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柴胡皂苷d对SH-SY5Y细胞生长增殖的影响
目的 初步探讨不同浓度的柴胡皂苷d(SSd)对SH-SY5Y细胞生长增殖水平的影响.方法 体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,分别以0～ 16 μmol/L SSd作用于SH-SY5Y细胞48 h,四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的SSd对SH-SY5Y细胞生长增殖水平的影响,酶标仪检测各组吸光度.倒置显微镜下观察各组细胞数目、形态及活性的变化.结果 与对照组相比,2～6μmol/L SSd作用48 h对SH-SY5Y细胞的生长增殖没有明显影响;8～16 μmol/LSSd对SH-SY5Y细胞生长增殖具有明显的抑制作用,并且随着SSd浓度的升高,抑制作用不断增强.结论 一定浓度的SSd对SH-SY5Y细胞的生长增殖水平有明显的抑制作用.
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黑柴胡质量标准
目的:修订和提高黑柴胡药材的质量标准.方法:采用生药学研究考察不同黑柴胡药材的横切面显微特征和粉末特征,依据2010年版《中国药典》附录药品标准研究方法对10批黑柴胡药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物进行检查,并测定活性成分含量.结果:修订了黑柴胡药材的性状特征和显微特征;建立了TLC鉴别黑柴胡的方法;黑柴胡的水分限度≤10.0％,总灰分≤9.0％,酸不溶性灰分≤3.1％,浸出物的含量≥15％,柴胡皂苷a和d的总质量分数≥0.2％.结论:完善了黑柴胡药材的质量标准,可作为该药材的修订内容.
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生长期不同施肥方法对柴胡中柴胡皂苷a、d含量的影响
目的:通过采用HPLC-ELSD法测定不同施肥柴胡中柴胡皂苷a、d的含量,为优选施肥方案提供一定的依据.方法:采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Agilent TC-C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)柱,以水-乙腈(50:50)为流动相,检测器为蒸发光散射检测器,飘移管温度93℃;空气流速2.5 L·min-1;柱温20℃.结果:确定了柴胡的施肥方案.结论:此方法简单、准确、重复性好,通过柴胡皂苷a、d的变化为优选柴胡施肥方法提供依据.
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竹叶柴胡根中皂苷类成分的薄层鉴别及含量测定
目的:研究竹叶柴胡根中的皂苷类成分,为其入药提供科学依据.方法:采用薄层色谱法对皂苷类成分进行定性鉴别,并采用高效液相色谱法首次对竹叶柴胡根中皂苷类成分进行含量测定,用C18(4.60 mm× 150 mm,5μm)柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,检测波长210 nm,流速0.8 mL·min-1,柱温35℃,进样量10 μL.结果:竹叶柴胡根中含有皂苷类成分.柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为440～8 800 ng(r=0.999 7),488 ～9 760 ng(r =0.999 2)线性关系良好,平均加样回收率(n=6)分别为99.88％(RSD 0.41％),100.23％(RSD 0.46％).样品中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的总量在0.48％～1.08％.结论:竹叶柴胡全草入药具有其科学性.
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樟帮特色酒润麸炒柴胡的炮制工艺优化
目的:优选樟帮酒润麸炒柴胡的炮制工艺,为这一地方特色炮制品的规范化生产及推广应用提供参考.方法:以柴胡皂苷a,d质量分数及血清胃泌素质量浓度的综合评分为指标,通过正交试验考察麦麸用量、黄酒用量、炒制温度、炒制时间对柴胡酒润麸炒工艺的影响.采用HPLC测定柴胡皂苷a,d含量,流动相乙腈-水(35:65),检测波长210 nm.采用三因素复合法复制脾气虚大鼠模型,给药14 d后利用放射免疫法测定血清胃泌素含量.结果:酒麸柴胡的佳炮制工艺为麦麸用量15％,黄酒用量15％,炒制温度100℃,炒制时间7 min,其中黄酒用量、炒制温度、炒制时间对其炮制工艺有显著性影响.柴胡皂苷a,d质量分数及血清胃泌素质量浓度分别为0.077％,0.683％,73.56 ng·L-1.结论:优选的炮制工艺合理可行、重复性好,可为酒麸柴胡的工业化制备提供参考.
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多指标正交试验优选鳖血柴胡的炮制工艺
目的:优选鳖血柴胡的炮制工艺.方法:以柴胡皂苷a,c,d及醇溶性浸出物含量的综合评分为指标,通过正交试验考察炮制时间、鳖血用量、炮制温度对鳖血柴胡炮制工艺的影响.采用HPLC测定柴胡皂苷a,c,d的含量,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0 ～ 50 min,25％ ～90％ A;50 ～55 min,90％A),检测波长210 nm.结果:炒制时间对炮制工艺具有显著性影响.佳炮制工艺为150℃炮制10 min,加鳖血量0.05 mL·g-1.醇溶性浸出物及柴胡皂苷a,c,d质量分数分别为12.42％,0.85％,0.23％,0.90％.结论:优选的炮制工艺合理可靠、重复性好,为规范鳖血柴胡饮片的炮制加工提供参考.
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栽培与野生北柴胡质量比较分析
目的 以河北承德地区栽培的北柴胡和北京昌平地区野生的北柴胡为样本,探讨北柴胡栽培品与野生品的质量差异以及北柴胡适宜的采收期.方法 主要以柴胡皂苷a、d的含量以及北柴胡醇溶性浸出物为指标,采用高效液相色谱法为分析方法.结果 所有样品醇溶性浸出物及柴胡皂苷a、d总含量均符合2015年版《中国药典》的要求.醇溶性浸出物在春季野生北柴胡中含量高,与栽培品差异不大.柴胡皂苷a及柴胡皂苷d在春季栽培北柴胡中均含量高.栽培品与野生品中柴胡皂苷a、d的含量,春季采收品均高于秋季采收品.结论 野生北柴胡与栽培北柴胡柴胡皂苷a、d含量差异较大,栽培品含量显著高于野生品以及药典要求,可替代野生北柴胡使用.建议在春季对北柴胡进行采收.
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HPLC同时测定参积护胃颗粒中积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d含量
目的 建立参积护胃颗粒中积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d含量测定的HPLC分析方法.方法 采用广州研创C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-磷酸盐缓冲液(含磷酸二氢钾8.34‰、磷酸氢二钾0.87‰),梯度洗脱(0～15 min,20％A;15～30 min,20％→40％A;30～42 min,40％A;42～45 min,40％→48％A;45～50 min,48％A;50～70 min,48％→50％A),流速1.0 mL/min,检测波长210 nm,柱温30℃.结果 积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d分别在0.173～2.770μg(r=0.9999)、0.021～1.320μg(r=0.9992)、0.151～9.660μg(r=0.9993)范围内呈良好线性关系.积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d平均加样回收率分别为96.25％、97.02％、97.84％,RSD分别为2.31％、4.51％、1.87％.结论 该含量测定方法简便、分离效果好、专属性强,能同时测定参积护胃颗粒中积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d的含量,为参积护胃颗粒质量标准的完善提供依据.
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柴胡皂苷d抗肝纤维化大鼠脂质过氧化作用的研究
目的:探讨柴胡皂苷d(SSd)对肝纤维化过程中脂质过氧化的影响.方法:采用腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)10 mg·kg-1诱导大鼠肝纤维化,以柴胡皂苷d(1.8 mg·kg-1)同时预防给药4周,检测正常组、模型组和SSd组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、IV型胶原(Ⅳ-c)及丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及肝组织中MDA的含量和SOD的活性.结果:SSd能显著降低肝纤维化大鼠血清ALT,AST水平和HA,LN,Ⅳ-C的含量,并可提高肝组织中SOD的活性,降低血清和肝组织中的MDA的含量.结论:SSd具有很明显的保护肝细胞、抗肝纤维化的作用,其机制可能与抗脂质过氧化有关.
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锌硼钼配施对北柴胡产量及柴胡皂苷a,d含量的影响
采用“3414”肥料效应试验方案,对北柴胡进行不同配比的锌硼钼配施处理,通过测定北柴胡干物质积累量和柴胡皂苷a,d含量动态变化以及北柴胡产量,考察不同浓度的锌(Zn)硼(B)钼(Mo)配施对北柴胡产量及柴胡皂苷a,d含量的影响.结果发现适宜配比的锌硼钼配施对北柴胡干物质积累及分配有积极的调节作用,处理Zn2B2Mo3不仅能促进干物质积累,还利于干物质有效地向地下部分转移;一定范围内,单施Zn,Mo肥均能够增加北柴胡根部的产量,处理Zn2B2Mo1的产量为所有处理中的大值.回归分析结果表明:适当调整微肥配施,按Zn48.45g· hm-2,B 355.05g·hm-2,Mo86.40g·hm-2的配方,北柴胡能够获得3 313.05 kg·hm-2的产量;处理Zn2B3Mo2的锌硼钼配比有利于北柴胡根部柴胡皂苷a,d总量的增加,回归分析结果表明:佳微肥施肥量为Zn36.15g·hm-2,B 343.05g·hm-2,Mo106.35g·hm-2,此配方下,柴胡皂苷a,d总量能够达到1.23％.该研究首次发现适宜配比的锌硼钼配施能够提高北柴胡的根部产量,并能够促进柴胡皂苷a,d的积累.
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柴胡皂苷对芍药苷在Caco-2细胞模型中吸收转运的影响
目的:研究柴胡皂苷a,d对芍药苷在Caco-2细胞模型中转运的影响.方法:用超高压液相法测定药物浓度,计算表观渗透系数,比较不同浓度芍药苷溶液、及芍药苷配伍柴胡皂苷a,d后在Caco-2细胞模型中双向转运的差别；电阻仪测定电阻,比较试验前后细胞电阻的差异.结果:芍药苷通过Caco-2细胞单层的转运量4h内随时间延长呈线性增大,其吸收渗透系数较小,浓度为20,50,100 μmol·L-1时,吸收渗透系数分别为(0.98±0.10)×10-6,(0.92±0.09) ×10-6,(0.89±0.04)×10-6 cm·s-1；芍药苷与柴胡皂苷a,d配伍后,吸收渗透系数与单体比较分别增加了2.37,2.54倍,且试验后细胞电阻有显著降低.结论:柴胡皂苷a,d能促进芍药苷的肠道吸收,可能与柴胡皂苷能打开Caco-2细胞间的紧密连接有关.
关键词： 芍药苷 柴胡皂苷A 柴胡皂苷d Caco-2细胞单层模型 -
柴胡皂苷D对儿童非酒精性脂肪肝病脂代谢和免疫紊乱的调节作用及机制研究
目的 探讨柴胡皂苷D(Saikosaponin D,SSd)对儿童非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)脂代谢和免疫紊乱的作用及作用机制.方法 用游离脂肪酸(free fat acid,FFA)混合物复制NAFLD体外模型,用SSd处理细胞,CCK8法检测L02细胞活性,流式检测细胞凋亡情况,油红O染色检测脂质堆积情况,Western blot法检测脂质合成分解标记蛋白和Th1/Th2细胞因子的表达.结果 SSd浓度为40μg/mL时,细胞活性明显降低,因此,选择4、10、20μg/mL三个剂量进行后续实验.SSd可明显抑制FFA诱导的细胞凋亡,并体现量效关系.同时,SSd能明显减弱FFA对脂质堆积和脂质合成标记蛋白(SREBP-1c、FAS和PPAR-γ)表达的促进作用,并能上调脂质分解标记蛋白(CPT-1、PPARα和ACOX1)表达.结论 SSd可明显减弱FFA对Th1细胞因子(IFN-γ、TNF-α)表达的促进作用,并促进Th2细胞因子(IL-10、IL-4)表达,并具有量效关系,提示SSd能通过调控脂质合成分解蛋白和Th1/Th2免疫平衡调节NAFLD的脂代谢和免疫紊乱.
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柴胡皂苷d对活化的HSC-T6细胞MMP-1、TIMP-1表达的影响及其分子机制
目的:研究柴胡皂苷d(saikosaponin-d,SSd) 对活化的HSC-T6细胞内基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响及其相关分子机制,探讨植物雌激素对肝纤维化的作用机制,为临床应用植物雌激素提供理论依据.方法:体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6,细胞用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基培养种板,细胞贴壁后加入雌激素受体阻断剂(1 μmol/L)或P38 MAPK阻断剂SB203580(50 μmol/L)预处理1h后,加入SSd(5 μmol/L)或雌二醇(1μmol/L)孵育24 h.采用ELISA法检测细胞培养上清液中的一型胶原(collagen type l,COL-l)、MMP-1、TIMP-1的含量,Western blot法检测细胞MMP-1、TIMP-1、P38、PP38的表达.结果:与对照组(Control)比较,SSd、E2单独给药组COL-1(140.95±12.14,143.58±4.81 vs 198.98±15.08)、TIMP-1(0.23±0.01,0.21 ±0.01 vs 0.31±0.01)、P-P38(0.51±0.14,0.52±0.12 vs 1.00+0.11)明显降低(P＜0.01),MMP-1明显升高(0.0127±0.0008,0.0116±0.0004 vs 0.0049±0.0001,P＜0.01).抑制剂组COL-1、TIMP-1、P-P38较SSd、E2单独给药组明显升高(P＜0.01),MMP-1明显降低(P＜0.01).我们采用P38阻断剂SB203580处理细胞,药物作用24 h后,SB203580组与对照组相比,MMP-1蛋白表达明显增高(3.58 ±0.35 vs 1.00±0.15,P＜0.01),TIMP-1蛋白表达明显降低(0.52±0.14 vs 1.00±0.18,P＜0.05).结论:SSd能够通过ERβ介导的效应抑制P38MAPK的激活,进而调节其下游的MMP-1、TIMP-1的表达,促进细胞外基质的降解,达到抗纤维化的作用.
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柴胡皂苷 d在肝癌模型大鼠体内的药效学评价
目的：评价柴胡皂苷d在二乙基亚硝胺诱发的肝癌模型大鼠体内的药效学。方法将60只建模成功的SD大鼠随机分为模型组、实验组及对照组，每组20只；20只未处理的 SD 大鼠为安慰剂组。实验组予以腹腔注射10 mg? kg－1柴胡皂苷d注射液，每日1次；对照组予以腹腔注射200 mg? kg－1沙利度胺注射液，每日1次；模型组和安慰剂组均腹腔注射0．9％氯化钠注射液2 mL，每日1次。所有干预均连续6周。干预结束后，用生化分析法检测大鼠肝功能指标，用免疫组化法检测增殖细胞核抗原（ PCNA）和MKI－67基因编码核蛋白（ Ki－67）表达，用HE染色法观察肝组织病理学形态。结果与模型组相比，实验组与对照组的肝功能指标较低（ P＜0．05）， PCNA和Ki－67表达较低（ P＜0．05）。与对照组相比，实验组中各项肝功指标较低（ P＜0．05）， PCNA和Ki－67表达较低（P＜0．05）。安慰剂组的肝病理切片显示正常的肝小叶结构完整，肝索周围规整，肝细胞索排列整齐，细胞核清晰。模型组显示癌灶呈现片状坏死，正常肝小叶结构被破坏，白色结节处为肝癌细胞。对照组仍能观察到少量恶性度较低以及局灶性坏死的癌细胞，并且有较少的核分裂象，实验组的肝组织肝血窦中有少量充血，极少的核分裂象。结论柴胡皂苷d能显著改善肝癌模型大鼠的肝功能，修复损伤的肝细胞，降低肝癌模型大鼠PCNA和Ki－67蛋白的表达量。
关键词： 柴胡皂苷d 肝癌 增殖细胞核抗原 MKI-67基因编码核蛋白 -
柴银口服液质量标准研究
目的：修订完善柴银口服液质量标准。方法：用薄层鉴别主药苦杏仁；用高效液相色谱法测定柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。结果：苦杏仁薄层鉴别方法具有专属性；柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在0.068～1.70μg （ r＝0.9999）和0.058～1.45μg（r＝0.9998）范围内线性关系良好，平均回收率分别为99.7％（RSD为0.75％）、96.5％（RSD为1.40％）。结论：所建立的方法合理可行，重复性好，可用于柴银口服液的质量控制。
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柴胡皂苷D通过调控mTORC信号通路诱发肝癌细胞自噬的作用研究
目的 本实验旨在研究和探讨柴胡皂苷D(SSD)诱发人肝癌细胞凋亡和自噬的作用以及可能的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SSD对肝癌细胞增殖活性的抑制作用;采用GFP荧光法检测肝癌细胞自噬体的形成;采用流式细胞术检测SSD对肝癌细胞凋亡的影响;采用Western blot的方法检测SSD对肝癌细胞中LC3Ⅱ、Beclin 1、p-S6K1蛋白表达的影响.结果 人肝癌细胞PLC、MHCC-97H、SMMC-7721以及Huh7经SSD干预48 h后,增殖活性明显受到抑制,且具有剂量依赖性.IC50分别为51.48,46.19,39.87和48.95 μ.mol·L-1.经SSD处理后,肝癌细胞出现自噬体的数量明显多于未处理的细胞(P＜0.05).经SSD+ 3-MA和SSD+ z-DEVD-fmk处理后,肝癌细胞死亡率明显低于仅用SSD处理的细胞死亡率(P＜0.05).经SSD作用后,肝癌细胞LC3Ⅱ和Beclin 1的表达量较未作处理的细胞明显上调,而p-S6K1蛋白表达量明显降低(P＜0.05).结论 SSD可以通过负调控mTORC信号传导通路诱发肝癌细胞自噬性死亡,从而发挥抗肿瘤活性.
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UHPLC法测定柴黄片中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量探讨
目的 分析UHPLC法测定柴黄片中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量的方法 及效果.方法 取柴黄片中成药制剂,采用Hypersil C18色谱柱法,以乙腈磷酸水溶液作为流动相,科学设定梯度洗脱值,控制流速,检验波长控制在210~254nm,柱温则为30~35℃.结果 柴黄片中柴胡皂苷a线性范围为0.98~5.67μg(r2=0.9991),柴胡皂苷d线性范围为0.059~0.052μg(r2=0.9997);柴胡皂苷a的平均加样回收率为98.0%,柴胡皂苷d的平均加样回收率为96.5%,柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的RSD分别为2.0%、1.8%.结论 UHPLC法不仅操作简便,同时安全可靠,具有良好的重复性,在柴黄片柴胡皂苷类物质含量测量中发挥重要作用,可为中成药方剂质量体系的完善提供更多依据.
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探索消乳散结胶囊中柴胡的鉴别及含量测定
目的 提升消乳散结胶囊质量标准,建立柴胡的薄层鉴别和含量测定方法 .方法对柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、柴胡对照药材进行薄层色谱鉴别,并以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d为指标进行液相色谱测定.结果 与结论 不能以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d作为消乳散结胶囊中柴胡的质控指标.
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HPLC柱前酸化法测定柴胡中柴胡皂苷a和d的条件优化研究
目的 优选HPLC柱前酸化法测定柴胡中柴胡皂苷a、d的酸化条件,通过对相关分析方法的评价,筛选优化的测定方法.方法 采用单因素及正交试验优选柴胡皂苷a、d前处理的酸化条件和佳提取条件,并对相关分析方法进行比较.结果 优选柴胡皂苷a、d的前处理酸化条件为:8％盐酸,30℃反应18 h,反应结束用8％ KOH溶液调pH至中性;样品佳提取条件为:取药材粉末0.5g,加8％氨甲醇溶液25 mL,超声提取3次,每次45 min;与相关文献方法比较表明本方法灵敏度高、分离度好、色谱图杂质峰较小、目标峰面积较大.结论 本实验建立的定量测定方法优于相关文献报道的其他方法,可作为柴胡质量控制的方法.
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采用一测多评法同时测定人参-柴胡药对及其制剂中5种皂苷成分
目的 采用一测多评法对临床常用药对人参-柴胡及其制剂中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d进行测定.方法 以人参皂苷Rg1为参照,建立该成分与其他4种皂苷成分间的相对校正因子,并以此计算其他4种皂苷成分的含量;同时采用外标法实测5种成分的含量进行对比.使用不同色谱柱确定相对保留时间,评价一测多评法在人参-柴胡药对中测定皂苷成分的可行性和准确性.结果 建立了5种皂苷成分的定量控制方法,方法学考察结果良好.采用一测多评法及外标法测定人参-柴胡药对、小柴胡汤、开心解郁方中5种皂苷成分,采用t检验分析,一测多评法与外标法结果无显著性差异.结论 一测多评法适用于常用药对人参-柴胡中皂苷成分的含量测定,可为复方中人参-柴胡药对有效成分的测定提供借鉴,以及为复方质量控制方法的建立提供参考.
