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多重置换扩增在植入前遗传学诊断中的应用及展望
多重置换扩增是一种新兴的全基因组扩增技术,能对单个细胞进行全基因扩增,产生大量的优质DNA,具有高扩增效率和高保真性等特点.多重置换扩增联合常规PCR已被成功用于植入前遗传学诊断,进一步扩展了后者的应用范围.
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植入前遗传学诊断的安全性和可靠性探讨
植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)是在胚胎植入前对配子或体外受精胚胎进行遗传学分析的一项诊断技术,目的在于从源头预防遗传性疾病的发生,从而改善有遗传性疾病高风险夫妇的妊娠结局.近年来,随着分子生物学技术的进步,越来越多遗传性疾病的发生机制被阐明,PGD的诊断范围逐渐扩展,其应用周期数也日益增多.新技术的开展如比较基因组杂交及其微阵列提高了PGD诊断的准确性.然而,这项技术的安全性问题也引起了人们高度重视.作者从透明带开孔技术、不同时期胚胎活检、胚胎活检细胞数目以及遗传分析技术的可靠性等方面对PGD的安全性进行了探讨.
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植入前遗传学诊断的新进展
植入前遗传学诊断作为产前诊断的一种形式, 可在胚胎种植前进行诊断,从而防止遗传病的发生.其技术主要包括胚胎活检、聚合酶链反应及荧光原位杂交.现就这些技术在植入前遗传学诊断中的应用、存在的问题、解决及改进的方法进行综述.
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单细胞水平检测von Hippel-Lindau病基因突变的实验研究
目的 建立单细胞水平检测von Hippel-Lindau病基因(VHL)突变的实验方法.方法 单个淋巴细胞基于多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)的全基因组扩增后进行常规PCR后测序和实时荧光定量PCR,结合各荧光的终点变化判断对应的等位基因存在与否.结果 MDA后单细胞扩增效率为90.91%,污染率为0;通过测序,患者VHL等位基因的脱扣率为26.67%,诊断正确率为73.33%;通过结合相应荧光的终点变化判断患者VHL基因的等位基因的脱扣率为16.67%,正确率为83.33%.结论 单细胞MDA后常规PCR后测序及实时荧光定量PCR能够特异、准确地检测单个淋巴细胞的VHL基因型,两者的联合应用有助于提高检测的准确性.
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单细胞巢式PCR诊断软骨发育不全
目的探讨单细胞水平诊断软骨发育不全(achondroplasia,ACH)的可靠性,为开展ACH的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis, PGD)打下基础.方法采用巢式PCR扩增单淋巴细胞及单卵裂球的成纤维细胞生长因子受体3基因的高发突变位点G380R区域,用限制酶Bfm Ⅰ消化PCR产物,10%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测.结果单淋巴细胞的PCR扩增成功率为90.4%,等位基因脱扣发生率为8.2%,诊断准确率为91.8%;单卵裂球的扩增成功率为75.4%.结论单细胞巢式PCR诊断ACH是比较稳定、可靠的.
关键词： 单细胞巢式聚合酶链反应 软骨发育不全 植入前遗传学诊断 突变检测 -
短串联重复序列在染色体罗氏易位植入前遗传学诊断的应用
目的:采用多重置换扩增(MDA)结合短串联重复序列(STR)建立一种基于PCR技术诊断染色体罗氏易位的植入前遗传学诊断(PGD)方法.方法:选择位于易位染色体上的STR位点,对家系采用荧光PCR进行分析,选择有多态性的位点,再采用MDA对单细胞进行全基因组扩增,根据家系分析的结果,对具有多态性的STR位点进行分析诊断.结果:对3个家系进行了4个取卵周期(3个PGD周期),每个家系分别采用7～ 15个具有多态性的STR位点进行分析,共对24个胚胎进行诊断.PGD的诊断效率为95.8％ (23/24),平衡胚胎占52.2％(12/23),异常胚胎占47.8％(11/23),共移植了6个胚胎,获得2例临床妊娠,临床妊娠率为66.7％(2/3),出生了2个健康婴儿,染色体核型均正常.结论:采用依赖于STR的PCR分析法可以用于染色体罗氏易位的PGD.
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胚胎植入前遗传学诊断技术临床应用中的法律问题研究
本文对胚胎植入前遗传诊断技术的临床实践情况及存在的问题进行了探讨,并综合分析其对权利保护、社会正义和人类尊严等形成的挑战.
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植入前诊断在优生方面的应用
植入前遗传学诊断技术是随着辅助生殖技术和分子生物学迅速发展起来的一门新技术,主要用于单基因遗传病夫妇、染色体异常夫妇,此外,还可用于肿瘤遗传易感性分析、组织相容性抗原配对、Rh血型的选择、迟发起痛疾病的诊断和性别选择.植入前遗传学诊断对于提高人口素质、控制出生缺陷以及不孕症的治疗是一项非常好的措施,而且大量临床经验初步表明这项技术的安全可靠性.
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Duchenne型肌营养不良症植入前遗传学诊断研究进展
植入前遗传学诊断是在胚胎着床前确定其遗传物质是否正常,从而决定该胚胎能否移植的一门新兴技术,该技术已应用于性别、单基因遗传病及染色体遗传病的诊断.目前世界上已有两百多个正常婴儿通过植入前诊断技术诞生,该资料回顾了DMD植入前诊断技术的发展,并对其技术路线及目前存在的问题及解决方法进行综述.
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常见染色体异常与不育的研究现状
不孕症的发病原因很多,目前染色体异常越来越成为人们关注的病因.染色体是遗传物质-基因的载体,它们决定着生物体的性状,直接或间接地控制着生物体所有的生命活动.染色体异常是一类包括染色体数目和(或)结构异常引起的遗传性疾病.染色体的数目和结构异常或发生改变将会导致基因的缺失、增加及基因位置的改变,从而使人体相应的结构和功能改变,导致一系列生理或发育异常,某些改变可影响生育功能,如男性可发生无精子症、少弱精子症等,女性可发生原发闭经、原发不孕、反复自然流产等,甚至引起死胎、畸胎、智障等.本文就常见染色体异常与不孕症的研究现状作一综述.
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IVF/ICSI-ET胚胎植入前PGD显微操作对其临床妊娠结局的影响
目的 探讨辅助生殖技术(ART)体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)胚胎移植前行胚胎植入前遗传学诊断PGD显微操作对其临床妊娠结局的影响.方法 回顾性分析我中心在2016年1月-2016年12月共实施的IVF/ICSI-ET胚胎植入前行PGD显微操作的76人,进行卵裂球活检,即在胚胎达6～8个细胞期时,用激光进行透明带打孔,吸取1～2个卵裂球进行活检;随机选取同期实施IVF/ICSI-ET未行PGD的76人作为对照组,比较两组胚胎移植后14d、18d血清β-hCG水平,临床妊娠率、流产率、异位妊娠率和分娩率.结果 两组受孕者移植后14 d(877.3±120.5 IU/L vs 798.0±195.3 IU/L)和18 d(2356.8±790.7 IU/L vs 3008.1±920.6 IU/L)的β-hCG值比较差异无统计学意义(P＞0.05);两组受孕者临床妊娠率(42.1％ vs 44.7％)、流产率(7.9％vs 10.5％)、异位妊娠率(1.3％vs 0％)、多胎妊娠率(14.5％ vs 15.8％)和分娩获婴率(32.9％vs 34.2％)比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IVF/ICSI-ET受孕者必要时行胚胎植入前遗传学诊断所进行的胚胎显微操作并不增加妊娠的风险.
关键词： 植入前遗传学诊断 IVF/ICSI-ET 妊娠结局
