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TXNIP∕NLRP3信号通路在糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价硫氧还蛋白相互作用蛋白∕NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TXNIP∕NLRP3)信号通路在糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠,8~12周龄,体重200~220 g,采用腹腔注射1%链脲佐菌素65 mg∕kg的方法建立糖尿病模型.取糖尿病模型制备成功的大鼠24只,采用随机数字表法分为3组(n=8):假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I∕R组)和TXNIP抑制剂白藜芦醇组(R组).R组于糖尿病模型制备成功后第3周每天腹腔注射白藜芦醇10 mg∕kg,连续7 d.糖尿病模型制备成功后第4周,采用双侧肾蒂夹闭25 min再灌注的方法制备肾缺血再灌注损伤模型.再灌注48 h时处死大鼠取肾组织,观察病理学结果,采用比色法测定MDA含量、SOD活性和组织超氧阴离子清除力,采用ELISA法检测IL?1β和IL?18含量,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况.采用Western blot法测定肾组织TXNIP、NLRP3和caspase?1的表达.左心室取血标本,测定血清BUN 和Cr浓度.结果 与S组比较,I∕R组和R组血清Cr浓度和细胞凋亡指数升高,肾组织超氧阴离子清除力降低,TXNIP、NLRP3和caspase?1表达上调,I∕R组血清BUN浓度、肾组织MDA、IL?1β和IL?18含量升高,SOD活性降低(P<0.05),肾组织病理学损伤加重;与I∕R组比较,R组血清BUN和Cr浓度降低,肾组织MDA、IL?1β、IL?18含量和细胞凋亡指数降低,SOD活性和组织超氧阴离子清除力升高,TXNIP、NLRP3和caspase?1表达下调(P<0.05),肾组织病理学损伤减轻.结论 糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤的病理生理机制与TXNIP∕NLRP3信号通路激活有关.
关键词： 硫氧还蛋白质类 NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 糖尿病 肾 再灌注损伤 -
NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎性体的调控机制研究进展
背景 NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性体由NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)和酶解活化半胱氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)相互结合形成,通过活化caspase-1来间接调控IL-1β的成熟和分泌,在细胞质内发挥对外源性微生物或内源性危险信号感受器的作用. 目的 对NLRP3炎性体的调控机制研究进行综述. 内容 分别描述热蛋白结构域(pyrin domains,PYD)、泛素化、一氧化氮(nitric oxide,NO)、干扰素(interferon,IFN)、线粒体、活性氧(reactive oxygen species,ROS)等对NLRP3的调节机制. 趋向 为NLRP3相关疾病的诊疗提供参考.
关键词： 炎性体 NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 -
Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3在人脑胶质瘤中的表达
目的 研究Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)在人脑胶质瘤组织中的表达,探讨NLRP3在人脑胶质瘤的发生、发展中的作用.方法 按照2007年WHO中枢神经系统肿瘤分类及分级标准,将所收集的49例人脑胶质瘤组织根据其病理类型分为低级别组(20例)和高级别组(29例),并收集脑外伤后行颅内减压手术切除的正常脑组织10例做对照.应用免疫组织化学技术,并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)和免疫印迹技术,检测NLRP3在各组人脑胶质瘤及人正常脑组织中的表达.结果 NLRP3在正常脑组织中表达不明显,在低级别胶质瘤中表达较少,在高级别胶质瘤中表达明显.NLRP3 mRNA在正常脑组织(1.04±0.52)、低级别组(1.85±1.02)和高级别组(3.36±1.38)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).人脑胶质瘤组织中NLRP3在mRNA水平及蛋白水平均高于正常脑组织(P＜0.01).NLRP3的表达与人脑胶质瘤的恶性程度呈正相关.结论 人脑胶质瘤中存在NLRP3的异常表达,其表达量随胶质瘤恶性程度的升高而增加,NLRP3在人胶质瘤的发生和侵袭中可能发挥着重要的作用,检测NLRP3的表达有助于胶质瘤分化程度的判断.
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NLRP3炎症小体在呼吸系统疾病中作用的研究进展
由NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)参与组成的炎症小体是细胞内的一种蛋白质复合体,也是细胞内固有免疫系统重要的感受器.NLRP3炎症小体可识别多种病原相关分子模式(PAMP)和危险相关分子模式(DAMP),其活化后促进下游炎症因子IL-18和IL-1β的成熟与释放,参与慢性阻塞性肺疾病(COPD)、支气管哮喘、肺结核、急性肺损伤和肺纤维化等呼吸系统疾病的发生、发展.
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动力相关蛋白-1在缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞焦亡机制中的作用
目的 观察人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时线粒体动力相关蛋白1 (dynamin-related protein 1,Drp1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3,Nlrp3)以及炎性因子的表达改变和细胞焦亡情况,探讨Drp1在H/R诱导肾小管上皮细胞焦亡中的作用.方法 HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12液培养于37 ℃、5％ CO2和95％O2的恒温培养箱.将细胞分为正常对照组、H/R组、H/R+ Drp1抑制剂(H/R+Mdivi-1)组、H/R+siNlrp3腺病毒(H/R+siNlrp3)组、H/R+空腺病毒(H/R+ Scra)组.检测细胞培养液上清乳酸脱氢酶LDH活性,Western blot检测Drp1、Nlrp3、凋亡相关蛋白-l(caspase-1)、IL-1β表达,2',7 '-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,流式分析仪检测细胞焦亡情况.结果 与正常对照组比较,H/R组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显升高,Drp1、Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达增高,细胞焦亡明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与H/R组比较,H/R+Mdivi-1组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显降低,Nlrp3、caspase-1、IL-1 β表达降低,细胞焦亡明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在H/R条件下,Drp1通过激活Nlrp3炎性体诱导人肾小管上皮细胞焦亡.
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缺氧对少突胶质前体细胞内NLRP3炎症小体表达的影响
目的:观察缺氧对少突胶质前体细胞(preOL)内Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及细胞凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达的影响.方法:将体外分离纯化的preOL分为正常组和缺氧组,1％ O2 5％CO2、37℃缺氧培养箱培养9h建立preOL缺氧损伤模型.TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光染色、qRT-PCR及Western Blot检测NLRP3表达,Western Blot检测ASC表达.结果:preOL缺氧损伤后胞质内出现空泡,胞膜破裂,突起出现肿胀、断裂;凋亡率较正常组增加(P＜0.05);缺氧组NLRP3阳性细胞数和平均荧光强度均较正常组增加(P＜0.05),NLRtP3的mRNA及蛋白水平也均较正常组增加(P ＜0.05);ASC蛋白的表达在缺氧后上调(P＜0.05).结论:preOL的缺氧损伤可能与激活NLRP3炎症小体有关.
