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神经系统疾病基因治疗研究现状
基因治疗是将外源基因导入人体细胞,使其在体内表达,产生有治疗意义的生物蛋白或关闭、抑制异常表达的基因,从而达到治疗某种疾病的目的.按技术在遗传信息的中心法则的靶向环节来分类,基因治疗可通过以下几方面技术来实现:①基因转移技术: 用人工合成基因和基因转移等技术,将一种生物的基因片段转移到另一种生物的活细胞中,插入或整合在其DNA中,从而改变其遗传结构和某些特性.
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SARS-CoV人工合成基因CAGZ的克隆和表达
严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)是一种传播快、病死率高、严重威胁人类健康和生命的急性传染病.
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HIV多抗原位点同源序列合成基因的表达及活性鉴定
目的:在原核表达载体系统中对HIV-1gp41/gp120和HIV-2gp125/gp36外膜蛋白多个抗原位点同源序列合成基因进行表达、纯化并鉴定其活性.方法:人工合成含HIV-1gp41的3个抗原位点、HIV-1gp120的2个抗原位点、HIV-2gp125的3个抗原位点和HIV-2gp36的1个抗原位点的串联基因,克隆到原核表达载体pRSETB中,构建重组表达质粒pRSETB-env,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,采用金属离子亲和层析技术纯化表达蛋白,逐渐降低尿素浓度使目的蛋白复性,免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定.结果:目的基因在BL21中有较高表达率,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见相对分子质量约44 000的蛋白带,与设计相对分子质量相符.免疫印迹、ELISA试验显示pRSETB-env质粒的HIV-1/2表达蛋白与HIV-1及HIV-2患者血清都能较好地结合,与其他患者血清无交叉反应.结论:成功构建了由HIV-1/2外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env,并在原核细胞中高效表达,表达蛋白经纯化后纯度较高,并具有良好特异性和活性.
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淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒核蛋白合成基因的表达及应用
目的用合成基因表达产物取代淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)或其他方法重组蛋白抗原,用于LCMMV感染的诊断.方法采用Prosis软件对LCMV核蛋白(Np)全长氨基酸序列进行亲疏水性分析,合成LCMVsRNA第1816～2178位核苷酸序列编码的Np第380～500位氨基酸基因,克隆在His-tagpET-28a融合表达,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,建立ELISA检测试剂.结果表达产物主要以包涵体形式存在,表达量达20%以上.表达产物经Ni-NTA-Agarose纯化后纯度达到90%以上.经检测93份人血清,有6份病毒抗体阳性,阳性率为6.5%(6/93),与全病毒抗原检测结果7.5%(7/93)相近.结论用合成基因表达产物取代LCMV抗原检测病毒抗体,不仅可以消除病毒传播可能,而且特异性强.为LCMV感染诊断及生物材料质量控制提供有效方法.
关键词： 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 合成基因 重组蛋白 -
浅析急性早幼粒细胞白血病诊断及治疗
急性早幼粒细胞白血病发病急,骨髓与外周血中主要的细胞是原始细胞,这种病不及时治疗的话,很可能危及生命.这种病的的病因目前尚不明确.急性早幼粒细胞白血病(简称APL),是急性髓细胞白血病常见的表现,患者有明显的出血现象,偶而还有血栓凝结而引起的突然失明等表现.继发的患者经常应用化疗或放疗.继发性的APL的患者预后是较好的,其对治疗的反应和长期生存率与原发者相近.APL是急性白血病的一个独特类型,以t染色体易位为表现的特征,大约95%的患者都发生这种染色体的易位.T染色体易位产生一种由位于17号染色体与位于15号染色体的早幼粒细胞性白血病基因融合而成的合成基因,该基因转录后表达的产物是蛋白质,可使幼粒系分化阻滞在初期阶段,从而导致骨髓中的异常早幼粒细胞的增殖,终导致APL病灶的发生.因此导致APL发生的分子基础是融合基因.本文主要通过对APL的发病机制的分析,确定其诊断与治疗.
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核受体FXR硫氢化修饰后缓解非酒精性脂肪肝
目的：随着饮食习惯和生活方式改变，非酒精性脂肪肝发病率近十年来明显增高。 FXR在胆汁酸代谢及糖脂代谢中起重要作用， FXR硫氢化修饰后对糖脂代谢影响机制尚不清楚。方法：本研究主要用modified biotin switch assay 检测FXR硫氢化修饰。分别用CSE腺病毒和siRNA过表达和敲低H2 S观察FXR变化。 Real－time PCR和Weastern blot等方法检测FXR及下游信号通路关键分子mRNA和蛋白水平变化。用高脂喂养小鼠给予H2 S供体，观察肝脏形态学变化。结果：内源性和外源性H2 S都可使FXR发生硫氢化修饰，并增强其转录活性，抑制糖脂代谢关键分子SREBP1－C表达，其下游FAS、ACC、PEPCK、G6Pase等脂肪酸从头合成基因和糖异生基因受到抑制，动物实验部分高脂饮食小鼠给予H2 S供体腹腔注射后，肝脏HE染色和油红O染色均表明脂滴变小，脂肪肝减轻。结论：研究提示FXR硫氢化修饰后抑制脂质合成，减轻脂肪肝。
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HIV-1膜蛋白基因gp120和gp41的合成及在毕赤酵母中的表达
目的 合成适合酵母表述的HIV-1 膜蛋白gp120和gp41基因,在半赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gp120和sp41抗原.方法 选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gp120和gp41基因的酵母稀有密码子,采取基因搭桥法及聚合酶链反应(PCR),合成HIV-1 8p120和gp41基因,构建分泌型重组质粒并转化半赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HIV-1外膜糖蛋白gp120和sp41.结果 DNA测序证实合成的HIV-1 gp120和sp41基因正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹显示gp120和sp41在毕赤酵母中高效分泌表达.结论 gp120和gp41合成基因在毕赤酵母表达系统高效分泌表达.
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热休克蛋白70的免疫学进展
生物细胞在受热和其他理化因素(如缺血、缺氧、重金属离子、氨基酸类似物、病毒感染、DNA损伤等)作用后,发生热休克反应(Heat shock response,HSR),抑制一些正常蛋白质的合成,同时启动一类新的蛋白合成基因-热休克蛋白基因,合成热休克蛋白.
