海洋真菌多糖YCP结合的免疫细胞类型的体外筛选

目的:体外筛选海洋真菌多糖(YCP)结合的免疫细胞类型.方法:采用化学偶联的方法将荧光胺(FLA)和YCP结合,制备荧光探针YCP-FLA.分离不同的免疫细胞(巨噬细胞、单核细胞、Kupffer细胞等)与YCP-FLA共孵育,荧光显微镜观察以及流式细胞仪检测YCP-FLA和不同免疫细胞结合特性.结果和结论:YCP-FLA可以直接与单核巨噬细胞(腹腔巨噬细胞、脾巨噬细胞、肝Kupffer细胞和人外周血单核细胞)结合,推测YCP可能是通过单核/巨噬细胞表面的受体.调节免疫活性.

下调 hENT1 可抑制胰腺癌细胞株 Sw1990对吉西他滨的跨膜转运

目的:明确下调hENT1后对胰腺癌细胞株Sw1990跨膜转运吉西他滨的影响.方法:将能特异性下调hENT1的pSilertce-hENT1 4.1-CMV neo的重组质粒以及对照质粒转染至胰腺癌Sw1990细胞内.采用G418筛选阳性克隆细胞.RT-PCR检测hENT1 mRNA表达情况.培养Sw1990细胞、pSilence-hENTISi-Sw1990、pSilence-Control-Sw1990细胞.3组细胞培养基中吉西他滨质量浓度均为100 ttg/mL,温育0,15,30 min,1,2,4 h后收集细胞.取等量细胞悬液两份各100μL,一份作为检测样本用毛细管区带电泳测定吉西他滨总量,另一份用作平行样本测定总蛋白含量.根据蛋白-细胞数量标准曲线来确定平行样本中细胞数,再用血细胞分析仪确定细胞体积,后,计算单细胞内药物总量及浓度.结果:pSilence-hENTlSi-Sw1990细胞的hENT1 mRNA表达水平下调50%.Sw1990组用含吉西他滨(100μg/mL)的DMEM培养基温育后,细胞内药物质量浓度在30 min达(55.1±10.4)μg/mL,60 min达(70.2±7.8)p,g/mL,120 min后处于平台期(90.1±6.0)μg/mL.相比之下,pSilence-hENTlSi-Sw1990组细胞内质量药物浓度30 min达(41.3±4.9)μg/mL,60 min达平台期(51.3±11.8)μg/mL,与对照组相比,细胞内浓度处于较低水平(P＜0.05).pSilence-hENTlcontrol-Sw1990组与Sw1990组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:下调hENTI可以抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的摄取,hENTl是吉西他滨跨膜转运的重要通道.

红景天苷对正常动物血小板聚集的影响

目的:研究红景天苷对正常动物血小板聚集的影响.方法:给予红景天苷5 d,观察其对大鼠血小板聚集率、小鼠凝血时间和血小板数的影响;采用体外血小板聚集法,利用不同的诱导剂,观察红景天苷对血小板聚集率的作用.结果:红景天苷各剂量组均能降低大鼠血小板聚集率;对ADP、花生四烯酸和胶原诱导的家兔体外血小板聚集,红景天苷1.85、0.93 m g/mL能显著降低1 min、5 min体外血小板聚集率和大聚集率;红景天苷48.0、24.0 mg/kg能明显延长小鼠的凝血时间,各剂量组对血小板数目无明显影响.结论:红景天苷明显降低大鼠和家兔血小板聚集率,延长小鼠凝血时间,具有一定的抗凝作用.

P-糖蛋白抑制剂HZ08对裸鼠体内肿瘤多药耐药逆转以及对大鼠肝P450酶影响

目的:考察P-糖蛋白抑制剂HZ08 对K562/ADM接种裸鼠体内肿瘤多药耐药的逆转作用及HZ08对大鼠肝P450酶亚型的影响.方法:K562/ADM接种的裸鼠尾静脉注射HZ08和阿霉素4周,与对照组和阳性药组比较瘤重;HZ08与CYP450亚型特异性底物在大鼠肝微粒体中温孵,与对照组比较测定HZ08 对于CYP450亚型的影响.结果:HZ08可显著减小裸鼠体内的瘤重,并对大鼠肝微粒体CYP3A4有较弱的抑制作用,对其他P450酶亚型无显著抑制作用.结论:HZ08在裸鼠体内具有较好的逆转P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药的作用,并且在体外实验中对P450酶具有较小的影响.

藤黄酸对胃癌BGC-803细胞凋亡的作用及对survivin基因表达的影响

目的:研究藤黄酸对人胃癌细胞株BGC-803凋亡的作用及其对胃癌细胞survivin基因表达的影响.观察应用RNA干扰(RNAi)技术沉默survivin基因的表达后,藤黄酸对胃癌细胞BGC-803的抑瘤效应.方法:应用MTT、DNA ladder等方法研究藤黄酸对胃癌细胞系BGC-803凋亡的诱导作用,运用RT-PCR、Western-blotting分析藤黄酸和survivin-siRNA对胃癌细胞survivin表达的影响.MTT法检测藤黄酸对转染survivin-siRNA后的BGC-803细胞株抑瘤作用.结果:藤黄酸可抑制BGC-803细胞的生长,其抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖关系.藤黄酸作用BGC-803细胞后,survivin蛋白表达降低.通过siRNA有效阻断BGC-803细胞survivin基因的表达后,藤黄酸对细胞的抑瘤效果可以进一步提高.结论:藤黄 酸可以有效的抑制survivin基因表达,从而促进肿瘤细胞凋亡,同时survivin-siRNA与藤黄酸具有明显的协同抗肿瘤作用.

注射用多西他赛脂质体的制备、体外释放及细胞毒作用

目的:制备注射用多西他赛脂质体,并考察其理化性质、体外释放特性及细胞毒作用.方法:采用薄膜分散高压均质结合冻干工艺制备多西他赛脂质体,冻干曲线为预冻温度-45℃,保温4 h,第1次干燥温度-30℃,保温30 h,第2次干燥25℃,保温10 h;考察脂质体形态、粒径分布、Zeta电位和稳定性,过滤.超滤离心法测定脂质体的包封率;以多西他赛注射液为对照,比较了体外释放、血浆蛋白结合率及其体外细胞毒作用.结果:多西他赛脂质体的平均粒径为(85.3 4±4.8)nm,Zeta电位-(51.5±2.1)mV,包封率为(99.89±0.06)%,5%葡萄糖注射液稀释后8 h内稳定;在1 mol/L水杨酸钠-磷酸盐缓冲液中24 h累积释放约85%,血浆的存在使释放所有减少;多西他赛脂质体对肿瘤细胞(HepG2、BXPC-3、SK-OV-3)的IC50均较注射液低.结论:制得的注射用多西他赛脂质体载药量和包封率均较高,粒径均匀,稳定性良好,体外细胞毒作用较注射液强.

吡咯类HMG-CoA还原酶抑制剂的合成及生物活性

目的:设计并合成吡咯类HMG-CoA还原酶抑制剂并测定其对HMG-CoA还原酶的抑制活性.方法:根据他汀类药物的构效关系,设计了一类(3R,5R)-7-[2-(4-氟苯基)-3-芳基-4-芳氨甲酰基-5-环丙基-1-吡咯基]-3,5-二羟基庚酸钠化合物(Ia～lm),通过测定烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的降低速率,得到化合物对HMG-CoA还原酶的抑制活性.结果与结论:设计并合成了未见文献报道的HMG-CoA还原酶抑制剂13个,目标化合物结构经IR、<'1>H NMR和HR-ESIMS确证.对所有化合物进行了HMG-CoA还原酶抑制活性测试,有5个化合物有抑制活性,其中化合物Ie的抑制活性与阳性对照药阿托伐他汀相当.

多药耐药肝癌细胞模型的建立

目的:构建人多药耐药基因(MDR1)的肝脏特异性真核表达栽体,转染HepG2细胞,建立多药耐药肝癌模型.方法:将小鼠清蛋白启动子序列(pALB)克隆到已成功构建的MDR1基因真核表达载体pcDNA-MDR1中,替换其中的CMV启动子序列,构建MDR1肝脏特异性真核表达载体pcDNA-ALBMDR1,利用KeyGenTransⅢ阳离子转染试剂转染HepG2细胞,用G418筛选稳定表达MDR1基因的细胞,并用RT-PCR方法检测MDR1基因的表达,通过测定细胞对阿霉素的耐受性以及阿霉素与多药耐药逆转剂维拉帕米联合用药情况确定MDR1基因在肝脏细胞中的功能.结果:酶切鉴定和测序结果证明构建的重组表达载体pcDNA-ALBMDR1序列正确.RT-PCR分析以及荧光显微镜观察结果表明:该表达载体已在HepG2细胞中有效转录并稳定表达.MTT药敏实验结果显示:转染pcDNA-ALBMDR1质粒的HepG2细胞对阿霉素的耐药性有显著提高,同时维拉帕米能够显著提高转染细胞对阿霉素的敏感性.结论:成功构建了稳定表达MDR1并具有多药耐药特性的肝癌细胞模型,该模型的建立将有助于多药耐药逆转剂的筛选与研究.

黄芩素固体分散体的制备及大鼠体内生物利用度

目的:制备黄芩素-PVP K30固体分散体,考察其物相及大鼠体内生物利用度.方法:采用溶剂法制备黄芩素-PVP K30固体分散体:利用溶出度法、扫描电子显微镜、差示扫描量热、粉末x射线衍射、红外光谱等方法分析药物在载体中的存在状态;采用HPLC法测定大鼠血浆中药物浓度,与原料药比较,对黄芩素-PVP K30固体分散体进行大鼠体内生物利用度评价.结果:物相分析结果表明,当药物与载体比例为1:2时,固体分散体中黄芩素以非结晶态无定形存在,且与载体有氢键作用.大鼠体内血药浓度-时间曲线表明,与原料药相比,黄芩素固体分散体达峰时间(tmax)缩短,达峰浓度(Cmax)提高,相对生物利用度为164%.结论:采用溶剂法制备黄芩素-PVP K30固体分散体,黄芩素以无定形存在,其体外溶出速率和大鼠体内吸收均有显著性提高.

硝苯地平延迟起释型缓释片的制备及体外释放

目的:制备符合时辰药理学的硝苯地平缓释片.方法:用粉末直接压片法制备片芯,干压包衣技术制备缓释片.正交试验优选处方,对优处方进行体外释放度验证.结果:脉冲缓释片延迟时间约5～6 h,释放机制以骨架溶蚀起主导作用.结论:硝苯地平延迟起释型缓释片处方设计和工艺方法可行,质量稳定.

替米沙坦在胰岛素抵抗大鼠体内的药动学-药效学结合模型

目的:建立替米沙坦在胰岛素抵抗大鼠体内的药动学一药效学(PK-PD)结合模型,揭示替米沙坦改善大鼠胰岛素抵抗的时程关系.方法:正常SD大鼠高脂高糖饲料喂养,形成大鼠胰岛素抵抗模型.然后随机分为替米沙坦4 ms/(kg·day)、8 mS/(kg·day)组和对照组,连续45 d灌胃给予替米沙坦.在给药后不同时间点取血测定血药浓度.同时在给药前和给药后第9,18,27,36,45天早上空腹情况下采血测定血糖浓度和胰岛素浓度,计算胰岛素敏感性指数作为定量药效的指标.药物的体内暴露程度和胰岛素敏感指数的关系根据PK-PD结合模型估算.结果:胰岛素抵抗大鼠连续给予替米沙坦后,替米沙坦在体内无明显蓄积现象,首次给药和末次给药的主要药动学参数均无明显变化.胰岛素抵抗大鼠长期连续给药后,大鼠胰岛素浓度有较大幅度的降低而血糖浓度变化不大,胰岛素敏感性指数在给药后有显著性提高.替米沙坦4 mg/(kg·day)组AUC50为2 886.0 ng·day/mL,8 ms/(kg·day)组AUC50为3 218.9 ng·day/mL.结论:替米沙坦对胰岛素抵抗的改善作用是一个长期而缓慢的过程,其改善胰岛素抵抗的作用与AUG间有良好的相关性.

山里红叶多元酚类成分对大鼠中性粒细胞呼吸爆发的抑制作用

目的:比较山里红(Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.)叶中多元酚类成分对大鼠中性粒细胞呼吸爆发的抑制活性.方法:以佛波豆蔻酸乙酯(PMA)为刺激剂,鲁米诺为发光剂,通过化学发光法比较山里红叶中11种主要多元酚类成分对大鼠中性粒细胞呼吸爆发的抑制作用.结果:11种多元酚类成分对大鼠中性粒细胞呼吸爆发表现出不同的抑制活性.黄酮类成分活性强,其次是绿原酸,表儿茶素活性弱.黄酮类成分既可抑制大鼠中性粒细胞呼吸爆发,又可清除呼吸爆发后产生的自由基;而绿原酸则对呼吸爆发的抑制作用较弱,主要是直接清除呼吸爆发产生的氧自由基;表儿荼素则只能清除呼吸爆发产生的自由基,对呼吸爆发本身没有抑制作用.结论:山里红叶中多元酚类成分对大鼠中性粒细胞呼吸爆发具有明显的抑制活性,其中主要活性成分为黄酮类化合物.

一氧化氮供体型3-丁基苯酞衍生物的合成及抗血小板活性

目的:研究一氧化氮(NO)供体型3-丁基苯酞衍生物的合成和生物活性,寻找新型抗脑缺血药物.方法:使用不同的连接基团将3-丁基苯酞的开环衍生物2-(1-乙酰氧戊基)苯甲酸与一氧化氮供体连接,合成了目标化合物6a-6c、10a-10c和12a-12c,同时测定它们在体外释放NO的量.结果:合成了9个未见文献报道的目标化合物,其结构均经IR、1H NMR、MS和元素分析确证.它们均有一定的抗血小板活性且有不同程度的NO释放,其中化合物10b活性强,明显优于阿司匹林和3-丁基苯酞(P＜0.01),其NO大释放量为0.05 μmol/L,而活性弱的化合物6c仅为0.01 μmol/L.结论:NO供体型3-丁基苯酞衍生物具有较强抗血小板活性,其作用机制可能与NO释放有关.

荆芥内酯聚乳酸乙醇酸纳米粒的抗炎、镇痛及解热作用

目的:研究荆芥内酯聚乳酸乙醇酸纳米粒(SCH-PLGA-NP)的初步药效学作用.方法:用二甲苯致小鼠耳廓肿胀及腹腔注射0.6%醋酸致小鼠腹腔染料渗出的方法制作急性炎症模型,观察SCH-PLGA-NP对急性炎症的影响;用醋酸致痛扭体法及热板法观察镇痛作用;用10%的干酵母混悬液致大鼠发热模型,观察SCH-PLGA-NP对酵母致大鼠发热体温的影响.结果:SCH-PLGA-NP对小鼠耳廓肿胀度和腹腔毛细血管通透性的增加有明显的抑制作用;SCH-PLGA-NP能明显减少小鼠的扭体反应数;在给药后(热板法)15,30,60 min均能显著延长小鼠疼痛反应的潜伏期,痛阙值提高;SCH-PLGA-NP对酵母致大鼠发热有明显的降低作用.结论:SCH-PLGA-NP具有较好的抗急性炎症、镇痛和解热作用,且抗炎、镇痛和解热效果明显优于游离荆芥内酯.

果糖二磷酸锶对糖皮质激素诱导的

目的:研究果糖二磷酸锶盐(Sr-FDP)对糖皮质激素诱导的大鼠继发性骨质疏松症的治疗作用.方法:应用肌肉注射地塞米松方法,建立大鼠继发性骨质疏松模型.口服不同剂量的Sr-FDP治疗8周,观察骨密度、骨生物力学、骨形态计量及骨代谢相关血清生化指标,综合评价Sr-FDP对糖皮质激素诱发的骨质疏松症的治疗效果.结果:肌肉注射地塞米松大鼠的骨密度、骨生物力学较正常组显著性下降,表明诱导大鼠骨质疏松模型成立.不同剂量Sr-FDP治疗均能显著增加模型大鼠的股骨与腰椎的骨密度、股骨干重与灰重,提高股骨和腰椎的骨强度,提高腰椎的骨小梁面积百分比及矿化沉积率.同时Sr-FDP对糖皮质激素引起的血清碱性磷酸酶及血抗酒石酸酸性磷酸酶5b活性的升高均有拮抗作用.结论:Sr-FDP能够促进骨形成,抑制骨吸收,对糖皮质激素诱导的大鼠骨质疏松症有明显的治疗作用.

荔枝核提取物体外抗病毒活性及其机制研究

目的:研究荔枝核提取物(LSE)的体外抗病毒活性,并初步研究其抗病毒的作用机制.方法:采用细胞病变效应(CPE)减少法和MTY法检测LSE对柯萨奇B3病毒(Cox B3)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)的体外抗病毒活性,并通过观察直接杀病毒作用、对宿主细胞的保护作用、抑制病毒吸附作用以及在病毒感染后不同时间加入实验,对LSE抑制HSV-1的作用机制进行探讨.结果:LSE有一定的细胞毒性,它不能抑制Cox B3在宿主细胞内的增殖,但对RSV、HSV-1和HSV-2表现出明显的浓度依赖性抗病毒活性,其IC<,50>值分别为32.3,27.9和20.4μg/mL.该提取物预培养Vero细胞后不能保护细胞免受HSV-1感染,但它对HSV-1有直接的灭活作用.LSE可影响HSV-1对Vero细胞的吸附,当浓度为31.3μg/mL时对病毒吸附的抑制率为51%.ISE对HSV-1在细胞内的增殖表现出很强的抑制活性.结论:LSE具有较强的体外抗RSV和HSV活性,它对HSV的抑制作用可能通过多种方式和途径实现.

GLP-1受体激动剂及DPP-IV抑制剂的研究进展

对糖尿病治疗药胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂和二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制剂的研究进展进行了综述.介绍了GLP-1的血糖调控机制,还对GLP-1受体激动剂(如Exendin-4,Exentide LAR,Liraglutide,CJC-1131,非肽类GLP-1受体激动剂)和DPP-IV抑制剂(如Sitagtiptin,Vildagliptin,Saxagliptin,Alogliptin)进行了详细的介绍,为2型糖尿病治疗药物的研发提供参考.

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微生物转化法制备脱水穿心莲内酯

目的:用微生物转化法制备脱水穿心莲内酯.方法:以穿心莲内酯为底物筛选菌株,利用筛选到的茵种对穿心莲内酯进行微生物转化研究.结果:从土壤中分离到一株可使穿心莲内酯转化成脱水穿心莲内酯的菌种,收率为70.1%,该茵种经鉴定为变形斑沙雷菌(Serratia proteamaculans).结论:变形斑沙雷菌对穿心莲内酯有较强的转化活性.