组出现的频率明显高于对照组(x2=57.7,P＜0.01,OR=4.476,95%CI:3.009～6.658);RA患者组的TNF-β+252G/TNF-β+252A基因型和TNF-β+252A/TNF-β+252A基因型的频率比对照组显著增高(x2=52.97,P＜0.01).结论 TNF-β+252A等位基因与广东地区汉族人群RA发病强相关,可能是RA的易感基因.具有TNF-β+252G等位基因人群的RA发病率低,该基因可能与RA的耐受性有关.
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肿瘤坏死因子β1069位点等位基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性
目的探讨江苏汉族人群肿瘤坏死因子β(tumor necrosis factor-β, TNFβ)1069位点等位基因多态性与系统性红斑狼疮的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法对168名健康人和66例系统性红斑狼疮患者TNFβ基因的单碱基突变多态性进行了分析.结果系统性红斑狼疮患者的TNFβ*2等位基因频率(67.4%)较正常人(55.1%)明显升高(P＝0.015,RR＝1.68).结论 TNFβ*2等位基因与系统性红斑狼疮发病易患性相关.
