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TMPRSS4基因沉默对胰腺癌SW1990细胞生长及侵袭的影响
目的 观察TMPRSS4基因沉默对人胰腺癌SW1990细胞体外生长增殖和侵袭的影响.方法 体外合成4个靶向TMPRSS4基因和阴性对照的真核表达载体,瞬时转染到SW1990细胞,实时定量PCR法检测转染细胞的TMPRSS4 mRNA表达.以干扰效率高的真核表达载体转染SW1990细胞,G418筛选出稳定的TMPRSS4基因沉默的细胞株,蛋白质印迹法检测稳定细胞株TMPRSS4蛋白抑制效率,CCK-8法检测细胞生长抑制率,Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 成功构建了稳定下调TMPRSS4表达的细胞株SW1990/psi-TMPRSS4,细胞转染效率为82.9%.与亲本SW1990细胞比较,TMPRSS4 mRNA和蛋白水平分别下调了80.1%、60%.SW1990/psi-TMPRSS4组穿膜细胞数为(118.6±13.4)个,显著低于阴性对照组的(157.4±12.9)个和亲本细胞组的(157.0±9.5)个(P值均<0.01).SW1990/psi-TMPRSS4组细胞的侵袭抑制率为24.5%.但各组细胞增殖无明显变化.结论 成功筛选出稳定下调TMPRSS4表达的细胞株.下调TMPRSS4表达能有效抑制胰腺癌SW1990细胞的侵袭能力,但对细胞增殖无影响.
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人参炔醇体外抑制人胰腺癌SW1990细胞迁移作用研究
目的 胰腺癌患者的高死亡率与肿瘤转移高度相关,本研究主要探讨人参炔醇对胰腺癌细胞迁移的作用.方法 将人胰腺癌细胞系SW1990细胞与不同浓度人参炔醇(0、8、16、32和64 μg/mL)分别共培养3、6、12和24 h后,CCK-8试验检测人参炔醇对SW1990增殖活性的影响;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测人参炔醇对细胞迁移能力的影响;蛋白质印迹法检测细胞迁移相关蛋白E-Cadherin、MMP-9和Vimentin以及增殖相关蛋白PCNA表达的变化.结果 CCK 8试验结果显示,不同浓度人参炔醇对SW1990增殖具有抑制作用,但不同浓度之间抑制作用存在差异;其中以浓度为32 μg/mL人参炔醇作用24 h后抑制率高.划痕实验及Transwell迁移实验结果显示,对照组(0 μg/mL)细胞的愈合率为(78.3±1.4)％,8、16和32 μg/mL人参炔醇组细胞的愈合率分别为(47.8±1.9)％、(30.82±1.2)％和(20.54±2.8)％,差异有统计学意义,F=169.524,P＜0.01.Transwell迁移实验中,对照组与实验组穿至下室的细胞数分别为410.0±7.41、351.3±5.20、183.1±10.01和108.5±10.53,差异有统计学意义,F=284.574,P＜0.01.不同浓度人参炔醇对SW1990细胞迁移具有抑制作用,且在32 μg/mL浓度24 h抑制作用为显著.蛋白质印迹法结果显示,随着药物浓度升高,SW1990细胞E-Cadherin表达上调,Vimentin及MMP-9表达下调,P＜0.01;增殖相关蛋白PCNA的表达下调,P＜0.01.结论 人参炔醇能够有效的抑制胰腺癌SW1990细胞迁移,这一作用主要与通过抑制细胞增殖及上皮细胞向间质细胞转化相关.
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熊果酸对胰腺癌细胞SW1990增殖及其对微小RNA-760表达的影响
目的 探讨熊果酸对胰腺癌细胞SW1990增殖及其对微小RNA-760(miR-760)表达的影响.方法 将SW1990细胞分为对照组和实验Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组.对照组予以空白培养基溶液;实验Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组分别予以含5,10,20,40,80 μmol·L-1熊果酸的培养基溶液培养.于作用24,48,72 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞的增殖作用;用倒置显微镜观察细胞形态的变化;用microRNA提取试剂盒和反转录聚合酶链式反应测定miR-760的表达水平.结果 对照组和实验Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组的孵育24 h细胞存活率分别为(100.21±2.89)％,(94.42±2.24)％,(90.52±2.13)％,(86.71±0.48)％,(66.11±1.46)％,(40.50±1.32)％;孵育48 h细胞存活率分别为(100.38±2.56)％,(91.09±2.36)％,(85.54±7.43)％,(73.56±9.01)％,(52.72±1.25)％,(33.85±1.27)％;孵育72 h细胞存活率分别为(101.52±2.42)％,(84.66±2.51)％,(73.75±6.27)％,(63.10±2.08)％,(44.77±1.77)％,(24.43±1.30)％;孵育24 h miR-760表达量分别为1.00±0,1.15 ±0.23,1.47±0.41,1.77±0.27,2.65±0.14,3.54±0.51;孵育48h表达量分别为1.00±0,1.27±0.15,1.75±0.23,2.24±0.31,3.52±0.22,4.43±0.31;孵育72 h表达量别为1.00±0,1.40±0.11,2.00±0.10,2.52土0.17,3.93±0.65,5.16±0.45,差异均有统计学意义(均P＜0.05).随着熊果酸浓度增加和作用时间延长,SW1990细胞逐渐呈现变形、萎缩、甚至死亡.结论 熊果酸对胰腺癌细胞具有显著增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,高浓度的熊果酸长时间作用可导致细胞miR-760表达量升高.
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冬凌草甲素对胰腺癌SW1990细胞的抑制作用及机制
目的：探讨冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法以10、20、40μmol/L不同浓度冬凌草甲素( Ori)作用于胰腺癌SW1990细胞,采用CCK-8检测胰腺癌SW1990细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况；RT-PCR法检测Survivin、p21基因mRNA表达水平。结果不同浓度的Ori作用于胰腺癌SW1990细胞1、2、3 d后,胰腺癌SW1990细胞增殖抑制程度不等,药物浓度越高,抑制程度越高,两者间具有明显剂量与时间依赖性。0、10、20、40μmol/L的冬凌草甲素作用于胰腺癌SW1990细胞24 h后,凋亡率分别为0．87%±0．65%、1．85%±1．02%、5．38%±0．15%和16．60%±0．50%,出现明显的G2/M期周期阻滞。与对照组相比,10、20、40μmol/L的Ori作用于SW1990细胞24 h后,p21 mRNA表达增加,而Survivin mRNA表达下降。结论冬凌草甲素通过诱导凋亡和G2/M期周期阻滞来实现对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用,其机制可能与Survivin和p21调节信号有关。
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人胰腺癌高肝转移细胞株的建立及其意义
背景与目的:胰腺癌肝转移是胰腺癌晚期常见的症状,也是主要的致死原因.肿瘤转移是一个相当复杂的过程,建立胰腺癌肝转移模型是研究胰腺癌肝转移机理关键的一步.本研究通过连续人胰腺癌SW1990细胞脾脏移植法筛选出高肝转移胰腺癌细胞株,并对其转移相关特性进行分析.方法:人胰腺癌SW1990细胞脾内注射出现肝转移病灶后,将肝转移病灶肿瘤细胞体外原代培养扩增,再脾内注射出现肝转移病灶,此过程重复4次筛选到SW1990H4;然后比较SW1990H4和SW1990细胞株的核型、细胞体外增殖、细胞周期、体外侵袭、体内成瘤性、转移性和部分转移相关基因MMP-2、MMP-9、VEGF、bFGF和E-cadherin mRNA表达水平的差异.结果:SW1990H4和SW1990细胞株的核型及周期差异无显著性(P＞0.05);SW1990H4体外细胞增殖速度、体外侵袭能力、移植瘤增长速度和肝转移率均显著高于SW1990细胞株(P＜0.05),SW1990H4细胞MMP-2、VEGF、bFGF和E-cadherin mR-NA表达水平均高于SW1990,只有MMP-9 mRNA表达水平低于SW1990.结论:SW1990H4是人胰腺癌高肝转移细胞株,可应用于胰腺癌肝转移机制研究和抗肝转移药物的筛选.
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激活和抑制Stat 3信号途径对胰腺癌细胞侵袭能力的影响
目的:通过激活和阻断人胰腺癌细胞中的Stat3信号转导通路,观察细胞株侵袭能力的变化并探讨其作用机制.方法:采用IL-6处理人胰腺癌细胞Capan-2,AG490处理人胰腺癌细胞SW1990后,MTT法检测细胞的增殖状态,免疫细胞化学法和Western 印迹法检测p-Stat3的表达,实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR, RFQ-PCR)和Western 印迹法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2) mRNA及其蛋白的表达,体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果:IL-6可促进Capan-2细胞的增殖能力提高(P<0.05),p-Stat3的表达增强,VEGF和MMP-2 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),细胞侵袭能力增强.AG490可抑制SW1990细胞株的增殖(P<0.05),p-Stat3的表达下降,VEGF和MMP-2 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05),侵袭能力减弱.结论:Stat3信号转导通路在胰腺癌侵袭过程中起着重要作用,以Stat3信号转导通路为靶点的基因治疗可能为胰腺癌治疗提供新的方向.
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阻断STAT3信号转导通路对人胰腺癌细胞生长的影响
目的:探讨Janus激酶(Janus kinase,JAK)特异性抑制剂AG490阻断STAT3信号转导通路对高表达STAT3的人胰腺癌细胞系SW1990生长增殖的作用及其机制.方法:使用AG490处理人胰腺癌细胞系SW1990,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测STAT3信号转导通路成员的表达.结果:AG490作用于人胰腺癌细胞系SW1990后,细胞增殖水平明显下降(P＜0.05);细胞凋亡百分比显著升高(P＜0.05);Western blot显示SW1990细胞中磷酸化STAT3(p-STAT3)、bcl-xL和cyclin D1蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论:STAT3信号转导通路在胰腺癌进展过程中起着重要作用;阻断STAT3信号转导通路可抑制人胰腺癌细胞增殖,促进其凋亡;以STAT3信号转导通路为靶点的治疗策略可能为胰腺癌治疗提供新的思路.
关键词： 胰腺肿瘤 信号转导与转录激活因子3 细胞凋亡 细胞周期蛋白类 SW1990细胞 -
125Ⅰ粒子持续照射对Sw1990及Panc-1细胞生物学效应的影响
目的 采用125Ⅰ粒子对胰腺癌细胞Sw1990及Panc-1行体外持续照射,研究其生物学效应,探讨连续照射对胰腺癌细胞增殖、DNA合成、细胞周期及凋亡的影响,并为胰腺癌放射实验细胞的选择提供参考.方法 将胰腺癌细胞Sw1990及Panc-1体外培养至对数生长期,行125Ⅰ粒子持续照射,在初始剂量率为12.13 cGy/h时,分别给予总剂量为0、2、4、6、8 Gy的照射,采用克隆形成实验检测照射后细胞的增殖能力,绘制生存曲线,计算细胞存活率(SF2),检测细胞凋亡率和细胞周期,以及3H-TDR掺入实验探究照射后细胞DNA合成情况.结果 经过拟合,计算出Sw1990和Panc-1细胞的SF2值分别为0.766±0.063和0.729±0.045,随着照射剂量增高,两种细胞凋亡率也逐渐升高,Panc-1细胞的大凋亡率出现在6 Gy,Sw1990出现在8 Gy.G2/M期阻滞分数均逐渐升高,3H-TDR掺入放射量逐渐降低.结论 125Ⅰ持续照射胰腺癌细胞时,细胞凋亡及G2/M期阻滞是抑制细胞增殖的主要原因,在剂量为0、2、4、6、8 Gy时,Sw1990及Panc-1细胞生物学效应差异无统计学意义.
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表皮生长因子诱导人胰腺癌细胞SW1990中人宫颈癌基因的表达及其机制
目的 研究表皮生长因子(EGF)诱导人胰腺癌细胞SW1990中人宫颈癌基因(HCCR)蛋白表达的分子信号通路机制.方法 100 ng/ml EGF作用SW1990细胞不同时间后,用Western blot检测其磷酸化AKT和HCCR蛋白表达情况；用LY294002(PI3 K/AKT抑制剂)预处理SW1990细胞后用EGF作用SW1990细胞,观察其HCCR蛋白表达情况.结果 Western blot结果显示,与对照组相比,细胞内磷酸化AKT表达水平在4h时明显升高(P＜0.05),而HCCR表达水平则随着EGF处理时间增加而升高(P＜0.05)；LY294002(PI3 K/AKT抑制剂)可阻断EGF诱导的HCCR蛋白表达.结论 EGF通过PI3K/AKT通路诱导人胰腺癌细胞SW1990中HCCR蛋白的表达,这一通路可被PI3 K/AKT抑制剂阻断.
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冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞系生长抑制作用
目的 研究冬凌草甲素(oridonin)对人胰腺癌SW1990细胞生长抑制作用并探究其可能机制.方法 采用MTT法检测冬凌草甲素对SW1990细胞增殖抑制作用、Hoechst 33258染色法及透射电镜观察细胞的形态学变化、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率、RT-PCR法检测survivin、p21 mRNA表达.结果 冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞具有明显的生长抑制作用,荧光显微镜和透射电镜下均见到典型的凋亡形态学改变,流式分析出现亚G_1峰并显示G_2/M期周期阻滞.RT-PCR分析结果 显示p21 mRNA表达增加而survivin mRNA表达减少.结论 冬凌草甲素通过诱导凋亡和G_2/M期周期阻滞来抑制人胰腺癌SW1990细胞生长,其分子机制可能与survivin和p21调节的信号途径有关.
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不同浓度塞来昔布对胰腺癌细胞抵抗机制的研究
目的:研究不同浓度的塞来昔布对胰腺癌SW 1990细胞的生长抑制作用.方法:实验分为两部分进行.(1)将SW1990细胞分为氟尿嘧啶组(50 μ g/mL)、塞来昔布组(50 μ mol/L)、联合组(塞采昔布50μ mol/L+氟尿嘧啶50 μ g/mL)、空白组,培养24 h后采用MTT比色法检测各组SW1990细胞的生长抑制率,采用流式细胞仪检测各细胞周期分布比例;(2)分别采用不同浓度(12.5、25 0、50 0、100.0 u mol/L)的塞来昔布及同时采用上述不同浓度的塞来昔布分别联合50μg/mL的氟尿嘧啶处理SW1990细胞24h,采用RT-PCR法检测Survivn mRNA的表达差异,采用ELISA法检测各组环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-14(MMP-14)的表达差异.结果:塞来昔布组、氟尿嘧啶组、联合组的细胞抑制率均显著高于空白组(P＜0.05),联合组显著高于塞来昔布组和氟尿嘧啶组(P＜0.05),塞来昔布组显著低于氟尿嘧啶组(P＜005);塞来昔布组、氟尿嘧啶组、联合组的G0/G1期细胞比例显著高于空白组(P＜0.05),塞来昔布组、氟尿嘧啶组显著低于联合组(P＜0.05),氟尿嘧啶组显著高于塞来昔布组(P＜0.05);随着塞来昔布浓度的增加,塞来昔布组、塞来昔布+氟尿嘧啶组的Survivn mRNA、COX-2及MMP-14蛋白表达水平均逐渐降低且组间差异均有统计学意义(P＜0.05),相同浓度的塞来昔布情况下,塞来昔布+氟尿嘧啶组的Survivn RNA、COX-2及MMP-14蛋白表达水平均显著低于塞来昔布组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:塞来昔布对胰腺癌SW1990细胞生长具有显著地抑制作用,并且呈剂量依赖关系,其作用机制可能与下调Survivn mRNA、COX-2及MMP-14蛋白表达有关.
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外源性野生型p53基因对sW1990细胞调控基因表达的影响
目的：探讨外源性野生型p53基因对胰腺癌SW1990细胞调控基因表达的影响与可能机制。方法：分别采用RT-PCR和Western blot方法检测sw1990细胞、重组质粒p53-GFP转染的sw1990细胞和正常胰腺组织中p53、p21waf1/cip1、bax、puma、pten及mdm2 mRNA和蛋白的表达。结果：sw1990细胞中p53、p21waf1/cip1、bax、puma和pten mRNA的表达低于正常胰腺组织(t分别为3.657、4.214、5.463、2.225和2.032，P均＜0.05)，mdm2 mRNA的表达高于正常胰腺组织(t=4.262，P=0.017)，P53、BAX、PTEN和磷酸化AKT蛋白水平低于正常胰腺组织(t分别为7.928、5.879、10.287和4.798，P均＜0.05)。p53-GFP转染组中p53、p21wafl/cip1、bax、puma、pten和mdm2 mRNA的表达高于未处理组(t分别为3.512、4.227、2.310、2.410、5.476和3.285，P均＜0.05)，P53、BAX和PTEN蛋白水平高于未处理组(t分别为16.040、7.885和2.898，P均＜0.05)。结论：外源性野生型p53基因导入后可能通过诱导p21waf1/cip1/cip、bax、pten、puma和mdm2的表达。
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水飞蓟宾联合5-FU抑制胃癌MGC-803细胞增殖及机制
目的：研究水飞蓟宾联合5-氟尿嘧啶（5-FU ）抑制胃癌MGC-803细胞增殖，探讨其协同增效作用及机制．方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度的水飞蓟宾对人胃癌MGC-803细胞，人正常肝L02细胞的增殖抑制作用，并计算IC20，IC50；采用IC20浓度的水飞蓟宾联合不同浓度的5-氟尿嘧啶，观察对人胃癌MGC-803细胞增殖抑制作用；水飞蓟宾单独或联合5-FU作用于胃癌MGC-803细胞，碘化丙锭（PI）单染色检测细胞周期改变，Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平，Western blotting检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达．结果：MTT法检测显示，水飞蓟宾对胃癌MGC-803细胞有增殖抑制作用，且呈剂量-效应关系，对人正常肝L02细胞增殖抑制作用较弱．水飞蓟宾作用于胃癌MGC-803细胞48 h 的IC20、IC50浓度分别为144.6、214.7μmol /L；水飞蓟宾与不同浓度的5-氟尿嘧啶联合作用于MGC-803细胞48 h，可提高MGC-803细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性，增敏5.73倍．流式结果显示，无论是单独使用水飞蓟宾、5-氟尿嘧啶还是水飞蓟宾与5-氟尿嘧啶联合使用都能使细胞抑制在G0/G1期和出现凋亡细胞群；Western blotting结果显示，水飞蓟宾与5-氟尿嘧啶联合使用，能使细胞的细胞周期相关蛋白P15表达升高，CDK6表达下降，Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2，Bcl-xL表达明显降低，促凋亡蛋白Bax表达基本不变，Casepase-9，Caspase-3活化降解．结论：水飞蓟宾提高胃癌MGC-803细胞对5-FU的敏感性，水飞蓟宾在联合5-FU之后能够使MGC-803细胞抑制在G0/G1期，并通过线粒体凋亡途径使细胞发生凋亡．
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青藤碱对胰腺癌细胞系SW1990增殖及凋亡的影响
目的:探讨青藤碱(SIN)对胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响.方法:胰腺癌SW1900细胞分为实验组和对照组,实验组设置SIN浓度梯度0.125、0.25、0.5、1.0及2.0 mmol/L组,对照组不作处理;CCK-8方法检测SIN对胰腺癌细胞SW1990增殖的影响,平板克隆实验检测SIN对胰腺癌SW1990细胞集落形成的影响,流式细胞术检测SIN对胰腺癌SW1990细胞凋亡的影响,Western blot检测SIN对胰腺癌SW1990细胞中PARP蛋白表达水平的影响.结果:SIN作用于SW1990细胞后,细胞增殖率随着SIN剂量增加而降低(P＜0.05),细胞集落形成数量逐渐减少(P＜0.05),细胞凋亡率逐渐增加(P＜0.05);相同浓度SIN时,随着作用时间延长,其对SW1990细胞增殖的抑制作用逐渐增强(P＜0.05);Western blot结果显示胰腺癌SW1990细胞PARP蛋白表达水平逐渐随着SIN剂量增加而减少(P＜0.05).结论:青藤碱能有效抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖,其机制可能与诱导SW 1990细胞凋亡有关.
