首页 > 文献资料
-
活神经元荧光染色的新方法
1 概述自一百多年前Golgi法诞生至今,神经元的染色技术一直在神经生物学研究中发挥着重要的作用.Golgi法的成功在于使组织中2%的神经元被完整标记,从而可在厚切片中清楚地观察单个细胞及其间的连接,并且不因为其他染色细胞的影响而变得模糊. 继之,Ehrlich法用美蓝对神经组织染色,得到了与Golgi法相似的效果 [1].但上述方法都难以根据研究的要求, 对特定的神经元标记[2].后来,在Golgi法基础上发展起来的Wigert 法(特异地对髓鞘染色)以及Marchi法和Nauta法(标记变性轴突)则为追踪轴突的走行,研究神经传导通路提供了工具[1].
-
不同组织固定液与巴氏染色法异染性现象
巴氏染色法广泛应用于生物医学组织细胞科研与临床脱落细胞检查工作中,它是一种常用细胞染色技术.在巴氏脱落细胞染色检查工作中,我们发现采集于同一病人的同次阴道脱落细胞涂片以不同的细胞保存方法处理涂片,并以HYJ1999苏木精液、EA36多色染液染色技术处理,其细胞质成分着色发生异染性.由于临床根据阴道壁上皮细胞角化程度来判断病人激素水平的依据,故有必要将相关现象描述如下:我们选用对组织成分固定机理差距较大的三种方法比较.方法一:空气干燥固定法.方法二 :10%福尔马林固定法.方法三:95%乙醇固定法.方法一:取涂片置于室温下风干干燥.干燥涂片直接浸入HYJ1999苏木精液10分钟. 自来水涮洗.返蓝液返蓝.自来水涮洗.95%乙醇液涮洗.浸入EA36多色染液10分钟.方法二:取涂片置于10%福尔马林固定.涂片自来水涮洗,并直接浸入HYJ1999苏木精液10分钟.自来水涮洗.返蓝液返蓝.自来水涮洗.95%乙醇液涮洗.浸入EA36 多色染液10分钟.方法三:95%乙醇固定法.组织细胞核染色黑蓝色清晰,细胞质色彩艳丽,分化清楚明确 ,少量细胞呈基底细胞质样染为绿色,多量细胞呈角化细胞质样染为靓丽的红色.脱落细胞状态描述技术较佳.空气干燥固定法与95%乙醇固定法.组织细胞核染色黑蓝色清晰,细胞质色彩艳丽,分化清楚明确,少量细胞呈基底细胞质样染为绿色,多量细胞呈角化细胞质染为靓丽的红色.脱落细胞状态描述技术较佳.空气干燥固定法与95%乙醇固定法涂片上皮细胞胞质染色发生异染性,并将产生临床诊断的偏差.而10%福尔马林固定法在经过与空气干燥固定法、95%乙醇固定法相同的染色程序后脱落细胞状态描述染色技术较差.从上述染色结果不难看出,组织细胞技术方法学中组织固定法的选择直接关系着科研与临床工作的准确.直接关系着科学技术交流的质量.在实际工作中,推广实现技术方法标准化, 将成为我们广大组织技术方法学科技人员关注的基本课题.
-
石蜡切片H-E染色法的经验和体会
随着科学技术的飞速发展,各种新尖仪器的不断涌现,组织学切片方法也日益增多,而且技术水平不断提高,质量要求更加完美和精确,但迄今为止石蜡包埋、H-E染色技术仍是形态学科及其它有关学科教学、科研广泛应用的一种技术.要制作出高质量的切片,只依靠完备的仪器和药品是不够的,更重要的必须具备熟练优良的技术.结合本人三十多年的工作经验和体会,就石蜡切片、H-E染色技术应用过程中经常遇到的某些问题,总结以下,以供初学者参考.1.取材:以人的材料为好,但人的材料较难得,因此须把握机会,大量取材,常规处理 ,分批石蜡包埋保存,以便随时切片,满足教学需要.1.1 取材,提前配好各种固定液,并备有大量原液备用,取材后立即整修组织块,换固定液后继续固定.1.2 取消化管时应注意的问题:因为消化管的粘膜上皮容易破坏和自溶,以往取材多为小片块,而且在外力(手压、刀切)作用下易造成粘膜损坏和肌层收缩.因此我们采用取大片及长段组织固定,将剖开的消化管贴在滤纸上.因消化管管壁薄,大片及长段固定不影响固定液的渗透,固定效果理想,然后再取未受损部位组织脱水,包埋,保存.1.3 消化管部位以空腹取材为理想,尽量避免冲洗,特别是胃的壁细胞在空腹时胞质着色非常鲜亮.2.载玻片和盖玻片的处理:载玻片好在无水乙醇中浸泡12～24hr,以达到彻底脱脂的目的,用前再用的确良白布擦净;盖玻片必须在清洗液中浸泡24hr后清水冲洗,浸无水乙醇数小时后用尼龙绸布擦净.3.伊红染液的浓度:以往常用0.5%～1%的伊红染液,此浓度脱色时间长,可以采用 95%乙醇450ml+1%复制伊红乙醇溶液50ml的稀释液染色.4.封片:将切片从二甲苯中取出后,用尼龙绸布将组织周围的二甲苯擦净,组织片避免干燥,滴少许中性树胶,将盖片在酒精灯上烤一下,以达到蒸发空气中水份及将盖片上肉眼不易观察到的污物烧掉,并有利于中性树胶的均匀扩散.5.磨刀:在自动磨刀机上加机油磨刀,磨后擦净刀上的污垢即可切片.免去鐾刀这一工序 ,因经过鐾刀皮鐾刀有时使刀口损坏,(鐾刀皮用时间长后,刀皮二边上翅或鐾刀角度稍有不当,用力不匀等均能造成刀口损坏).
-
血液涂片Wright染色法的改进
血涂片是医学生认识正常及病理血细胞的重要标本.因此,制作精良的血涂片必须:一是要有好的材料,包括染料等;二是要掌握血涂片的染色技术,现简述如下:1.取血按常规取无名指血一滴,放在洁净的载玻片上,立即盖上盖玻片,待血液散开后 ,推开盖玻片.放在灯泡玻板上凉干.2.染色先在干血涂片两端用玻璃蜡笔划线,然后放在染片架上,并滴Wright染液 ,加盖染色3min,之后加等量的pH6.4磷酸缓冲液染色5min.3.打气在加入磷酸缓冲液后要不断的吹气.染色结果,用蒸馏水将血涂片上的染料冲洗干净.凉干,用香柏油封片.4.结果红细胞呈粉红或橙黄色,中性粒细胞核深紫色,胞质颗粒浅红色.嗜酸性粒细胞核呈紫色八字形,胞质颗粒大呈红色.嗜碱性粒细胞核模糊,有大小不等的紫色颗粒.淋巴细胞核呈深紫色,胞质天蓝色.单核细胞核呈紫蓝色肾形,胞质灰蓝色.血小板为紫红色.5.讨论本法的改进在于加强打气,推血涂片时,应在风扇下使血涂片快速吹干,血细胞不致变形.开始滴加Wright染液染色时不要打气而要加盖,在加入等量硫酸缓冲液时 ,要立即在血涂片上不停地打气,直至染色结束才不打气,否则血涂片会有很多沉淀,影响染色效果.打气不但有助染色,还可以用来检查染色效果,染色后期用气球在血涂片上打气 ,出现一个没有染液的空圆点,从这个空圆点上可以看到血涂片上染色的深浅,色浅可再滴染液重染,色深则立即用蒸馏水洗干净血涂片.
-
制作疏松结缔组织教学铺片的探索
关于疏松结缔组织铺片的染色技术,近年来不少改进,能同时显示三种细胞两种纤维的方法也有几种,但是仍有不令人满意之处,比如巨噬细胞吞噬颗粒太少,显示不清楚,我们推测与甲醛液固定后水洗使其溶解有关,也可能与台盘蓝浓度有关.所以我们经过多次实验,作了如下探索和改进:①将来复红染色法中的1%台盘蓝注射液改为1.5%;②采用了10%、20%两种不同浓度甲醛固定液固定和95%酒精固定进行比较.结果20%甲醛效果较佳.具体操作如下:材料和方法:取250g重大鼠,腹腔注射台盘蓝,每天1针,共注射5针,第五针注射后两小时取材.腹腔注射麻醉剂,打开腹部皮肤,在腹股沟处取松结缔组织,铺于载玻片上,待干后分别固定于10%,20%甲醛溶液,或95%酒精内15～30min,甲醛固定组的用自来水洗后入来复红染液染色,酒精固定组不经水洗直接入来复红染液内染色.染色时间均为20～30min,经两次95%酒精分色1～2min,至镜下观察细胞和弹力纤维清楚为止,再用自来水洗,入偶氮卡红内染5min(60℃温箱内进行).95%酒清洗两次,按常规脱水透明封片.结果:95%酒精组清晰度差.甲醛固定的两组结构清晰,尤以 20%甲醛组巨噬细胞内蓝色颗粒保存较佳.弹力纤维棕红色,胶原纤维红色,巨噬细胞颗粒蓝色,肥大细胞颗粒紫红色.染液配制:一、来复红配法:来复红4g,间苯二酚4g、蒸馏水200ml混合后加热煮沸,加2%氯化铁溶液25ml,继续煮5min,冷却后过滤,将过滤物放于温箱内烤干,溶于200ml 95%酒精内,间接加温煮沸,待冷却后加4ml浓盐酸备用.二、偶氮卡红配法:偶氮卡红0.25g,蒸馏水100ml加热溶解后加冰蜡酸1ml备用.体会:固定液采用20%甲醛较好,它能避免台盘蓝在水洗过程中溶解,采用1.5%台盘蓝使巨噬细胞吞噬颗粒更多,显示更清楚.
-
BC-5500型全自动五分类血细胞分析仪常规故障处理、保养及注意事项
深圳迈瑞公司生产的BC-5500型全自动五分类血细胞分析仪,它配备半导体激光散射和改良的流式分析装置,采用细胞化学染色技术对白细胞进行精确的五分类分析,具有检测结果准确、检测参数多、检测速度快、彩色触摸屏、中文操作、预稀释模式五分类等众多优点.经过两年多的使用发现了几种常见及不常见的故障,现将使用过程中出现的常见、不常见故障及仪器保养介绍给大家,供大家借鉴参考.
-
特殊染色技术在真菌染色中的运用
真菌,它广泛地分布在自然界中,其种类繁多,如毛霉菌、曲霉菌和新型隐球菌等许多种类.近年来由于抗生素、激素、化疗免疫抑制剂的广泛应用,使人体的抵抗力下降,导致真菌感染的发病率增长,因此病理诊断的范围较为广泛[1].
-
简易增凝染色法快速诊断霍乱弧菌
霍乱是一种流行迅速的传染病,及时发现传染源和尽快确定病原体对于卫生防疫部门控制和扑灭疫情极为重要.为此,笔者参考有关文献[1,2],在简易增凝法的基础上,辅以细菌染色技术,经显微镜观察快速诊断霍乱弧菌,取得满意结果.现介绍如下:
-
荧光显微镜摄影技术
当前在组织细胞学的实验研究中，广泛地应用着利用抗原-抗体反应的免疫组织化学(Immunohistochemistry)技术进行对组织、细胞内活性物质的定位和对它们的存在状态的观察。而免疫组织化学方法又包括着荧光抗体法、酶抗体法、重金属标记抗体法等。这些方法中，荧光抗体法(Immunoflu-orescence)是用荧光物质标记的抗原-抗体反应的方法，近年来由于新的荧光标记物质的出现和染色技术的发展，可以用多种荧光色素标记而作成多重荧光染色标本。由于在多重荧光染色的标本上，使用了多种荧光标记物质，可以在同一标本上获取多种信息，因而，目前用荧光抗体方法进行多重荧光染色已成为常用的研究手段。 另一方面，由于用荧光抗体法所进行的标本观察及记录(照相)都需在荧光显微镜下进行，所以在荧光标本上所获得的信息，是以荧光色素固有的色光(荧光)表现出来的。为了准确地观察记录实验结果，必须备置高性能的荧光显微镜以及与各种荧光色素相适应的配套滤色镜。但是，当使用这些高性能的仪器时，还必须具备：有关标记用的荧光色素以及荧光染色标本制作、滤色镜系统、显微镜照相技术和照片处理技术等各方面的必备的知识。 本文仅对荧光显微镜摄影中所需要的基本的理论和照相时所需要的一些知识做扼要的介绍。
-
大鼠三叉神经中脑核内PPD、PPE样阳性终末与PAG 和PV共存神经元的联系
［陈鹏，李金莲，李继硕. 解剖学报，2001;32(2):109-113］ 目的观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)神经元内磷酸激活的谷氨酰胺酶 (PAG)和小白蛋白(PV) 的共存关系，以及前强啡肽原(PPD)样和前脑啡肽原(PPE)样阳性终末与PAG和PV共存神经元之间的联系. 方法免疫荧光组织化学双重和三重染色技术，在激光共聚焦显微镜下观察. 结果在Vme内可见大量PAG样和PV样免疫反应神经元，吻尾方向上几乎在其全长出现，多为大的假单极神经元. 许多PAG样阳性神经元同时呈PV样免疫反应，双标细胞占全部标记细胞的95%以上.在激光共聚焦显微镜下观察到，少量PPD样或PPE样阳性终末围绕在PAG样和PV样双重标记的Vme神经元胞体周围，并与之形成密切接触. 结论在面口部本体感觉信息由V me向更高一级神经元传递的过程中，PV可能和谷氨酸一起发挥着重要的作用，与此同时Vme 神经元还可能接受中枢内强啡肽样和脑啡肽样神经终末对它的调控.(甄志强)
-
组织块HE染色法观察脱细胞真皮基质上接种细胞的生长情况
在组织工程皮肤的体外构建中,及时观察脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)表面接种的表皮细胞或成纤维细胞的形态和密度,对判断细胞存活情况、生长速度及融合程度具有重要意义.但由于真皮组织不透明,在相差显微镜下无法直接观察接种细胞的生长情况[1].笔者拟利用组织块HE染色技术进行相应改进.
