腺病毒介导的全抗体基因治疗卵巢癌的实验研究
摘要： 目的探讨应用基因治疗方法表达完全抗体的可行性及其对肿瘤的治疗作用.方法构建携带曲妥珠单抗[Trastuzumab, 商品名:赫赛汀(Herceptin)]全抗体基因的腺病毒载体,利用重组技术获得增殖缺陷型腺病毒Ad-SG-Her,用Ad-SG-Her转染人正常肝细胞株L-02,判断体外肝细胞是否可以表达Herceptin抗体;将卵巢癌SK-OV-3细胞接种于裸鼠皮下,3 d后把40只成瘤裸鼠随机分为3个治疗组和1个对照组,每组各10只.治疗组裸鼠尾静脉分别注射不同滴度的Ad-SG-Her:治疗A组注射2×109空斑形成单位(pfu)/只,B组注射1×109pfu/只,C组注射5×108pfu/只.用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别在体外转染Ad-SG-Her后的第3天和第7天,以及裸鼠接受Ad-SG-Her治疗后的第3、7、10、14、21、28、35天检测Herceptin的表达量;通过间接免疫荧光法(IFA)和Western印迹法分别检测血清中的抗体与Her2过表达卵巢癌细胞株SK-OV-3结合的特异性以及所表达全长抗体的完整性;同时观察不同滴度的Ad-SG-Her对荷SK-OV-3实体瘤裸鼠的治疗作用.结果构建的带有全长Herceptin基因的重组腺病毒Ad-SG-Her,在体外及体内均能高效表达人源化抗体Herceptin.Western印迹显示:该人源化抗体与商品化Herceptin具有相同大小的轻链与重链,且浓度匹配,这表明它能够形成完整的抗体.IFA和ELISA可检测到表达的抗体能特异性地与细胞表面的Her2结合.Ad-SG-Her在裸鼠治疗的第3天开始表达抗体,7～10 d达高峰,持续表达约4周左右.治疗组A与B、C组之间的抗体表达量差异有显著意义(均P＜0.01),而B、C组之间差异无显著意义(P＞0.05).在治疗后的第3、7、10、14、21、28、35天,裸鼠体内抗体的表达量差异均有显著意义(P＜0.01).各组抗体表达量不同,表现的抗肿瘤的疗效差异也有显著意义(P＜0.01).从治疗后的第3天开始,裸鼠肿瘤大小在治疗A组与B、C组及对照组之间差异有显著意义(均P＜0.05),治疗A组对肿瘤细胞增殖的抑制作用明显,在治疗后观察的35 d内几乎看不到肿瘤的生长;治疗C组的肿瘤增长几乎没有受到影响(P＞0.05);治疗B组肿瘤增长受到一定的抑制,但与C组及对照组之间的差异无显著意义(P＞0.05).裸鼠体内抗体的表达及抗肿瘤疗效与注射的病毒剂量呈现明显的量效关系.结论腺病毒携带的Herceptin全抗体基因能够在动物体内高效表达与商品化Herceptin生物学活性近似的人源化全长抗体,且能持续较长时间的稳定表达,这表明应用全抗体基因治疗是一种可行的肿瘤治疗新方案.
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微粒联合重组人p53腺病毒注射液栓塞治疗晚期肝癌疗效观察
目的 应用直径350～560 μm明胶海绵微粒(GSMs)联合重组人p53腺病毒注射液(Gendicine)经导管肝动脉栓塞(TAE)治疗晚期肝癌的安全性及疗效.方法 收集2009年5月至2012年6月大连大学附属中山医院介入治疗科应用上述方法治疗晚期肝癌患者24例,均为男性,术后应用实体瘤疗效评价标准(mRECIST)及不良反应评价标准(CTCAE)评价临床疗效及安全性.采用SPSS 17.0统计软件进行回顾性分析,包括计数资料采用χ2检验,生存率采用Kaplan-Meier统计方法等.结果 24例患者共行73次(平均3.0次)TAE.中位随访时间14个月(6～42个月),术后1、6、12个月完全缓解率(CR)分别为25.0%、33.3%和37.5%,有效率(OR)分别为87.5%、75.0%和75.0%,6个月及1年生存率分别为100%和91.7%.全组病例均未见急性肝衰竭、肝脓肿、肺栓塞及胆囊炎等严重并发症.结论 应用350～560 μm明胶海绵微粒联合Gendicine TAE治疗晚期肝癌具有良好的安全性和疗效,为晚期肝癌患者提供了一种良好的治疗选择.
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副蛋白血症相关周围神经病20例临床、电生理特点分析
目的 总结副蛋白血症相关周围神经病临床及电生理特点,加深对此病的认识.方法 回顾性分析2008年3月至2012年7月在天坛医院神经内科就诊的明确诊断的副蛋白血症相关周围神经病患者的临床、实验室及神经电生理检查资料,并在不同亚型之间比较.结果 20例患者入组本研究.男12例,女8例,平均年龄52岁.病程2个月至3年,平均病程14个月.其中IgM型2例(10％)、IgG型10例(50％)、IgA型7例(35％),λ轻链1例(5％).本组患者以感觉性、轴索性、多发性神经病为主要表现,远端受累为主.其中IgA型及IgG型均以感觉性、轴索性、多发性神经病为主要表现.结论 本组患者以感觉性、轴索性、远端对称性多发性神经病为主要表现.临床表现异质性明显,即使不以感觉性、脱髓鞘性损害为主要表现,亦应考虑此病因可能.在周围神经病病因筛查中,应常规筛查副蛋白血症.
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肥胖和2型糖尿病患者脂肪组织网膜素的mRNA表达
目的 研究不同糖调节和体重人群脂肪组织网膜素表达差异及其与血清网膜素、体脂参数、糖脂代谢、胰岛素抵抗等的相关性.方法 36例外科择期手术患者分为正常糖调节正常体重(NGR-NW)组,正常糖调节超重/肥胖(NGR-OW/OB)组和2型糖尿病超重/肥胖(T2DM-OW/OB)组.采用实时定量PCR方法 测定腹部皮下和网膜脂肪组织网膜素mRNA水平.用ELISA法检测空腹血清网膜素水平,同时检测空腹血糖(FaG)、口服葡萄糖耐量试验2 h血糖(2h PG)、糖化血红蛋白(HbA1C)、血脂各项指标及-腹胰岛素(FINS),计算体重指数(BMI)和腰臀比值(WHR),并以稳态模型计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果 网膜脂肪组织网膜素mRNA水平显著高于皮下脂防组织[1.52±0.32比0.019±0.006,P<0.01(均以网膜素/β-肌动蛋白来定量)];男性和女性网膜素mRNA水平无差异(1.46±0.31比1.58±0.29,P=0.416);NGR-OW/OB组网膜素mRNA水平显著低于NGR-NW组(1.18±0.29比1.52±0.32,P<0.05),T2DM-OW/OB组网膜素mRNA水平显著低于NGR-NW组和NGR-OW/OB组(分别为0.98±0.37比1.52±0.32和0.98±0.37比1.18±0.29,均P<0.05);相关分析显示,网膜脂肪组织网膜素mRNA水平与HOMA-IR、腰围、WHR、甘油三酯、BMI、FINS呈显著负相关(r=-0.196～-0.283,均P<0.05),与血清网膜素、HDL-C呈显著正相关(r=0.588、0.242,均P<0.05);多元逐步回归分析发现,血清网膜素、HOMA-IR和腰围是网膜素mRNA水平的独立相关因素(相关系数r2=0.145、0.190、0.224,均P<0.05).结论 网膜素在不同个体的差异表达可能参与构成胰岛素抵抗综合征的病理生理基础.
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环氧合酶-2/CNPase对海洛因海绵状白质脑病中少突胶质细胞凋亡的作用
目的 探讨环氧合酶(COX)-2、2',3'-环腺苷酸-3'-磷酸二酯酶(CNPase)对白质少突胶质细胞凋亡调控及阐明海洛因海绵状白质脑病(HSLE)的发病机制.方法 对4例HSLE和5例正常对照的小脑、额叶和胼胝体标本,进行HE染色,KB染色,TUNEL染色,MBP、COX-2、CNPase和半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)-3免疫组化染色,分析脱髓鞘的病变,比较TUNEL、caspase-3、COX-2和CNPase阳性细胞率,并进行非参数统计分析.结果 HSLE组广泛脱髓鞘改变,髓鞘板层间松解,形成空泡样变.KB染色对照组额叶和小脑的白质/灰质灰度比值明显低于HSLE组(t值分别为26.146和35.001,P=0.000).在额叶、小脑和胼胝体白质,HSLE组的少突胶质细胞凋亡率高于对照组(Z值分别为2.245,4.273和4.250;P=0.000);COX-2阳性细胞数高于对照组(Z值分别为-4.201,-4.177和-4.211,P=0.01).在额叶和胼胝体白质,HSLE组CNPase表达较对照减少(Z值分别为-2.315和-2.578,P值分别为0.021和0.010).caspase-3的表达与COX-2呈正相关(Pearson相关系数r=0.858,P=0.003),与CNPase呈负相关(Pearson相关系数r=0.802,P=0.009).结论 HSLE病变区存在广泛脱髓鞘改变,少突胶质细胞凋亡是HSLE的发病原因之一.COX-2/CNPase表达的改变可能参与少突胶质细胞凋亡.
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创伤性脑浅表大静脉梗死的相关因素分析
目的 探讨外伤后脑浅表大静脉梗死的相关因素和治疗措施.方法 从2003年1月至2008年10月对74例脑浅表大静脉损伤按术中发现分为3组:1组:脑浅表大静脉损伤合并局部脑挫伤和脑内血肿、急性硬模下血肿.2组:脑浅表大静脉损伤合并局部脑挫伤和脑内血肿、急性硬模下血肿、损伤区颅骨骨折.3组脑浅表大静脉损伤合并损伤区颅骨骨折、急性硬模下血肿,无明显脑挫伤、脑内血肿,并按性别、年龄、术前GCS评分、脑疝情况分组.结果 1组28例,2组39例,3组7例,各组的损伤静脉不同,差异有统计学意义(P<0.01).1组和2组有37例患者合并有不同程度的脑梗死,3组有2例发生脑梗死.脑梗死与性别、年龄、术前GCS评分、脑疝均无关.结论 脑浅表大静脉损伤主要南局部颅骨骨折或对冲伤、剪切伤所致,合并有脑挫伤时脑梗死多见,术中应注意保护受损腩浅表大静脉及周围的静脉网,及时清除颅内血肿,必要时大骨瓣充分减压,降低颅高压,术后注意稀释血液,防止受损静脉栓塞.
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肾透明细胞癌中非转移性黑色素瘤糖蛋白B的表达及临床价值
目的 探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B(Gpnmb)在肾透明细胞癌中表达及其与预后的相关性.方法 应用免疫组织化学方法检测2009年3月至2012年3月北京大学人民医院诊治的12例肾透明细胞癌患者原发灶组织及对应转移灶中Gpnmb表达的差异.同时检测43例不同阶段肾透明细胞癌患者原发灶中Gpnmb的相对表达量,分析其与肾癌患者年龄、性别、临床分期及病理分级的相关性,并应用Kaplan-Meier法分析Gpnmb表达与肾透明细胞癌患者预后的相关性.结果 Gpnmb在肾透明细胞癌原发灶中的表达水平低于转移灶[(3.14±2.38)比(6.36±4.01)分,P=0.036].肾透明细胞癌患者原发灶中Gpnmb的高表达不受年龄、性别、临床分期和病理分级影响(均P ＞0.05).Kaplan-Meier分析显示Gpnmb高表达组生存期下降(P=0.020),比例风险模型显示Gpnmb高表达的患者生存的相对危险度是低表达患者的7.719倍(P =0.049).结论 肾透明细胞癌患者高表达Gpnmb提示预后不良.
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从创伤性离断肢体切取游离皮瓣修复前臂残端软组织缺损
目的 探讨从创伤性离断肢体切取游离皮瓣修复前臂残端软组织缺损的临床效果.方法 应用这种技术修复5例(男4例,女1例)前臂截肢残端软组织缺损创面,年龄22～43 岁,平均32岁.右侧3例,左侧2例.皮瓣面积为8 cm×9 cm～9 cm×12 cm.结果1例术后发生表浅感染,经更换敷料逐渐愈合,皮瓣全部成活,所有患者随访1.5～3.5 年,平均2.6年.受区外形和肘关节功能恢复较好,获得了满意的治疗效果.结论 废弃肢皮瓣具有血管解剖恒定、血管蒂长和切取容易等优点,该手术可保留创伤性截肢残端有功能的长度或肘关节功能.
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不同手术方式治疗剖宫产瘢痕妊娠术后人绒毛膜促性腺激素的变化趋势
目的 探讨不同手术方式治疗剖宫产瘢痕妊娠的临床疗效、术后人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-hCG)下降趋势及不同治疗方法的适应证.方法 通过前瞻性队列研究,对2013年6月至2014年12月在北京妇产医院计划生育科,采用不同手术方式治疗的120例剖宫产瘢痕妊娠患者的临床资料进行分析,120例中7例行B超下清宫术,63例行子宫动脉栓塞术(UAE)+宫腔镜下妊娠胚物清除术,41例行UAE+B超或腹腔镜监测下宫腔镜下妊娠胚物清除术,9例行UAE+宫腹腔镜联合瘢痕妊娠切除及子宫修补术,分析不同手术方式的临床疗效及术后不同时期血hCG的下降趋势.结果 (1)剖宫产瘢痕妊娠患者不同手术方式治疗术后48 h、术后1周及术后2周血β-hCG下降百分比的平均值分别为(84.5±9.7)％、(97.7±3.2)％及(99.6±1.2)％,术后血β-hCG水平降至正常时间为(22.4 ±6.7)d.(2)不同手术方式治疗后患者出血量及住院时间差异有统计学意义.(3)血β-hCG下降百分比在不同手术方法与术后恢复时间的交互作用分析差异有统计学意义(P＜0.01),B超下清宫术后血β-hCG下降百分比低于其他组(P＜0.05).结论 剖宫产瘢痕妊娠患者血β-hCG水平在术后3周左右降至正常水平;对于剖宫产瘢痕妊娠患者手术方式的选择,应依据胎囊着床瘢痕部位的程度、胎囊与子宫浆膜层薄处肌层厚度、局部血流情况、血β-hCG水平、胎囊大小、突向膀胱情况及患者生育要求等来决定.
关键词： 异位妊娠/剖宫产瘢痕妊娠 妇科外科手术 人绒毛膜促性腺激素 -
主动脉瘤手术中脑氧饱和度监测的临床应用
目的 探讨主动脉瘤手术患者术中脑氧饱和度的变化与脑部并发症发生的相关性,评价两种脑保护方法的效果.方法 30例主动脉瘤手术患者中主动脉夹层Stanford A型24例,StanfordB型4例,升主动脉及主动脉弓部瘤1例,假性胸腹主动脉瘤1例.在深低温停循环(DHCA)合并选择性顺行脑灌注(ASCP)下行主动脉弓部替换22例(ASCP组);在单纯DHCA下行胸降主动脉替换8例(DHCA组).于术中应用近红外光谱分析技术(NIRS)进行持续脑氧饱和度(TOI)监测.结果 出现脑部并发症患者8例.并发症组与非并发症组术中转机前TOI分别为70%±5%和69%±8%,分别降至58%±8%和55%±8%,两组间差异无统计学意义(P＞0.05).停循环期间DHCA组TOI从77%±6%降至52%±7%,ASCP组TOI从75%±6%降至71%±7%;两组间TOI的下降程度差异有统计学意义(P＜0.05).结论 轻度的TOI降低与脑部并发症的发生无明显相关性.DHCA合并ASCP与单纯的DHCA相比,具有更好的脑保护效果.
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双极人工股骨头置换术后脱位的影响因素
目的 探讨双极人工股骨头置换术后脱位的影响因素.方法 回顾性分析2001年10月至2015年10月北京协和医院骨科行双极人工股骨头置换术病例374例资料,总结其中脱位患者的临床资料,分析其脱位原因.结果 374例行人工股骨头置换术的患者中术后发生脱位的共12例,10例患者经过手法可复位,其余2例患者需切开复位.脱位组中大部分患者合并有老年痴呆症、帕金森病、脑梗后遗症等神经精神疾病,这些合并症引起的体位不当等因素是导致脱位的主要原因.结论 合并神经精神疾病是导致人工股骨头置换术后脱位的重要因素.
