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RNA干扰沉默酸性鞘磷脂酶1基因对人成纤维细胞凋亡的影响
目的 为研发保护女性生殖细胞的小分子干扰RNA(siRNA)类药物,以人包皮成纤维细胞(HFF)为模型,检测靶向凋亡关键基因酸性鞘磷脂酶1(SMPD1)基因的siRNA对HFF凋亡的抑制作用.方法 设计合成三对靶向SMPD1基因的siRNA并体外转染HFF细胞,转染后48 h用丝裂霉素(MMC)诱导细胞凋亡.荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Q-RT-PCR)法及免疫印迹(Western blot)检测siRNA转染后SMPD1在mRNA水平和蛋白水平的变化,Annexin Ⅴ-PI双染检测细胞凋亡率.用脂质体(lipofectamine 2000)和无干扰siRNA(NT siRNA )作为对照.结果 siRNA1、2、3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为(67.0±9.0)%、0%、(45.0±2.1)%,以siRNA1高,蛋白水平的抑制也呈现相同变化.siRNA1组细胞凋亡率为15.2%,明显低于MMC组(26.3%).结论 靶向SMPD1的siRNA可以抑制人包皮成纤维细胞凋亡.
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乙型肝炎病毒X蛋白稳定表达株的构建及沉默效果观察
目的 构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)基因的HepG2-HBX细胞系,观察小分子干扰RNA(siRNA)对HBX基因的特异性抑制效果.方法 用脂质体将含有HBX序列的真核表达质粒pCDNA3.1(+)/HBX-Flag转染人HepG2细胞系,通过G418筛选后,分别经RT-PCR和免疫组化对HBX的表达进行验证;化学合成靶向HBX的siRNA(即siHBX),转染入HBX稳定表达株,分别以RT-PCB和实时荧光定量RT-PCR检测HBX mRNA表达水平,Western blot检测HBX蛋白表达水平以验证siHBX对HBX基因的沉默效应,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 成功构建表达HBX基因的HepG2-HBX细胞系;siHBX可以高效特异抑制HBX表达,并抑制细胞周期进展.结论 siHBX可作为一种靶向抑制肝癌细胞系内HBX表达的策略,为后续HBV感染相关性肝癌的治疗奠定了实验基础.
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小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药
目的研究小分子干扰RNA(siRNA)逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901/VCR mdr1介导的多药耐药效应. 方法根据mdrlcDNA已知序列,设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA(mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达,免疫组织化学检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性. 结果siRNA转染SGC7901/VCR细胞48 h后,mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降,细胞内阿霉素积累量增加,对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79.59%及59.98%. 结论siRNA可逆转SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药.
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src抑制的蛋白激酶C底物调控内皮细胞分泌TNF-α
目的 探讨src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响.方法 体外培养Wistar大鼠PMVEC,按随机数字表法分组(n=4),10 mg/L LPS刺激1h、3h、6h、12h、24 h或0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L LPS刺激24 h；蛋白激酶C抑制剂(BIM)预处理0.5h或50 nmol/L SSeCKS-siRNA转染PMVEC 48 h后再加入10 mg/L LPS孵育24 h,酶联免疫吸附法检测细胞培养液上清TNF-α量(ng/L).采用SPSS10.0软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析,以P＜ 0.05为差异具有统计学意义.结果 0.1、1、10 mg/L LPS刺激PMVEC 24 h后的,TNF-α分泌量分别为(253.70±23.55)、(327.88±37.25)、(403.20±36.22) ng/L,均高于未刺激组(82.28±22.56) ng/L(均P =0.000)；10 mg/L LPS刺激PMVEC后,TNF-α分泌量于1h升高(170.11±49.22) ng/L,6h达峰值(404.82±13.78) ng/L,刺激24 h后仍维持高水平(395.67±36.23) ng/L,分别与未刺激组(84.60±23.61) ng,/L比较:P=0.001,0.000,0.000；BIM预处理PMVEC后再给予LPS刺激,TNF-α分泌量(200.44±27.39) ng/L较LPS单独刺激(402.28±31.07) ng/L显著较少(P=0.000)；与LPS单独刺激比较(407.28±32.64) ng/L,SSeCKS-siRNA抑制SSeCKS表达后,LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应(195.20±13.28)ng/L也显著下降(P=0.000).结论 下调SSeCKS表达和蛋白激酶C活性可抑制LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应,从而减轻PMVEC的炎症反应.
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RNA干扰技术在抗乙型肝炎病毒感染应用中的研究进展
RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术能够特异性地降低目的基因的表达, 是目前有效的基因沉默技术, 体内外研究均证实了RNAi在抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染中的作用. 近年来, 为使RNAi更适应抗HBV感染临床应用的需要, 许多学者针对小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)靶序列、转导方法、短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)载体、各种联合策略的选择及化学修饰的应用等方面进行了大量研究. 本文综述RNAi技术, 尤其是HBV特异shRNA在抗HBV感染中应用的研究进展.
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siRNA沉默Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响
目的:观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默Livin基因在胃癌BGC-823细胞中的表达, 并探讨Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响.方法:自行设计两条针对Livin基因的siRNA:Livin-sh-1和Livin-sh-2, 以此构建相应的表达载体并分别转染至对数生长期胃癌BGC-823细胞, 经G418筛选后分别采用半定量RTPCR检测不同siRNA实验分组细胞BGC-823mRNA水平变化, 四氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖、流式细胞仪检测胃癌细胞的凋亡.结果:siRNA对照组与空siRNA载体组Livinα/β mRNA表达差别无显著性; 但转染siRNA组Livin α/β mRNA表达显著低于空白对照组和空siRNA载体组(Livin α:0.11±0.07 vs 0.37±0.10, 0.34±0.08; Livin β:0.13±0.04 vs 0.43±0.09, 0.45±0.11, 均P<0.05). 空白对照组与空siRNA载体组相比, 24、48、96 h和1 wk时细胞生长未受影响; 而siRNA组在转染后24 h和48 h细胞生长未受影响, 但在96 h和1 wk时则被明显抑制( P<0.01). 转染siRNA组的细胞的凋亡率与空白对照组和转染空siRNA载体组相比显著增加(14.85%±1.35% vs 4.51%±0.36%, 6.13%±0.71%, 均P<0.05).结论:siRNA沉默Livin基因能抑制胃癌细胞的生长, 促进胃癌细胞的凋亡, Livin基因有可能成为胃癌治疗的新靶点.
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VEGFR-3 siRNA体外对人结肠癌细胞生长的抑制作用
目的: 探讨血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)在肿瘤细胞生长中的作用.方法:根据人ⅦGFR-3mRNA编码序列,设计3个RNA干涉靶点,构建siRNA表达载体,并转染到LoVo细胞中,应用半定量RT-PCR检测基因转染前后VEGFR-3mRNA表达水平的变化,采用四甲基偶氮唑蓝显色法(MTT)观察细胞生长变化,并应用流式细胞计数仪分析细胞凋亡的情况.结果:针对,VEGFR-3基因的siRNA表达载体成功构建,psiRNA-VEGFR-3可显著抑制LoVo细胞中VEGFR-3基因的表达,转染psiRNA-VEGFR-3细胞生长明显抑制,并可诱导LoVo细胞出现凋亡.结论:p3iRNA-VEGFR-3载体能够在loVo细胞中引发RNA干扰效应,下调VEGFR-3基因的表达可以抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.
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TMPRSS4基因沉默对胰腺癌SW1990细胞生长及侵袭的影响
目的 观察TMPRSS4基因沉默对人胰腺癌SW1990细胞体外生长增殖和侵袭的影响.方法 体外合成4个靶向TMPRSS4基因和阴性对照的真核表达载体,瞬时转染到SW1990细胞,实时定量PCR法检测转染细胞的TMPRSS4 mRNA表达.以干扰效率高的真核表达载体转染SW1990细胞,G418筛选出稳定的TMPRSS4基因沉默的细胞株,蛋白质印迹法检测稳定细胞株TMPRSS4蛋白抑制效率,CCK-8法检测细胞生长抑制率,Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 成功构建了稳定下调TMPRSS4表达的细胞株SW1990/psi-TMPRSS4,细胞转染效率为82.9%.与亲本SW1990细胞比较,TMPRSS4 mRNA和蛋白水平分别下调了80.1%、60%.SW1990/psi-TMPRSS4组穿膜细胞数为(118.6±13.4)个,显著低于阴性对照组的(157.4±12.9)个和亲本细胞组的(157.0±9.5)个(P值均<0.01).SW1990/psi-TMPRSS4组细胞的侵袭抑制率为24.5%.但各组细胞增殖无明显变化.结论 成功筛选出稳定下调TMPRSS4表达的细胞株.下调TMPRSS4表达能有效抑制胰腺癌SW1990细胞的侵袭能力,但对细胞增殖无影响.
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沉默畸胎瘤衍生生长因子-1基因对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响
目的 探讨TDGF-1基因沉默对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响.方法 设计并合成3个(S1、S2、S3)靶向TDGF-1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),筛选出沉默效果好的siRNA.以该siRNA的不同浓度(3.125、6.25、12.5 nmol/L)转染PANC1细胞,并设对照组和脂质体组.采用实时定量PCR和Western blotting检测TDGF-1 mRNA和蛋白表达,以软琼脂集落培养试验和Boyden小室检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,并将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察癌细胞的体内侵袭.结果 siRNA转染组细胞的TDGF-1 mRNA和蛋白表达水平呈浓度和时间依赖性下降,且较脂质体组明显降低(P值均＜0.01).对照组细胞集落形成数和穿膜细胞数分别为19.8±2.2和49.8±2.6;siRNA组呈浓度依赖性明显减少,12.5 nmol/L转染组分别为5.6±1.2和8.1±1.1.对照组、脂质体组和12.5 nmol/L转染组接种4周后裸鼠种植瘤体积分别为(2.228±0.026)cm3、(2.186±0.028)cm3和(0.728±0.023)cm3.对照组和脂质体组种植瘤侵犯周围肌层组织,转染细胞组未见侵犯.结论 采用RNA干扰技术沉默PANC 1细胞的TDGF-1基因表达可抑制癌细胞的侵袭力.
关键词： 胰腺肿瘤 畸胎瘤衍生生长因子-1 肿瘤侵袭 小分子干扰RNA -
siRNA蛋白抑制对LNCaP细胞增殖的影响作用
目的筛选针对α甲基-辅酶A消旋酶(AMACR)的小分子干扰RNA(siRNA),探讨该蛋白抑制后对前列腺癌细胞系LNCaP增殖的影响.方法设计并合成3对针对AMACR的siRNA序列,通过siPORTTM NeoFXTM转染LNCaP细胞;RT-PCR检测siRNA作用后AMACR mRNA的表达,Western blot检测AMACR蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡.结果通过测定条带灰度值并分析,编号21030的siRNA可有效抑制AMACR表达约77%,有效抑制AM-ACR mRNA水平约60%,编号为113442和21203的siRNA.均不能有效抑制AMACR表达.转染编号21030的siRNA可抑制LNCaP细胞增殖,但未发现明显的细胞凋亡.结论编号21030的siRNA可特异有效下调LNCaP AMACR基因表达,该蛋白抑制后可抑制LNCaP细胞增殖,为前列腺癌基因治疗提供新的思路.
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单核细胞趋化蛋白-1小分子干扰RNA真核表达质粒的构建及其意义
目的 构建单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,为进一步研究其对动脉粥样硬化(AS)的防治作用提供手段.方法 设计并合成两端含有酶切位点两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pSilencer2.0-U6中构建重组表达载体,转化DH-5α菌株,提取质粒行双酶切鉴定,并进行序列测定.结果 双酶切证实MCP-1 siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致.结论 成功构建MCP-siRNA表达载体,为动脉粥样硬化的防治奠定实验基础.
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小分子干扰RNA抑制CyclinD 1表达诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡研究
目的 探讨RNA干扰阻断细胞周期蛋白DI(CyclinDl)基因表达后,对瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期和细胞增殖、凋亡的影响.方法 针对CyclinDl基因设计并合成特定的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染入瘢痕疙瘩成纤维细胞,测定CyelinDl mRNA水平,流式细胞术分析细胞周期,FITC-Annexin V/PI细胞平均百分率为凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况.DNA梯型观察凋亡细胞DNA变化.结果 特异性siRNA能在mRNA水平下调成纤维细胞的CyclinDl基因的表达.转染特异性siRNA 24、48、72 h后,Gl期细胞平均百分率分别为(59.80±3.06)%、(66.01±4.03)%和(67.43±5.35)%,高于对照组(54.50±5.35)%;S期细胞平均百分率为(18.40±1.42)%、(17.21±1.76)%和(11.07±1.00)%,低于对照组(22.33±1.49)%.细胞凋亡率分别为(7.82±0.45)%、(15.71±1.06)%、(18.32±1.08)%.均显著高于对照组(0.68±0.12)%,细胞DNA断裂成片段状.结论 特异性siRNA分子能够抑制细胞CyclinDl基因的表达,使细胞阻滞于Gl期,并诱导细胞凋亡,为应用RNA干扰技术治疗瘢痕疙瘩提供了初步实验依据.
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siRNA下调LSD1基因对卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和周期的影响
目的 应用小分子干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)抑制赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)基因的表达,探讨其对卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和生长周期的影响.方法 采用脂质体介导法将LSD1-siRNA转染卵巢癌OVCAR-3细胞；实时荧光定量PCR (RFQ-PCR)和Western blot法检测基因的表达；MTT法检测细胞增殖能力；FCM分析细胞周期.结果 成功转染LSD1-siRNA后,OVCAR-3细胞中LSD1 mRNA和蛋白表达均明显下降；细胞增殖明显抑制；G2/M期细胞比例增加.结论 LSD1-siRNA可显著下调LSD1基因在卵巢癌OVCAR-3细胞中的表达水平,在一定程度上抑制卵巢癌细胞的增殖,导致细胞周期阻滞.
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CS-TPGS-b-(PCL-ran-PGA)纳米粒递送HIF-1α siRNA联合顺铂对鼻咽癌裸鼠移植瘤影响研究
目的 乏氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)增强抗肿瘤药物敏感性研究在国内外已有诸多报道.本研究拟探讨纳米聚合物壳聚糖-聚乙二醇1 000维生素E琥珀酸酯-聚乙内酯-聚乙醇酸[d-α-tocopheryl polyethylene glycol 1 000 succinate-b-poly(ε-caprolactone-ran-glycolide),CS-TPGS-b-(PCL-ran-PGA),简称CNP]包载HIF-1α小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)联合顺铂(cisplatin,DPP)对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 皮下接种CNE-2细胞建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,应用随机数字表法分磷酸盐缓冲液组(Control)、单纯纳米粒组(CNP,200 μg/kg)、单纯顺铂组(DPP,100 μg/kg)、单纯纳米粒联合顺铂组(CNP 200 μg/kg+DPP 100 μg/kg)、载HIF-1α siRNA纳米粒组(CNP-siRNA,200 μg/kg)和载HIF-1α siRNA纳米粒联合顺铂组(CNP-siRNA 200μg/kg+DPP 100μg/kg)6组.每组5只,腹腔注射3d1次,共7次.干预过程中3d测量1次肿瘤体积,治疗22d后拉颈处死裸鼠,称取瘤质量,计算抑瘤率;利用蛋白质印迹与RT-PCR检测移植瘤中HIF-1α和多重耐药基因-1/P糖蛋白(multidurg resistance gene 1/P-glycoprotein,MDR-1/P-gp)基因蛋白表达水平,HE染色观察各组肿瘤组织病理形态改变.结果 与Control组相比,CNP组抑瘤率为18.32％,DPP组为37.59％,CNP-siRNA组为43.32％,CNP+ DPP组为47.64％,CNP-siRNA+ DPP组为70.21％.其中CNP-siRNA+DPP组抑瘤效果为显著,与其他治疗组相比,差异有统计学意义,F=253.511,P＜0.001.在HIF-1α mRNA表达上,与Control组相比,CNP组mRNA表达量为0.89±0.04,DPP组为0.99±0.02,CNP-siRNA组为0.95±0.02,CNP+ DPP组为0.35±0.04,CNP-siRNA+DPP组为0.15±0.07.CNP-siRNA+ DPP组mRNA抑制效果为显著,与其他组相比,差异有统计学意义,F=351.194,P＜0.001.蛋白质印迹结果亦显示,CNP-siRNA+ DPP组中HIF-1α蛋白条带宽度明显低于其余各实验组,MDR-1/P-gp表达水平表现出与HIF-1α基因蛋白表达相似的实验结果.HE结果表明,CNP-siRNA+ DPP组能够显著促进肿瘤细胞坏死及凋亡.结论利用CNP纳米聚合物递送HIF-1α siRNA联合DDP能够有效下调肿瘤细胞HIF-1α及MDR 1/P-gp基因蛋白表达,抑制肿瘤生长,促进肿瘤细胞坏死凋亡.新型纳米聚合物CNP作为递送siRNA的有效载体,在肿瘤基因靶向治疗中具有较高的应用前景.
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RNA干扰沉默AKT基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡影响研究
目的:通过小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中PI3K/AKT信号通路关键基因蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)基因的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响.方法:人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,随机分为对照组、空白载体组和siRNA干扰组,siRNA干扰组通过脂质体介导AKT siRNA转染SKOV3细胞.荧光定量PCR法检测AKT在干扰前后AKT mRNA的表达,免疫荧光细胞化学法检测PI3K、AKT与PCNA蛋白在各组中的表达,MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪Annexin V/PI法检测细胞凋亡率的变化.结果:siRNA干扰组AKT mRNA的表达量为(0.325±0.04)明显抑制,并显著低于对照组,q=58.96,P＜0.001;免疫荧光细胞化学结果示,siRNA干扰组的AKT、PCNA蛋白的荧光强度较对照组与空白载体组明显降低,而PI3K蛋白在3组间差异无统计学意义,P=0.637;流式细胞仪Annexin V/PI法检测结果示,siRNA干扰组细胞凋亡率高达(79.52±2.31)％,较对照组(27.35±2.01)％与空白载体组(28.64±1.96)％明显升高,约是空白载体组(q=60.880,P＜0.001)与对照组(q=58.553,P＜0.001)的3倍,差异有统计学意义.结论:AKTsiRNA可干扰AKT基因的表达,抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,有望成为治疗卵巢癌的新方法.
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Bcl-XL小分子干扰RNA逆转人结肠癌获得性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐药
目的 探讨Bcl-XL小分子干扰RNA(siRNA)在逆转人结肠癌细胞获得性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)耐药中的作用.方法 以Bcl-XL siRNA转染获得性TRAIL耐药的人结肠癌DLD1-TRAIL/R细胞24 h,并用TRAIL蛋白处理,通过细胞计数和流式细胞仪检测细胞的存活率,并通过Western blot法检测各种凋亡相关蛋白的活化情况.结果Bcl-XL siRNA能有效下调DLD1-TRAIL/R细胞中Bcl-XL蛋白的表达水平,并且能够有效地逆转其对TRAIL蛋白的耐药.DLD1-TRAIL/R细胞经过Bcl-XL siRNA和TRAIL蛋白共同处理2 h后,其细胞凋亡率＞50%;共同处理4 h后,其细胞存活率＜40%;而对照组和TRAIL蛋白处理组的细胞凋亡率和生存率无明显变化(P＜0·05).Western blot法检测结果表明,经Bcl-XL siRNA与TRAIL蛋白联合处理后,DLD1TRAIL/R细胞中caspase-8、caspase-9、Bid、caspase-3以及多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)均明显活化,细胞色素C的释放显著增加.结论 Bcl-XL siRNA能够有效逆转结肠癌细胞获得性TRAIL耐药,这将为治疗肿瘤耐药提供一种新的思路.
关键词： Bcl-xl 小分子干扰RNA 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 耐药 -
靶向人胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药基因1小分子干扰RNA的有效序列筛选
目的筛选靶向人胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药基因1(MDR1)小分子干扰RNA(siRNA)的有效序列.方法设计并体外转录靶向MDR1的4条siRNA(MDR1si326、MDR1si1513、MDR1si2631和MDR1si3071),转染SGC7901/VCR细胞.用RT-PCR检测MDR1 mRNA表达,免疫印迹检测P-糖蛋白(P-gp)表达,流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)蓄积,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对ADR的敏感性.结果4条siRNA均能不同程度逆转SGC7901/VCR细胞MDR1介导的多药耐药.转染后48 h,MDR1si326组和MDR1si2631组的mRNA表达水平分别为0.42±0.07和0.49±0.02,较MDR1si1513或MDR1si3071组明显下降(P＜0.05);MDR1si326组细胞内ADR蓄积显著,中位数为30.03,MDR1si2631组次之,MDR1si3071组较少,MDR1si1513组少(P＜0.05);MDR1si2631组对ADR耐药的相对逆转率高,为(98.12±0.26)%,MDR1si326组次之(P＜0.05),MDR1si1513组和MDR1si3071组的差别不大(P＞0.05).转染后72 h,MDR1si326组蛋白质表达水平下降明显.结论MDR1si326对人胃癌SGC7901/VCR细胞MDR1介导的耐药逆转效果好,MDR1si2631次之,MDR1si3071较差,MDR1si1513差.
关键词： 小分子干扰RNA MDR1基因 SGC7901/VCR细胞 多药耐药 -
小分子干扰RNA分子化学修饰研究进展
RNA干扰是指转录后的基因沉默现象,可使基因沉默的小分子干扰RNA(siRNA)为基因治疗提供了又一个选择.为了实现其基因治疗价值,根据siRNA的作用机制和反义核酸修饰所取得的经验.为优化其药学性质和有效转运,进行了各种改进.其中,载体修饰和化学方法修饰siRNA是优化其性质的重要方法,本文对两种方法进行了简要的综述.
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反义寡核苷酸和小分子干扰RNA作为端粒酶抑制剂的研究进展
端粒酶是真核生物染色体末端的核蛋白结构,能够指导合成重复的端粒序列TTAGGG,而细胞的复制与端粒长度的维持有关.已有大量关于端粒酶的研究,很多临床前试验已将抑制端粒酶活性作为治疗恶性肿瘤的一个新的治疗方案.本文综述了反义寡核苷酸(ASODN)和小分子干扰RNA(siRNA)作为端粒酶抑制剂的研究进展,并进一步讨论了携载ASODN及siRNA基因载体的应用及其优缺点.
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STAT3小分子干扰RNA增强多柔比星的抗肿瘤活性
探讨靶向STAT3的小分子干扰RNA (STAT3-siRNA)对多柔比星(doxorubicin,DOX)的抗肿瘤活性的影响.通过RT-PCR及Western blotting检测STAT3在HepG2、HeLa和K562/DOX细胞中的表达水平以及小分子干扰RNA对STAT3表达的影响.采用MTT法和台盼蓝染色法,检测STAT3-siRNA对肿瘤细胞的抑制作用及其对DOX抗肿瘤活性的影响.应用高内涵活细胞成像系统检测STAT3-siRNA对细胞内DOX蓄积量以及细胞凋亡的影响.结果显示,STAT3在HepG2、HeLa和K562/DOX细胞中均有高表达,STAT3-siRNA明显下调STAT3mRNA及STAT3蛋白的表达.STAT3-siRNA可抑制HepG2、HeLa和K562/DOX细胞的生长,STAT3-siRNA与DOX联合应用后对3种细胞的IC50分别降低了3.13倍、5.22倍和1.74倍(与DOX单独应用比较).STAT3-siRNA使HepG2、HeLa及K562/DOX细胞内DOX的蓄积量分别增加16.8％、12.87％和25.67％,同时明显促进了DOX诱导的细胞凋亡.结果表明,STAT3-siRNA可明显增强DOX的抗肿瘤活性.
