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煤焦沥青提取物对BEAS-2B细胞Keap1-Nrf2/ARE通路的作用机制

倪静;秦丽娟;玉崧成;吴拥军;吴逸明

摘要: 目的 研究煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞Nrf2、Keap1、NQO1的基因及其蛋白表达的影响,以探讨煤焦沥青烟提取物在造成细胞氧化损伤过程中Nrf2-Keap1/ARE通路的作用机制.方法 设立未处理对照组、0.1%DMSO溶剂对照组、5μg/ml B(a)P阳性对照组、6μmol/L全反式维甲酸组、6μmol/L全反式维甲酸预处理0.5h后5 μg/ml CTP染毒组和CTP染毒组(1、5、10和20 μg/ml),染毒3、6、12和24 h后提取总RNA;RT-PCR检测Nrf2、Keap1、NQO1 mRNA的相对表达量;Western blot测定Nrf2、Keap1、NQO1蛋白的相对表达量.结果 不同CTP染毒剂量作用后各个基因mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05),而不同时间点相对表达量差异有统计学意义(P<0.05).Western blot结果显示,随着CTP烟提取物染毒浓度的增加,Keap1蛋白无明显变化,NQO1蛋白表达量逐渐上升;Nrf2蛋白在5 μg/ml染毒浓度时表达高,在5μg/ml CTP染毒浓度作用下,BEAS-2B细胞Nrf2蛋白表达量随时间逐渐升高,在染毒6h后达到高,之后表达量又呈下降趋势.结论 煤焦沥青烟提取物作用于BEAS-2B细胞后,代谢酶NQO1表达上调,推测Keap1 -Nrf2/ARE通路可能通过上调细胞保护性基因NQO1的表达而对抗煤焦沥青毒性作用,降低细胞氧化损伤.

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