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黑果枸杞原花青素酶法提取工艺优化及对线虫毒性和寿命影响机制研究
目的 对黑果枸杞原花青素(Lycium ruthenicum Murray,简称原花青素)提取工艺进行了酶法优化,并以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,简称线虫)作为模式生物,研究黑果枸杞原花青素对线虫的急性毒性效应,以及延长寿命的功效及其初步机制,为原花青素用于功能性保健品开发利用奠定实验基础.方法 采用纤维素酶法结合正交分析优化黑果枸杞原花青素的提取工艺;采用线虫急性毒性试验、寿命实验及氧化应激和热应激实验研究其毒性、寿命影响及其可能机制.结果 正交分析表明,黑果枸杞原花青素高得率为9.47 mg/g时的佳提取工艺条件为酶解液pH值为3.4,酶解温度30℃,酶解时间30 min,酶浓度4％.急性毒性实验结果表明,浓度为50和300 μg/ml的原花青素作用24 h对线虫均无急性毒性效应.线虫寿命实验表明,持续饲喂50 μg/ml原花青素的实验组,线虫平均寿命与对照组相比延长了22.88％(P＜0.01).氧化应激与热应激条件下,持续饲喂50 μg/ml原花青素的实验组与对照组相比,平均寿命分别延长了44.28％ (P ＜0.05)与24.46％(P＜0.01).结论 酶法提取工艺优化后,黑果枸杞原花青素的得率为9.47 mg/g.毒性和功效实验结果表明,黑果枸杞原花青素(浓度≤300μg/ml)对线虫没有急性毒性作用,原花青素(50 μg/ml)可延长线虫寿命,其功效可能是通过提高线虫的氧化应激及热应激能力而实现的.
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黑果枸杞中季铵型生物碱含量测定及含氮类化合物成分定性分析
目的 建立黑果枸杞中季铵型生物碱含量检测的紫外-可见分光光度测定法,利用液相色谱-质谱联用技术对黑果枸杞中含氮化合物进行成分定性分析.方法 采用紫外-分光光度仪,于524 nm波长处,以雷氏铵盐沉淀法测定总季铵型生物碱含量;色谱柱为BOS Hypersil C18(2.1 mm×150 mm,2.4μm),流动相A为0.1％甲酸水溶液,B为乙腈,梯度洗脱,流速0.3 ml/min,柱温:35℃,电喷雾电离(electrospray ionization,ESI)源正离子检测条件下对黑果枸杞中含氮化合物进行成分分析.结果 甜菜碱作为对照品,取样量在981～4906μg之间,吸光度与甜菜碱取样量之间线性关系良好,Y=0.0001X-0.0055,r=0.9993.平均回收率为98.53％,RSD为1.19％(n=6);采用液相色谱-质谱联用技术分析出12种含氮化合物,其中,N(1)-二氢咖啡酰-N(12)-咖啡酰精胺和对羟基肉桂酰-二氢咖啡酰亚精胺属于首次于黑果枸杞中发现成分.结论 本文建立的季铵型生物碱含量测定方法简单、易操作、重复性良好,可用于黑果枸杞中季铵型生物碱含量测定;对黑果枸杞中含氮化合物的定性分析可为其质量控制提供参考.
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黑果枸杞胶囊对青少年轻中度近视控制的临床观察
目的 观察黑果枸杞胶囊对青少年轻中度近视进展控制的临床疗效.方法 采用随机、对照、双盲的研究方法.收集2012年1月-2013年1月于伊犁州中医医院就诊的18岁以下(6～18岁) (-50度～-600度)经确诊的近视青少年256例(501眼),随机分为治疗组和对照组.治疗组予以口服黑果枸杞胶囊每日1粒(含花青素300mg),对照组则每日口服安慰剂(淀粉3 00 mg).6个月后观察视力、屈光度及眼部症状的变化,进行统计学分析.结果 与对照组比较,治疗组视力、屈光度改善明显,可有效控制青少年轻中度近视的进展,有效率达81.69％;减少屈光度数有效率达72.87％.结论 黑果枸杞胶囊能有效控制青少年轻中度近视的发展,并改善其远视力,减少青少年轻中度近视的屈光度数.
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黑果枸杞色素的抗氧化活性研究
目的:研究黑果枸杞色素的抗氧化活性.方法:通过测定黑果枸杞色素的还原能力和对化学模拟体系中二苯代苦味酰基(DPPH·)清除能力,以及对小鼠红细胞溶血性、小鼠血清抗活性氧能力、小鼠肝组织脂质过氧化产物MDA生成的影响和小鼠肝线粒体肿胀度的影响,探讨了黑果枸杞色素的体外抗氧化活性.结果:黑果枸杞色素在化学本质上具有一定的抗氧化能力,有很强的DPPH·清除活性,IC50达到0.164mg·mL-1;能显著的抑制小鼠红细胞溶血,IC50为0.112mg·mL-1;能增强小鼠血清抗活性氧能力,抑制小鼠肝组织脂质过氧化产物MDA生成和小鼠肝线粒体肿胀度,并显示出一定的量效关系.结论:黑果枸杞色素在一定浓度范围内具有抗氧化活性.
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外源钙对盐胁迫下黑果枸杞种子萌发和幼苗生理特性的影响
目的:通过对黑果枸杞种子萌发及幼苗生理特性的影响,寻找提高黑果枸杞种子及幼苗在盐胁迫下抗性能力的途径.方法:测定盐胁迫下黑果枸杞种子在不同浓度的外源CaCl2处理后,发芽率(Gr)、发芽势(Gv)、发芽指数(Gi)、活力指数(Vi)和相对盐害率的变化,并对黑果枸杞幼苗的含水量、叶绿素量、可溶性蛋白质量、相对电导率、丙二醛量(MDA)和过氧化物酶(POD)的活性进行了测定.结果:低浓度的NaCl处理,对黑果枸杞种子的萌发具有促进作用,高浓度的处理则有抑制作用.经不同浓度的CaCl2处理后,萌发指标均有所升高.随着NaCl处理浓度的增加,幼苗含水量、叶绿素量逐渐减少,丙二醛(MDA)、相对电导率呈增加趋势,可溶性蛋白质量和POD活性均不同程度的表现为先上升后下降的趋势.在外源CaCl2处理后,幼苗含水量、叶绿素量下降幅度变小,丙二醛(MDA)、相对电导率的上升幅度变小,POD活性的下降幅度变小.结论:CaCl2能够有效地缓解盐胁迫对黑果枸杞种子及幼苗产生的伤害,提高种子及幼苗的抗盐能力.
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不同干燥方法对黑果枸杞中活性成分含量及其抗氧化活性的影响
比较不同干燥方法对黑果枸杞的外观性状、口感、活性成分含量及其抗氧化活性的影响,指导黑果枸杞生产实践.分别将冷冻干燥、低温干燥和自然烘干的黑果枸杞用福林酚比色法、紫外分光光度法、消光系数法和DPPH法、FRAP法测定总多酚、原花青素、花色苷含量及抗氧化活性.结果表明,干燥方法对黑果枸杞的性状、口感、活性成分含量及抗氧化活性均产生一定程度影响.冷冻干燥后黑果枸杞外观性状及口感均佳,水分含量低,总多酚、原花青素、花色苷含量低于自然晾干者,但其清除DPPH自由基能力强;自然晾干者外观形状及口感较差,水分含量高,但其3种活性成分含量高,FRAP法测得的抗氧化活性强.因此应综合考虑性状、口感、抗氧化活性及生产成本选择黑果枸杞的干燥方法.
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黑果枸杞花色苷对小鼠动脉粥样硬化的影响
目的:研究黑果枸杞花色苷对小鼠动脉粥样硬化(AS)的影响.方法:以正常小鼠作空白对照,将高脂血症模型小鼠分为高脂模型组、黑果枸杞花色苷低、中、高剂量组和辛伐他汀药物对照组,进行不同灌胃处理,酶法检测各组小鼠血脂指标；苏木素伊红(HE)染色观察主动脉、心脏及肝脏组织形态学变化,并对肝脏相关指标进行测定.结果:与高脂组对照,花色苷各剂量组小鼠血清的总胆同醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和动脉粥样硬化指数(AI)水平均显著降低(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平有高于模型组的趋势.肝脏的总抗氧化能力(T-AOC),谷胱甘肽过氧化物酶( GSH - PX)、脂蛋白酯酶(LPL)均显著升高(P＜0.05),丙二醛(MDA)极显著下降(P＜0.01)；花色苷各剂量组主动脉斑块面积占总面积的百分比显著低于模型组(P＜0.05)；主动脉、心脏和肝脏的病变程度明显轻于高脂组,其中,中剂量组与辛伐他汀组类似.结论:黑果枸杞花色苷可以干预小鼠AS的形成,同时降低小鼠血脂水平.
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黑河流域中下游黑果枸杞资源调查及保护利用
掌握黑果枸杞在黑河流域中下游的资源种类及分布范围,为合理开发使用上述地区的黑果枸杞提供科学依据.根据黑河流域黑果枸杞的分布情况,采用线路调查、走访调查以及区采药农的方法,进行野外调查记载、采集、室内鉴定、分类研究.运用ArcGIS软件分析分布区域特点.基本掌握了黑果枸杞的种类、分布范围及蕴藏量,并对其种质资源数量有了了解.为合理开发使用黑果枸杞提供了科学依据,避免因不合理的开发利用而导致对生态环境的破坏.
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气候变化背景下藏药黑果枸杞的潜在适生区分布预测
在气候变化背景下预测藏药黑果枸杞在当代及未来的适生区分布格局,为其资源可持续利用及GAP规范化种植提供参考.基于黑果枸杞149个分布数据及当代(1950-2000年)和未来(21世纪20-80年代)的气候数据,同时考虑3种温室气体排放场景,应用大墒模型(Maxent)和地理信息系统(ArcGIS 10.3.1)软件,定量地预测了黑果枸杞在我国的潜在适生区及其适生等级.发现:①黑果枸杞的当代适生区主要分布于我国新疆、青海、甘肃、内蒙古、宁夏,陕西、山西、西藏境内也发现分布区;②黑果枸杞当代适生区总面积为284.506 949×104 km2,占中国国土面积的29.6%;③相对稳定区域为总适生区的25.2%;④气候变化背景下,相较于当代,其在21世纪20-80年代的适生区总面积均有不同程度的减少,但是中度适生区又有不同程度的增加.气候变化对黑果枸杞适生区总面积及生境适宜度均会产生不同程度的双面影响.通过以气候变化为主导因素的黑果枸杞潜在适生区分布预测,可为今后科学的保护、开发与利用黑果枸杞资源提供战略性指导.
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酒泉地区黑果枸杞资源调查
目的 调查酒泉地区黑果枸杞资源现状,为黑果枸杞资源的合理开发、有效保护提供科学依据.方法 查阅文献、野外调查、现地样方取样,统计分析等.结果 初步掌握了酒泉地区黑果枸杞资源的分布区域、蕴藏量、年允收量.结论 酒泉地区黑果枸杞资源十分丰富,主要分布于敦煌市、瓜州县、玉门市、金塔县.此调查为黑果枸杞的研究、开发与利用提供参考.
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藏药黑果枸杞对运动疲劳小鼠的缓解作用
目的 研究藏药黑果枸杞水煎液对运动疲劳小鼠的影响.方法 按体重将小鼠随机分为5组:低、中、高3个剂量实验组(黑果枸杞:3,6,12 mg·g-1),对照组(红牛0.02 mL·g-1)和空白组(蒸馏水0.02 mL·g-1),每组40只,连续灌胃给药30 d.末次给药1h后,采取负重(体重的4％)在(25±2)℃C水中游泳40 min,造成疲劳,通过力竭游泳建立小鼠疲劳模型.通过试剂盒法测定肌糖原和肝糖原;以全自动生化仪测定泳前、泳后即刻和泳后恢复30 min后小鼠血糖、血清尿素氮、乳酸等生化指标.结果 与空白组的力竭游泳时间为(2.98±0.56)h相比,中、高2个剂量实验组分别为(3.94±0.61),(4.37±0.72)h,实验组可显著延长小鼠力竭游泳时间,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白组的血糖、血清尿素氮、乳酸含量分别为(6.33±1.35),(8.92±0.14),(10.27±1.45) mmol· L-1相比,高剂量实验组泳后恢复30 min,还可明显增加小鼠血糖含量(8.15±1.28) mmol·L-1,降低血清尿素氮水平(7.04±1.34)mmol·L-1,减少乳酸(7.05±0.47) mmol·L-1的产生,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 藏药黑果枸杞对小鼠运动疲劳有一定的缓解作用.
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藏药黑果枸杞对蟾蜍离体腓肠肌收缩功能的影响
目的 研究藏药黑果枸杞对电刺激蟾蜍离体腓肠肌收缩功能的影响.方法 取20条蟾蜍腓肠肌,随机将其分为4组:对照组和高、中、低3个剂量实验组,每组5条.对照组腓肠肌浸泡在25 mL任氏液中,实验组腓肠肌分别浸泡在终浓度为1.2,0.6,0.3g· mL-1的黑果枸杞水煎液25 mL中,15 min后取出腓肠肌.用脉冲式电流刺激腓肠肌,以生物机能分析系统记录收缩幅度达大收缩幅度50％和10％所需要的时间(T50％和T10％),用无钙任氏液替代普通任氏液,并加入钙通道阻断药氯化铬重复实验.结果 对照组和低、中、高3个剂量实验组腓肠肌的阈刺激强度分别为(0.30±0.02),(0.35±0.04),(0.40 +0.03),(0.46±0.08)V;这4组的腓肠肌的饱和刺激强度分别为(1.00±0.05),(1.10±0.08),(1.20±0.04),(1.28±0.02)V.腓肠肌达大肌肉收缩幅度所需时间:这4组分别为(235.00±3.47),(218.00±5.25),(205.00±6.24),(176.00±3.87)s.这4组的T50％分别为(125.00±3.45),(134.00±3.42),(254.00±2.59),(304.00±3.79)s;这4组的T10％分别为(268.00+7.09),(380.00±6.14),(521.00±7.74),(552.00±7.73)S.3个剂量实验组与对照组比较,以上全部指标差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).加入钙通道阻断药氯化铬后,该缓解作用明显降低.结论 藏药黑果枸杞可增强蟾蜍离体腓肠肌的收缩能力,对电刺激引发的收缩疲劳有缓解作用,其作用机制可能与激动“钙库”,促进钙离子内流,增加细胞内钙离子浓度有关.
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黑果枸杞生理活性成分及作用研究进展
黑果枸杞是药食两用的天然功能性食品,在中国民族医药中占有重要地位.黑果枸杞含有花色苷、原花青素、多糖和黄酮等多种生理活性成分,可以有效清除自由基,抑制脂质过氧化反应,保护细胞免受损伤,具有抗氧化、抗疲劳、延缓衰老、降血糖、降血脂、预防动脉粥样硬化、增强免疫等作用.本文将对其生理活性成分及作用进行综述.
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黑果枸杞颗粒成型工艺研究
目的:优选黑果枸杞颗粒剂佳成型工艺.方法:以吸湿率、成型率、溶化性、流动性为指标,采用单因素实验筛选辅料种类,通过L9(34)正交实验优化成型工艺.结果:黑果枸杞颗粒佳处方为主药-辅料(1∶0.95),辅料比例为微晶纤维素-糊精-甘露醇-硫酸钙(0.40∶ 0.40∶ 0.10∶ 0.05),润湿剂为3％ PVPK30乙醇溶液(85％),所得颗粒剂成型率高,临界相对湿度(CRH)约为65％.结论:该颗粒剂所选辅料合理,制备工艺稳定可靠,可为黑果枸杞颗粒的工业化生产提供依据.
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黑果枸杞内生真菌R43的次生代谢产物的研究
目的:对分离自黑果构杞根部的内生真菌R43进行鉴定,并对其发酵物的化学成分进行研究.方法:采用大米固体培养基对R43进行发酵;根据形态学特征和ITS序列对菌株R43进行鉴定;采用各种色谱方法分离乙酸乙酯提取物中的化学成分,并根据化合物的波谱数据确定结构.结果:经形态学特征及ITS序列鉴定菌株R43为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis).从其发酵产物中分离得到6个化合物,分别为rubrofusarin B(1),campyrone A(2),asperpyrones A(3),2,5-二羟基-苯乙酸(4),麦角甾醇(5),甘露醇(6).结论:化合物4为首次从真菌发酵产物中分离得到.化合物1对大肠杆菌有很好的抑制活性,小抑菌浓度为1.95 μg· mL-.
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黑果枸杞内生真菌E21菌株次生代谢产物的研究
目的:研究黑果枸杞根部的内生真菌E21次生代谢产物.方法:利用固体大米培养基对该菌株进行发酵培养,采用柱色谱以及重结晶等方法分离化合物.结果:经形态学特征及ITS序列分析结果鉴定菌株E21为白耙齿菌Irpex lacteus.从其发酵物中分离得到4个化合物,分别为monacolin K,dehydromonacolin K,5α,8α-环二氧麦角甾-6,22-二烯-31-醇和麦角甾醇,其中monacolin K和dehydromonacolin K首次从白耙齿菌Irpex lacteus中分离得到.结论:monacolin K对革兰阴性菌和革兰阳性菌都具有很好的抑菌活性,而dehydromonacolin K仅对枯草芽孢杆菌具有一定的抑菌活性.
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黑果枸杞原花青素合成相关无色花色素还原酶基因和花青素还原酶基因的克隆及表达分析
原花青素是黑果枸杞中一类重要的植化产物,但其生物合成机制仍不清楚.本研究利用黑果枸杞EST数据库,克隆了无色花色素还原酶基因(LrLAR)和花青素还原酶基因(LrANR).PCR结果表明,LrLAR和LrANR分别由333个氨基酸残基、338个氨基酸残基组成的蛋白编码.进化分析表明,相应蛋白LrLAR、LrANR分别聚类于LAR和ANR簇.实时定量PCR结果表明,从果实未成熟时期到变色期,LrLAR、LrANR的表达量均急剧上升,但在随后的发育时期中逐渐下降;与在果实中相比,在嫩叶、成熟叶、茎、根中,两基因的表达量极低.植化分析发现,果实中总原花青素含量高于嫩叶、成熟叶、茎、根中的含量,并且在果实成熟过程中呈现先增加后基本趋于稳定的趋势.本研究将为揭示黑果枸杞原花青素生物合成机制及促进其工程改良奠定基础.
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黑果枸杞果实化学成分研究
目的 研究黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)果实的化学成分及其对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤PC12细胞的保护作用.方法 采用DI01型大孔吸附树脂、硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱色谱和制备高效液相色谱等多种色谱方法分离纯化,根据理化常数以及NMR等波谱学方法鉴定其结构,并采用MTT法测定其对OGD损伤的PC12细胞的保护作用.结果 从黑果枸杞果实的体积分数65％乙醇提取物中共分离得到了11个化合物,分别是:p-hydroxyphenethyl trans-ferulate(1),山柰酚-3-0-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside)(2),槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetin3-O-β-D-glucopyranoside)(3),紫丁香苷(syringin) (4),槲皮素(5),咖啡酸乙酯(6),p-香豆酸(7),阿魏酸(8),2,6-bis(1-phe-nylethyl) phenol(9),正三十二烷(10)和胡萝卜苷(11).结论 其中化合物1～4,6,9和10为首次从该种植物中分离得到;化合物1～8对OGD损伤的PC12细胞有一定的保护作用.
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藏药黑果枸杞内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究
目的 从藏药黑果枸杞中分离和鉴定内生真菌,并对其抑菌活性进行研究,旨在从该植物中获得强抑菌活性的菌株,为寻找新型抑菌活性物质提供新的资源.方法 以新鲜黑果枸杞为材料,采用组织分离法从其根、茎、叶中分离内生真菌,依据形态进行初步鉴定；采用滤纸片法测定黑果枸杞内生真菌次生代谢产物的抑菌活性.结果 从黑果枸杞的根、茎、叶中,共分离得到内生真菌81株,其中常态下分离得到60株,高盐条件下分离得到21株.81株内生真菌经鉴定属于7目,10科,13属,抑菌活性测试表明,高盐条件下得到的内生真菌代谢产物活性明显高于一般条件下的,特别是E21菌株平均抑菌圈直径为26～31 mm.结论 采用模拟植物生长环境的方法分离内生真菌,对于特异性菌株的分离具有十分重要的意义.
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黑果枸杞的生物活性研究进展
黑果枸杞具有多种生物活性,本文以黑果枸杞、生物活性、药理作用为关键词,检索了2000-2013年中国知网、万方数据、维普等数据库关于黑果枸杞的文献,综述了黑果枸杞的生物活性研究成果,并展望其发展前景.
