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成对关联刺激对脑缺血再灌注大鼠感觉运动功能和MAP-2、GAP-43表达的影响
目的 观察成对关联刺激(PAS)对局灶性脑缺血再灌注大鼠感觉运动功能恢复的影响,并从神经可塑性角度探讨其可能的作用机制.方法 选取90只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和PAS组,每组又分为7 d、14 d、28 d 3个亚组,每组10只.模型组和PAS组大鼠采用Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,假手术组除不插入线栓外,其余操作与模型组和PAS组相同.PAS组于术后第1天开始给予0.05 Hz、共90对脉冲的PAS治疗[其中周围神经电刺激(PNS)脉冲波宽200μs、刺激强度6 mA;经颅磁刺激(TMS)强度120％静息运动阈值(RMT)],持续30 min,每日1次;模型组和假手术组不予任何干预措施.术后第1、7、14、28天采用Garcia神经行为学评分评定大鼠感觉运动功能,各时间点治疗结束后,采用免疫组化和蛋白质印记法(Western blot)检测大鼠缺血半暗带区微管相关蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白43(GAP-43)的表达.结果 假手术组大鼠在各时间点均无神经功能损伤的体征.与假手术组同时间点比较,模型组、PAS组Garcia神经功能评分均较低(P<0.05).与模型组同时间点比较,PAS组术后7 d、14 d、28 d的Garcia神经功能评分均较高(P<0.05).与组内术后1 d比较,模型组、PAS组术后28 d的Garcia神经功能评分显著较高(P<0.05).与组内术后7 d比较,仅PAS组术后28 d的Garcia神经功能评分较高(P<0.05).与假手术组同时间点比较,模型组、PAS组GAP-43蛋白表达水平较高(P<0.05),MAP-2蛋白表达水平较低(P<0.05).与模型组同时间点比较,PAS组GAP-43、MAP-2蛋白表达水平较高(P<0.05).与组内术后7 d比较,PAS组术后14 d GAP-43、MAP-2蛋白表达水平较高(P<0.05).与组内术后14 d比较,PAS组术后28 d GAP-43、MAP-2蛋白表达水平降低(P<0.05).结论 PAS可促进缺血性脑卒中大鼠感觉运动功能的恢复,其机制可能与促进缺血半暗带区MAP-2、GAP-43的表达有关.
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头针配合康复训练对脑缺血再灌注损伤沙鼠模型神经可塑性相关蛋白MAP-2的调节作用
目的 观测头针配合康复训练对脑缺血再灌注损伤沙鼠模型神经可塑性相关蛋白MAP-2调节作用.方法 使用SPSS 19.0版统计软件生成的随机数字表将36只成功造模的脑缺血再灌注损伤模型雄性沙鼠随机分为模型组、康复训练组和头针配合康复训练组,每组12只.模型组不作任何干预措施,康复训练组采用康复训练治疗,头针配合康复训练组给予头部穴位电针刺激配合康复训练治疗;1日1次,共治疗14 d.分别于术后24 h、第7天和第14天,对各组沙鼠采用Bederson评分评定其神经功能,14 d后行缺血灶MAP-2表达检测,并进行统计学分析比较.结果 术后第7天,头针配合康复训练组的Bederson评分为(1.81±0.52)分,与模型组[(2.13±0.49)分]和康复训练组[(2.00±0.31)分]比较,组间差异均无统计学意义(P＞0.05);但第14天头针配合康复训练组的Bederson评分为(0.47±0.31)分,与模型组[(1.46±0.72)分]和康复训练组[(1.04±0.63)分]比较,头针配合康复训练组明显优于其余两组(P＜0.05),且康复训练组亦优于模型组(P＜0.05).MAP-2蛋白表达水平定量分析,头针配合康复训练组为(0.91±0.18),与模型组的(0.43±0.21)及康复训练组的(0.67±0.24)比较,组间差异均有统计学意义(P＜0.05),康复训练组较模型组也有一定优势(P＜0.05).结论 头针配合康复训练能更好地促进神经运动功能的恢复,并增加脑缺血再灌注损伤沙鼠缺血灶神经可塑性相关蛋白MAP-2的表达.
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运动训练对大鼠脑缺血再灌注后肢体功能恢复及微管相关蛋白含量的影响
目的研究运动训练对局部脑缺血再灌注大鼠的肢体功能恢复是否具有促进作用,并同时从分子角度探讨其相关机制.方法将大鼠随机分为运动组、对照组、假手术组及正常对照组,采用线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型.运动组大鼠术后每天进行游泳训练,采用前肢放置实验及平衡实验观察各组大鼠肢体功能恢复情况,并同时采用免疫组化法观察脑缺血周边区微管相关蛋白-2(MAP-2)的免疫活性强度.结果大鼠局部脑缺血再灌注后,运动组大鼠前肢放置实验评分及平衡实验评分均优于对照组,运动组大鼠前肢放置实验评分在术后第9,11,13,15,17,19,21,23及25天时,较对照组差异均有极显著性意义(P均<0.01);平衡实验评分在第7,9,11,13,17及19天时较对照组差异均有显著性意义(P<0.01或0.05);运动组大鼠皮层缺血周边区MAP-2表达水平亦高于对照组,在术后第14,28天时较对照组差异具有显著性意义(P均<0.05).结论运动训练能促进缺血再灌注大鼠的肢体功能恢复,其相关机制可能与上调缺血周边区MAP-2的表达有关.
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电针治疗对MCAO大鼠运动功能及梗死对侧大脑皮层GAP-43、MAP-2表达的影响
目的 观察局灶性脑梗死大鼠梗死对侧皮层不同时期生长相关蛋白GAP-43(growth associated protein-43)及微管相关蛋白MAP-2(microtubule associated protein-2)表达的动态变化,探讨电针调节GAP-43和MAP-2表达与神经可塑性及大鼠运动功能改善的可能关系.方法 60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n＝6) 、模型组和电针组,模型组和电针组再随机分为3 d 、7 d 、14 d 、28 d等4个亚组(剔除耗损或死亡,n＝6) .运用Longa改良线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion ,MCAO)大鼠模型,电针组取双侧"曲池""足三里"针灸治疗,余两组同一时间捆绑,不做治疗.采用Bederson法评定大鼠神经功能缺损情况、免疫组化法检测梗死对侧皮层GAP-43 、MAP-2的表达变化.结果 与模型组比较,电针组术后第3天神经功能缺损评分差异无统计学意义(P＞0.05) ,随着治疗时间的延长,术后第7 、14 、28天神经功能评分逐渐降低,差异有统计学意义(P ＜ 0.05).免疫组化结果显示,电针组术后第3天GAP-43 、MAP-2阳性细胞表达量与模型组比较差异无统计学意义(均 P＞0.05);术后第7 、14天GAP-43 、MAP-2阳性细胞表达量明显高于模型组(均 P＜0.05) ,术后第28天GAP-43阳性细胞表达量明显高于模型组(P＜0.05).结论电针治疗增加梗死对侧皮层MAP-2 、GAP-43的表达,改善了大鼠的运动功能,促进神经功能重塑,可能与加快启动梗死对侧皮层的保护机制、减少病灶对侧的远隔继发性损害有关.
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百事乐胶囊对慢性应激抑郁大鼠海马MAP-2表达的影响
目的:探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁大鼠海马神经元形态结构和功能的影响.方法:在48只SD大鼠中随机选择12只(雌雄各半)为正常组,不进行任何刺激,正常饲养.对其余大鼠给予21d慢性不可预见性应激造模,造模完成后将其随机分为模型组、百事乐组和氟西汀组,每组12只,雌雄各半.对各组大鼠予相应药物进行灌胃给药治疗,模型组大鼠灌胃蒸馏水,每天1次,灌胃给药1h后,再随机给予1种刺激,持续21d.分别于造模后及给药结束后测定各组大鼠糖水偏好度,尼氏染色观察大鼠海马神经元尼氏体,免疫组化检测大鼠海马MAP-2的表达.结果:与模型组相比,百事乐组和氯西汀组大鼠的糖水偏好度明显提高(P＜0.01);模型组大鼠海马尼氏体减少,颜色变浅,而百事乐组大鼠尼氏体丰富,胞质色深;免疫组化显示百事乐胶囊可提高抑郁大鼠海马MAP-2的平均光密度值,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:百事乐胶囊可通过增加尼氏小体的数量,调节海马MAP-2的表达以促进抑郁大鼠海马神经功能恢复.
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推拿对大鼠坐骨神经损伤后MAP-2和NF-M表达的影响
目的:研究推拿对坐骨神经损伤大鼠运动功能及MAP-2、NF-M表达的影响.方法:将40只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,建立坐骨神经损伤模型,通过按摩推拿手法模拟仪进行手法干预;观察各组大鼠斜板实验评分变化及L3-L5脊髓内MAP-2、NF-M表达情况.结果:模型组和模型对照组大鼠斜板实验评分低于正常组,NF-M、MAP-2积分光密度高于正常组,差异均有统计学意义(P＜0.05);推拿组大鼠斜板实验评分、NF-M、MAP-2积分光密度均高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);推拿组大鼠斜板实验评分与正常组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与正常组比较,推拿组NF-M、MAP-2积分光密度升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:推拿可提高坐骨神经损伤大鼠MAP-2、NF-M表达,改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能.
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高压氧对实验性脑梗死大鼠神经可塑性的影响
目的:探讨高压氧对缺血性脑梗死后神经可塑性的影响及其作用机制.方法:选择4～5个月龄雄性SD大鼠90只,随机分为假手术组、模型组和高压氧组.建立大脑中动脉闭塞模型,在术后3 h对HBO组大鼠开始高压氧治疗.以横木行走试验进行神经功能评分,高压氧治疗后第1,2周采用免疫组织化学技术检测微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(siial fibrillary acidic protein,GFAP)的分布,并用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-PCR)检测梗死灶用Map-2 mRNA及GFAP mRNA表达量的变化.结果:脑梗死后第2周,大鼠平衡木试验显示高压氧组大鼠肢体功能评分较模型组低.免疫组织化学及荧光定量PCR结果均显示:高压氧治疗第1周,高压氧组梗死灶周围Map-2及Map-2 mRNA表达较假手术组及模型组显著增加,GFAP及GFAP mRNA表达较模型组明显减少但仍比假手术组高;高压氧治疗第2周,高压氧组梗死灶周围Map-2及Map-2mRNA表达仍较假手术纽及模型组高,GFAP及GFAP mRNA表达仍较模型组明显减少但比假手术纽高.结论:缺血性脑梗死后,早期反复高压氧治疗可有效地改善肢体运动功能,并可通过促进Map-2以及抑制GFAP的表达促进缺血性脑梗死后神经的可塑性.
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微管相关蛋白2与神经元可塑性调节
微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)是一种热稳定的磷蛋白,属于结构性微管相关蛋白家族,主要在中枢神经系统神经元胞体和树突表达.MAP-2与微管连接促进微管的稳定,可能参与神经元发育、结构稳定、突起形成和突触可塑性调节.
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电针对脑缺血再灌注模型大鼠海马区F-actin、MAP-2表达的影响
目的：观察电针（EA）对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织中海马区F-actin、MAP-2表达的影响，探讨电针治疗缺血性脑卒中的作用机制。方法：选用54只雄性SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、电针组各18只；模型组和电针组采用改良Longa线栓法制作缺血再灌注大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠模型，电针组于脑缺血2小时再灌注后开始电针督脉“百会”、“神庭”穴；TTC染色观察动物脑组织梗塞情况及免疫印迹法检测大鼠左侧海马区F-actin、MAP-2蛋白表达情况。结果：①与模型组相比，电针组F-actin、MAP-2蛋白表达均增高（P<0.05）；②TTC染色显示，电针组大鼠梗塞面积显著小于模型组（P<0.05），说明经过电针治疗后，其脑组织病理改变减轻，脑部损伤有一定恢复。结论：电针干预后能显著增加大鼠海马区F-actin、MAP-2的表达，有利于脑缺血后突触重塑和神经细胞轴突的再生，从而促进脑卒中后神经功能恢复、改善认知功能。
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补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中β-APP和MAP-2表达的影响
目的 观察补肾益髓(BSYS)方及其拆方补肾(BS)和化痰活血(HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑和脊髓中β-淀粉样前体蛋白(β-APP)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的作用.方法 56只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(NC)、模型组(MO)、醋酸泼尼松组(PA)、梓醇组(CA)、补肾益髓组(BSYS)、补肾组(BS)和化痰活血组(HTHX),每组8只.对照药给予PA(6 mg/kg),CA(40 mg/kg);BSYS、BS和HTHX组分别以3.02 g,1.44 g和1.57 g生药/kg给药.NC及MO组以等量蒸馏水代替.每日1次,连续灌胃40 d.小鼠发病第25日(急性期)和第40日(缓解期)取脑和脊髓,采用免疫荧光(IF)法检测β-APP表达,免疫组化(IHC)法检测MAP-2的表达.结果 发病第25日和第40日,MO组小鼠脑β-APP表达较NC组显著上调(P＜0.001),而MAP-2表达则较NC组明显下调(P＜ 0.01或P＜0.001),与MO组比较,各治疗组(PA、CA、BSYS、BS和HTHX组)均可明显下调β-APP蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),上调MAP-2表达(P＜ 0.05或P＜0.01).其中发病第25日小鼠脑β-APP表达PA组效果优于CA、BS及HTHX组(P＜0.05).各组小鼠脊髓内β-APP、MAP-2表达变化趋势与脑相似.结论 BSYS方及其拆方均能减轻轴突损伤及促进其修复,尤以BSYS全方更为显著.
关键词： 补肾益髓方及其拆方 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 β-APP MAP-2 -
实验性癫痫大鼠齿状回中微管相关蛋白-2的变化及其在癫痫中的意义
目的:探讨实验性癫痫大鼠齿状回中微管相关蛋白-2(MAP-2)的变化及其在癫痫MFs出芽和突触重建中的意义.方法:建立海马快速电点燃模型,运用免疫组化方法研究齿状回中MAP-2在点燃不同阶段的动态变化,并结合尼氏染色和电镜观察阐明MAP-2的变化特点,探讨其原因及意义.结果:齿状回分子层颗粒细胞树突的MAP-2的免疫反应生于点燃后3夫明显增强,至14天达到高峰(P＜0.01),20～30天降至对照水平(P＜0.01).MAP-2的增加与齿门神经元的变性之间存在指数曲线相关关系(R2=0.9362).电镜下,分子层神经元树突内的微管于点燃后3天增多,14天明显增多,至30天已有崩解.还可见轴突分支出芽,神经末梢与树突形成多个突触.结论:MAP-2的过度表达在癫痫大鼠苔纤维出芽和突触重建过程中发挥了重要作用,而大量受损的齿门神经元对抑制性细胞广泛的去神经支配可能是其过度表达的启动因素.
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母源性丙烯酰胺暴露对子代鼠皮质神经元MAP-2与氧化应激的影响
目的:探讨母源性丙烯酰胺(acrylamide,ACR)暴露对子代鼠大脑皮质神经元MAP-2与氧化应激的影响.方法:SD孕鼠随机分为4组,自怀孕第6d至怀孕第19 d起对照组和实验组分别灌胃给药给予双蒸水和每日8,16和24 mg/kg ACR溶液.HE和尼氏染色观察子代鼠皮质神经元形态学改变,免疫组织化学和Western Blot检测子代鼠皮质神经元MAP-2的表达,应用试剂盒检测大脑皮质组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、还原谷胱甘肽(GSH).结果:(1)MAP-2表达:与对照组相比,实验组中、高剂量组MAP-2表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05),而低剂量组则差异不显著(P＞0.05).(2)氧化应激指标变化:与对照组相比,实验组中、高剂量组子代鼠大脑皮质组织中MDA含量显著升高,而T-SOD活力和GSH含量显著下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:丙烯酰胺致子代鼠神经元损伤的机制可能与其诱导氧化应激损伤有关.
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海马内注射 LPS 后诱导大鼠皮质星形胶质细胞活化和 PirB 的表达
目的:探讨海马内注射LPS(lipopolysaccharide,LPS)后,大鼠皮质神经元和星形胶质细胞PirB(paired-immunoglobulin-like receptor B)的表达变化.方法:成年SD大鼠,分为对照组和实验组,用免疫组织化学法检测大鼠脑皮质PirB的表达及星形胶质细胞GFAP的表达变化,免疫荧光双重标记技术,观察星形胶质细胞与PirB阳性细胞的共存.结果:PBS注射的对照组动物脑皮质Ⅴ层内可见PirB阳性神经元样细胞,呈圆形、卵圆形和锥体形,免疫反应产物呈棕色、主要位于细胞膜上；海马内注射LPS30d后,PirB阳性神经元样细胞和PirB阳性神经胶质样细胞主要分布于皮质Ⅳ、Ⅴ层,免疫反应产物位于胞质和突起内；另外,可见大鼠梨状皮质、内嗅皮质内GFAP阳性星形胶质细胞明显被激活,表现为细胞胞体相对增大,突起变粗.PirB分别和MAP-2、GFAP、CD11b免疫荧光双重标记染色显示:PirB和MAP-2阳性神经元的胞体存在共定位；PirB与GFAP阳性染色存在部分共定位,但未见PirB与CD11b阳性染色双标细胞.结论:LPS能诱导大鼠皮质星形胶质细胞活化和PirB蛋白表达上调,而且部分活化的星形胶质细胞表达PirB,PirB可能参与脑内炎症突触可塑性改变和学习记忆功能缺失的免疫调节.
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细胞外ATP对大鼠脊髓损伤后MAP-2表达及运动功能恢复的影响
目的 研究细胞外三磷酸腺苷(ATP)对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2(MAP-2)表达及运动功能恢复的影响.方法 选择健康成年Wistar大鼠110只,随机取10只作为正常对照组,其余100只制作成脊髓打击伤动物模型,然后分为A组(ATP组)和B组(阳性对照组),每组50只.伤后1、3、7、14、28 d取材,应用免疫组织化学方法观察MAP-2的表达;并用改良的Tarlov评分观察大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复情况.结果 脊髓损伤后14 d和28 d,A组大鼠MAP-2表达明显强于B组(P<0.05);伤后14 d和28 d,A组大鼠改良TaRLov评分明显优于B组(P<0.05).结论 细胞外ATP能促进大鼠脊髓损伤表达MAP-2,并能促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复.
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小鼠开放性脑损伤后MAP2/SDF1的表达与损伤时间推断的研究
目的 探讨小鼠开放性脑损伤后不同时间点微管结合蛋白(microtubule-associated prote-ins,MAP-2)和基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)的表达,为法医实践中推断脑组织损伤时间提供科学的参考依据.方法 建立小鼠脑组织开放性脑损伤模型,应用免疫组织化学技术观察脑损伤后MAP-2和SDF-1在不同时间点的表达情况.结果 随着脑组织损伤时间的延长,MAP-2的表达下调,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),脑组织损失3 d时达低峰,14 d基本达正常水平,但仍低于对照组.脑损伤后SDF-1表达上调,呈持续升高状态,14 d仍高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 小鼠开放性脑损伤后MAP-2和SDF-1的表达呈一定的时序性变化规律,可作为推断脑损伤时间的参考指标之一.
